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人胎盘血间质干细胞分离培养 被引量：2
1
作者 朱美玲 胡燕芬 +4 位作者 温冠媚 雷俊霞 李浩威 陈汝光 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1743-1744,共2页
目的分离培养人胎盘血间质干细胞(hMSC),为hMSC探寻新来源。方法采用羟乙基淀粉(HES)方法分离、富集胎盘血有核细胞;DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC;流式细胞仪检测细胞表面标记;地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样... 目的分离培养人胎盘血间质干细胞(hMSC),为hMSC探寻新来源。方法采用羟乙基淀粉(HES)方法分离、富集胎盘血有核细胞;DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC;流式细胞仪检测细胞表面标记;地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下,生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞,阳性获得率2917%(7/24),该细胞传代培养达6个月以上;流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性;加入脂肪细胞诱导剂,细胞在形态上向脂肪细胞转化,胞内出现脂滴、脂泡,油红O阳性。结论人胎盘血可以分离培养出hMSC,是hMSC的重要来源。 展开更多
关键词 胎血 间质干细胞 细胞培养
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冻存时间对脐血造血细胞体外增殖潜能的影响 被引量：1
2
作者 朱美玲 陈汝光 +2 位作者 奚永志 刘永梅 彭丽珍 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期183-185,共3页
目的 :研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响。方法 :在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran 4 0 +10 %DMSO ,经梯度降温后置液氮深低温保存。采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增 ,... 目的 :研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响。方法 :在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran 4 0 +10 %DMSO ,经梯度降温后置液氮深低温保存。采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增 ,动态监测扩增潜能。结果 :将冻存 1个月、4个月脐血造血细胞体外扩增 5周 ,其总有核细胞分别被扩增了 (14 99.0± 115 .6 )倍和 (15 13.0± 110 .4 )倍 ,CFCs均于体外扩增的第 3周达到高峰 ,分别扩增了(5 3.8± 6 .3)倍和 (5 4 .8± 6 .7)倍 ,CD34+ 造血细胞于体外扩增的第 2周均达到高峰 ,分别扩增了 (6 3.8± 6 .1)倍和(6 2 .4± 5 .7)倍 ;统计分析冻存 1个月与 4个月后造血细胞扩增结果 ,不存在显著性差异 ,P >0 .0 5。结论 :在适宜深低温条件下冻存脐血造血细胞 ,在一定时间内 ,冻存时间的长短不会导致其增殖潜能下降。 展开更多
关键词 冻存时间 脐血造血细胞 体外增殖潜能 脐带血
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人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究 被引量：7
3
作者 朱美玲 那晓东 +6 位作者 雷俊霞 刘华 胡燕芬 黄玲惠 黄伟花 张秀明 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期1003-1008,共6页
目的 :研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性 ,探讨其在自体宫内基因转移 /治疗 (IUGT)领域的应用前景。方法 :采用L -DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞 (MSC) ;流式细胞仪技术检测细胞表面标记 ;地塞米松 /胰岛素等作为脂... 目的 :研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性 ,探讨其在自体宫内基因转移 /治疗 (IUGT)领域的应用前景。方法 :采用L -DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞 (MSC) ;流式细胞仪技术检测细胞表面标记 ;地塞米松 /胰岛素等作为脂肪细胞诱导液 ,β -甘油磷酸钠 /抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化 ;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC ,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性 ;F344新生大鼠肝内注射MSC ,免疫荧光检测 6周后不同组织器官中人MSC存在 ;非肥胖型糖尿病 /重症联合免疫缺陷性小鼠 (NOD/SCID)皮下注射MSC ,病理切片检测第 30d细胞体内成瘤性。结果 :3mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC ,细胞均一地表达CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6 ,不表达CD34、CD4 5、CD80、CD86、CD4 2a、HLA -DR分子 ,体外培养中具有成脂、成骨能力 ;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达 5 6 32 %± 3 2 8% ;在新生大鼠体内 ,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移 ,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论 :人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。 展开更多
关键词 胎血 间质干细胞 基因疗法 基因转移 水平
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脐血采分过程中微生物污染的调查
4
作者 胡燕芬 饶美琼 +2 位作者 邹翠贤 朱美玲 欧阳玲 《陕西医学检验》 2002年第1期16-17,共2页
目的　探讨不同脐血采分过程中微生物污染率。方法　脐血采集按美国脐血库标准操作规程(SOP) ;6 6份脐血同时按密闭式和开放式两种操作方式进行脐血造血细胞分离处理 ;采用全新型BACTEC90 5 0细菌培养系统对分离前、后脐血进行细菌和真... 目的　探讨不同脐血采分过程中微生物污染率。方法　脐血采集按美国脐血库标准操作规程(SOP) ;6 6份脐血同时按密闭式和开放式两种操作方式进行脐血造血细胞分离处理 ;采用全新型BACTEC90 5 0细菌培养系统对分离前、后脐血进行细菌和真菌培养。结果　脐血采集后细菌和真菌污染率分别为 3 .0 %、1 .5 % ;密闭式分离处理后细菌和真菌污染率分别增加到 6 .0 %、3 .0 % ;开放式分离处理后细菌和真菌污染率分别增加到 7.5 %和 3 .0 %。结论　脐血采分过程是导致脐血细胞微生物污染的重要原因 ,操作过程中必须严格执行消毒、隔离、灭菌技术和操作员管理制度以尽量降低污染率。 展开更多
关键词 脐血采集 微生物污染 分离 细菌 真菌 血库
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低温冻存对脐血造血细胞增殖潜能的影响
5
作者 朱美玲 伍新尧 +2 位作者 陈汝光 黄玲惠 胡燕芬 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期159-160,共2页
关键词 胎血 造血干细胞 低温保存 体外扩增 细胞增殖 脐血造血细胞增殖潜能
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脐血HLA-Ⅰ类抗原PCR-SSP分型的研究
6
作者 刘永梅 陈汝光 +2 位作者 朱美玲 黄玲惠 胡燕芬 《宁夏医学杂志》 CAS 2001年第11期643-645,共3页
目的　探讨PCR -SSP(聚合酶链反应 -序列特异性引物 )分型方法在脐血HLA -Ⅰ类抗原分型中的应用价值。方法　 5 3份脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞 ,单克隆抗体配型板作血清学分型 ,其中 38份脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR -SSP... 目的　探讨PCR -SSP(聚合酶链反应 -序列特异性引物 )分型方法在脐血HLA -Ⅰ类抗原分型中的应用价值。方法　 5 3份脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞 ,单克隆抗体配型板作血清学分型 ,其中 38份脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR -SSP基因分型 ,对两种方法分型结果进行对比研究。结果　 38份脐血中 ,HLA -A位点PCR -SSP方法与血清学分型方法结果符合率 10 0 % ,HLA -B位点血清学方法分型误差率为13 .2 % ,其中 1个抗原错误 (占 1.3 % ) ,9个抗原漏检 (占 11.8% )。脐血采集后 2 4小时内作血清学分型较理想 ,超过 2 4小时则半数以上不能进行血清学分型。抽提脐血DNA一次成功率 10 0 % ,不受时间限制。结论　在脐血HLA -Ⅰ类抗原分型中 ,PCR -SSP方法准确、省血、标本限制少 ,明显优于血清学方法 。 展开更多
关键词 胎血 HLA-I类抗原 血清学分型 PCR-SSP
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