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Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用 被引量：1
1
作者 何宇祺 林宗龙 +5 位作者 王硕 陈立 王洪超 施晓会 豆晓伟 李青 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期262-270,共9页
目的:探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSFcNs)。将CSF-cNs悬浮培养并传代。(2)... 目的:探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSFcNs)。将CSF-cNs悬浮培养并传代。(2)将CSF-cNs传至第2代,培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测CSF-cNs光密度(optical density,OD)值,培养5d时应用免疫荧光检测CSF-cNs特异性标志物多囊肾病2型1通道蛋白(polycystic kidney disease 2 like 1,PKD2L1)与神经干细胞标志物Nestin、Sox2及增殖标志物Ki67共表达情况。(3)将第3代CSF-cNs分为4组:对照组、Jagged-1组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯[(3,5-difluorophenylacetyl)-L-alanyl-L-2-phenylglycine tert-butyl ester,DAPT]组。对照组采用无血清神经培养液培养;Jagged-1组采用无血清神经培养液+5μmol/L Jagged-1培养;DMSO组采用无血清神经培养液+0.05%DMSO培养;DAPT组采用无血清神经培养液+50μmol/L DAPT培养。培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测各组CSF-cNs的OD值;培养5d时应用Western Blot检测各组CSF-cNs PKD2L1、Notch1、Notch受体胞内段(NICD)、Hes1、β-actin蛋白表达情况,应用免疫荧光法检测各组CSF-cNs增殖标志物Ki67蛋白荧光强度(arbitrary unit,A.U.)值。结果:(1)提取的细胞经流式细胞分选后得到的CSF-cNs纯度为(94.5±2.03)%,存活率为(93.64±2.35)%。CSF-cNs可连续传代并形成神经球。(2)第2代CSF-cNs培养0h、24h、48h、72h及96h时的OD值具有统计学差异(P<0.05),96h与120h的OD值无统计学差异(P=0.44)。CSF-cNs中PKD2L1可与Nestin、Sox2或Ki67共表达。(3)第3代CSF-CNS分组处理后各组细胞PKD2L1蛋白表达量无统计学差异(P=0.27)。Jagged-1组细胞Notch1、NICD、Hes1蛋白表达量均较对照组升高(P<0.01);72h、96h、120h的OD值较对照组均显著性升高(P_(72h)=0.03,P_(96h)=0. 展开更多
关键词 触液神经元 神经干细胞 Notch1信号通路 增殖 大鼠
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