智能建筑环境控制系统的照明与空调节能效果实证研究

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作者 吴明萱 张淞博 +3 位作者 孙玉卿 陈星 魏敏晨 杨彪 《建筑科学》 CSCD 北大核心 2024年第8期199-207,共9页

近年来有许多关于建筑智能控制系统节能减排的研究,但聚焦其实际应用的节能效果相关实证研究十分有限。本研究以深圳某办公楼14层实际智能化改造案例为研究对象,采用“A-B-A”的实证研究方法开展了为期92 d的实证实验。在实际场地安装... 近年来有许多关于建筑智能控制系统节能减排的研究,但聚焦其实际应用的节能效果相关实证研究十分有限。本研究以深圳某办公楼14层实际智能化改造案例为研究对象,采用“A-B-A”的实证研究方法开展了为期92 d的实证实验。在实际场地安装基于物联网和边缘计算的智能建筑环境控制系统后,设置对照组对其有效性进行科学验证:分别选取2022年7月—9月设置“A-B-A”3组实验条件进行对比,通过对人员存在、照明灯具和空调系统的运行时间数据进行收集和分析。实证研究结果表明,照明与空调分别可节能约25.98%和19.50%,具有可观的节能潜力和绿色效益。本研究可为国内外智能建筑节能提供有效、科学的实证样本。 展开更多

关键词 智能建筑 建筑节能 实证研究

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开放式办公空间天然光环境均衡性评估与精细化控制

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作者 张淞博 张冠华 +3 位作者 谭有恒 陈星 沈鹏元 杨彪 《照明工程学报》 2023年第5期153-160,共8页

开放式办公空间由于其大开间、大进深和用户需求矛盾的特点,产生了天然采光不足或不均衡的现象,如长时间关闭窗帘并使用人工照明等。为了提高开放式办公空间内天然采光质量并降低照明能耗,本文基于有效采光度和照度均匀度,提出了一种包... 开放式办公空间由于其大开间、大进深和用户需求矛盾的特点,产生了天然采光不足或不均衡的现象,如长时间关闭窗帘并使用人工照明等。为了提高开放式办公空间内天然采光质量并降低照明能耗,本文基于有效采光度和照度均匀度,提出了一种包含均衡性在内的天然光环境综合评估分数,选取深圳市内某开放式办公空间,并进行三维建模与室内天然光环境模拟,结果发现其天然光均衡性较差。本文设计了一种采光窗网格化控制与窗帘多方向控制相结合的采光遮阳精细化控制方法,通过对比分析目标办公空间优化前后的天然采光质量,可得出结论:在满足室内工作平面天然光需求的基础上,精细化控制模式下典型气象年全年天然光环境综合分数平均值可达到58.70分,相比于粗放式控制模式(18.95分)和手动控制模式(0.10分)有明显的提高。 展开更多

关键词 开放式办公空间 天然光 采光系统 遮阳系统 精细化控制

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嵌合抗原受体T细胞介绍及抗肿瘤临床应用 被引量：12

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作者 陈杰 王宇环 +2 位作者 罗成林 王慧琴 罗晓玲 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期228-235,共8页

过继性细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。随着技术的日趋成熟,已在多种实体瘤和血液肿瘤的临床治疗中取得较好疗效。其中,嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细... 过继性细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。随着技术的日趋成熟,已在多种实体瘤和血液肿瘤的临床治疗中取得较好疗效。其中,嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞技术是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。通过基因改造技术,效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的免疫细胞高,并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态。目前,CAR的信号域已从第一代的单一信号分子发展为包含CD28、4-1BB等共刺激分子的多信号结构域(第二、三代),临床应用广泛。但是,该技术也存在脱靶效应、插入突变等临床应用风险。该文将就CAR-T细胞技术在恶性肿瘤免疫治疗中的应用及可能存在的问题作一综述。 展开更多

关键词 嵌合抗原受体 基因改造 过继性免疫细胞治疗

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人乳头瘤状病毒感染与机体免疫的研究进展 被引量：7

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作者 赵静 黄浩 罗晓玲 《中国病毒病杂志》 CAS 2015年第2期157-160,共4页

人乳头瘤状病毒（human papilloma virus,HPV）是一类高度异质性的双链环状小分子DNA病毒,具有严格的嗜上皮特性,其整个生活周期都局限在上皮层,主要感染人类皮肤和黏膜,并引起相应部位上皮组织的增生性病变[1]。HPV在女性人群中感染率... 人乳头瘤状病毒（human papilloma virus,HPV）是一类高度异质性的双链环状小分子DNA病毒,具有严格的嗜上皮特性,其整个生活周期都局限在上皮层,主要感染人类皮肤和黏膜,并引起相应部位上皮组织的增生性病变[1]。HPV在女性人群中感染率极高, 展开更多

