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含G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因载体的构建 被引量：2
1
作者 张翠珍 蒋学俊 +2 位作者 钱航 张鹏 杨汉东 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第10期1830-1833,共4页
目的:克隆人G0S2基因启动子并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究G0S2基因转录调控提供质粒。方法:利用PCR技术从人胚肾293A细胞基因组DNA中克隆获得G0S2基因启动子的DNA片段,将其克隆至pGL3-basic表达载体中,并转化人大肠杆菌DH5α... 目的:克隆人G0S2基因启动子并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究G0S2基因转录调控提供质粒。方法:利用PCR技术从人胚肾293A细胞基因组DNA中克隆获得G0S2基因启动子的DNA片段,将其克隆至pGL3-basic表达载体中,并转化人大肠杆菌DH5α,经限制性内切酶酶切、PCR及测序鉴定得到确认;将重组载体质粒与半乳糖苷酶表达质粒psV-β-Galactosidase共转染至大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),检测细胞中荧光素酶的活性。结果:pGL3-G0S2-Promoter重组质粒插入片段和相邻序列正确,克隆的G0S2基因片段有启动子活性(P<0.05)。结论:成功构建了pGL3-G0S2-Promoter报告基因质粒,为进一步研究G0S2基因的表达奠定了基础。 展开更多
关键词 G0S2基因 启动子 荧光素酶 报告基因质粒 G0S2
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核受体GCNF对H9C2心肌细胞的影响及作用机制 被引量：1
2
作者 万成 蒋学俊 +4 位作者 张鹏 陈俊 赵黎丙 闵新文 杨汉东 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2015年第2期199-203,共5页
目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制。方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染... 目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制。方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡水平,实时定量PCR及Western blot技术检测受体结合蛋白激酶2(RIPK2)和受体结合蛋白激酶3(RIPK3)的表达水平。结果:Ad-hGCNF腺病毒感染后,H9C2心肌细胞GCNF表达上调,亚细胞定位位于细胞核,细胞活力降低,凋亡水平显著增加,RIPK2和RIPK3表达水平均升高。结论:感染Ad-hGCNF腺病毒表达载体降低H9C2细胞活力,增加其凋亡水平,机制与RIPK2和RIPK3的表达上调有关。 展开更多
关键词 生殖细胞核因子 H9C2 表达载体 凋亡 RIPK2 RIPK3
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血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞G_0S_2mRNA表达的影响
3
作者 张翠珍 蒋学俊 +2 位作者 钱航 张鹏 杨汉东 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第4期502-506,564,共6页
目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 mRNA表达影响的时效关... 目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 mRNA表达影响的时效关系和量效关系;运用不同细胞信号通路阻断剂处理,研究PDGF-BB影响G0S2 mRNA表达的信号途径;转染含有G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-G0S2-Promotor,检测PDGF-BB对G0S2基因启动子活性的影响。结果:PDGF-BB能够增加平滑肌细胞G0S2 mRNA表达,PDGF-BB诱导VSMC表达G0S2mRNA在12h后达峰值[20ng/ml增加(2.83±0.81)倍;10ng/ml增加(2.99±0.12)倍,P<0.05],随后降低。p38MAPK和PI3K/AKT信号通路阻断剂可显著抑制PDGF-BB诱导的G0S2mRNA表达(P<0.05),并且PI3K/AKT信号通路阻断剂可以明显降低G0S2 mRNA的基础表达水平。荧光素酶活性分析显示,PDGF-BB可增强G0S2基因启动子活性(P<0.05)。结论:PDGF-BB上调VSMC中G0S2基因mRNA的表达,并且可以增强G0S2基因启动子活性,p38MAPK和PI3K/AKT通路可能介导了这种作用。 展开更多
关键词 血小板源性生长因子 G0S2基因 血管平滑肌细胞 细胞增殖
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