关键词 人乳头瘤状病毒 宫颈癌 细胞免疫 治疗性疫苗

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外周血液样本抗凝剂类型、保存时间和温度对CIK细胞培养的影响 被引量：5

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作者 王宇环 马飞 +4 位作者 付凡 魏宗科 董志瑜 朱利军 罗晓玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期382-386,共5页

目的探讨外周血液样本抗凝剂类型、保存时间和保存温度对细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞培养的影响,为自体免疫细胞治疗技术的外周血保存标准化提供实验依据。方法将抽取的4份60 m L外周血样本分别应用肝素钠、细胞保存液（枸橼酸钠）和... 目的探讨外周血液样本抗凝剂类型、保存时间和保存温度对细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞培养的影响,为自体免疫细胞治疗技术的外周血保存标准化提供实验依据。方法将抽取的4份60 m L外周血样本分别应用肝素钠、细胞保存液（枸橼酸钠）和EDTA抗凝剂抗凝,并分别存放于4、22、30℃的环境中,储存0、4、8、24 h,应用正交实验设计优选为12组,然后分离出单个核细胞分别诱导培养成CIK细胞,对比12组CIK细胞增殖效率及γ干扰素（IFN-γ）分泌量的变化。结果在CIK细胞培养过程中,EDTA组CIK细胞增殖不明显,肝素钠组和血液保存液组CIK细胞增殖明显,且肝素钠优于血液保存液;血液保存时间对CIK细胞培养影响不明显,但保存时间越长,细胞增殖效率越差,保存时间超过8 h的CIK细胞,其增殖效率在第16天以后明显降低。对培养时间在16 d内的CIK细胞,血液保存温度影响不显著,但CIK细胞培养16 d之后,22℃保存条件下,CIK细胞增殖效率最高,4℃次之,30℃最差。结论肝素钠和血液保存液均可用于CIK细胞培养的血液抗凝;保存时间在24 h内,温度在4℃~30℃之间保存的血液,均可用于CIK细胞培养。 展开更多

关键词 细胞因子诱导的杀伤细胞 抗凝剂 保存温度 保存时间

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肿瘤特异性γ δ T细胞扩增体系的建立及其抗肿瘤活性研究 被引量：2

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作者 邹畅 赵盼 +3 位作者 周文斌 付凡 韩香华 郭吉楠 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第10期1540-1543,共4页

目的:建立一种体外诱导肿瘤细胞特异性γδ T细胞的培养体系。方法:从人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),用不同浓度的磷酸抗原(IPP)与rhIL-2联合刺激γδ T细胞增殖,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后CD3^+Vγ9^+的γδ T细胞数... 目的:建立一种体外诱导肿瘤细胞特异性γδ T细胞的培养体系。方法:从人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),用不同浓度的磷酸抗原(IPP)与rhIL-2联合刺激γδ T细胞增殖,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后CD3^+Vγ9^+的γδ T细胞数量以及比例,并计算其扩增效率。结果:经15天扩增培养后,高浓度组10μg/ml的IPP联合500IU/ml rhIL-2刺激得到的γδ T细胞的扩增效率最高,且扩增培养至第9天的γδ T细胞对肿瘤细胞有一定的杀伤活性。结论:适宜浓度磷酸抗原(IPP)联合rhIL-2能有效体外诱导具有较强抗肿瘤活性γδ T细胞的扩增。 展开更多

关键词 肿瘤 免疫治疗 γ δ T细胞

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循环肿瘤细胞在监测肿瘤转移中的应用 被引量：3

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作者 申珊珊 黄浩 +1 位作者 罗成林 罗晓玲 《实用肿瘤杂志》 CAS 2015年第5期486-490,共5页

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)指由实体瘤或转移灶释放进入外周血液循环的肿瘤细胞,是恶性肿瘤患者出现术后复发和远处转移的重要原因。随着对肿瘤转移机制的深入研究,尤其是伴随现代检测技术的不断改进,CTCs的检测取得... 循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)指由实体瘤或转移灶释放进入外周血液循环的肿瘤细胞,是恶性肿瘤患者出现术后复发和远处转移的重要原因。随着对肿瘤转移机制的深入研究,尤其是伴随现代检测技术的不断改进,CTCs的检测取得一些突破性的进展。CTCs检测作为一种新型的非侵入性诊断工具,在早期发现是否复发与转移、评估疗效与预后等方面的应用价值已成为临床研究的热点。但目前的研究处于发展阶段,面临着许多亟待解决的问题。本文就循环肿瘤细胞的基本概况,检测方法,临床研究进展及存在的主要问题作一综述。 展开更多

关键词 肿瘤/诊断 肿瘤/病理学 肿瘤转移 肿瘤复发 局部 肿瘤循环细胞 预后 综述

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2种细胞冻存液对脐血单个核细胞冻存质量的影响 被引量：3

8

作者 黄馨萍 林科佳 +3 位作者 魏宗科 魏志璋 罗晓玲 王宇环 《广西医科大学学报》 CAS 2017年第9期1270-1273,共4页

目的:探讨2种细胞冻存液对脐血来源单个核细胞冻存质量的影响,为脐血来源单个核细胞的冻存提供合适的冻存方法和理论依据。方法:采用细胞计数仪检测不同冻存液(冻存液1:培养基∶自体血浆∶DMSO=5∶4∶1;冻存液2:自体血浆∶DMSO=9∶1)对... 目的:探讨2种细胞冻存液对脐血来源单个核细胞冻存质量的影响,为脐血来源单个核细胞的冻存提供合适的冻存方法和理论依据。方法:采用细胞计数仪检测不同冻存液(冻存液1:培养基∶自体血浆∶DMSO=5∶4∶1;冻存液2:自体血浆∶DMSO=9∶1)对脐血单个核细胞复苏后回收总数的影响;同时使用流式细胞仪和体外造血细胞培养术分析脐血细胞损失的类群和脐血造血分化的能力。结果:细胞计数仪和台盼蓝拒染实验发现,冻存液2细胞总回收率为(72.88±12.24)%,显著高于冻存液1的细胞总回收率(56.65±9.34)%;流式结果也表明,冻存液1的CD34+造血干细胞损失率高达(35.90±2.56)%,其他CD14+单核/中性粒细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD3-CD56+NK细胞损失率分别为(49.95±3.68)%、(24.21±2.35)%、(33.87±3.21)%和(35.18±3.52)%;而冻存液2的细胞除了CD4+T细胞和CD8+T细胞损失率分别为(13.50±1.25)%和(24.67±3.72)%,其他细胞比例都相应增加。同时,集落形成能力检测结果显示,冻存液2的CFU-GM和BFU-E的集落团多于冻存液1的细胞。结论:自体血浆∶DMSO=9∶1的冻存液对脐血单个核细胞冻存效果较好。 展开更多

关键词 造血干细胞 脐血 单核细胞 冻存

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Calcein-AM/PI双染法结合流式细胞术检测γδT细胞毒性的方法 被引量：3

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作者 饶秀茸 崔博婧 +2 位作者 付凡 王宇环 马飞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期620-625,共6页

目的建立和优化钙黄绿素-AM（Calcein-AM）和碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法结合流式细胞术检测γδT细胞细胞毒活性的方法。方法利用Calcein-AM标记靶细胞,然后与效应细胞共孵育24 h,结束后加入PI,最后流式细胞术检测;通过BD... 目的建立和优化钙黄绿素-AM（Calcein-AM）和碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法结合流式细胞术检测γδT细胞细胞毒活性的方法。方法利用Calcein-AM标记靶细胞,然后与效应细胞共孵育24 h,结束后加入PI,最后流式细胞术检测;通过BD公司绝对细胞计数管验证上述流程的稳定性和可靠性。结果 Calcein-AM能在较低浓度（0.1～0.5μmol/L）下对靶细胞在宽密度范围（0.1～10）×10^6/ml内进行很好标记,而且24 h内对细胞活率无影响,同时还能与未标记细胞进行很好的区分;整个流程具有很好的稳定性和可靠性。结论建立并优化了Calcein-AM/PI双染法结合流式细胞术检测γδT细胞细胞毒效应的方法,本方法除操作简单、重复性好、灵敏度高外,还能更好的区分死亡细胞的来源。 展开更多

关键词 钙黄绿素-AM ΓΔT细胞 细胞毒活性 流式细胞术

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TLR7激动剂增强人CIK细胞杀伤功能的研究 被引量：3

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作者 陈艳媛 李旺 +3 位作者 魏志璋 王宇环 罗晓玲 高东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期638-640,共3页

目的研究Toll样受体7（toll-like receptors 7,TLR7）激动剂（Tlr7a）对人细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-inducedkiller cell,CIK）杀瘤效果的影响。方法采集3名健康志愿者外周血,分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononucle... 目的研究Toll样受体7（toll-like receptors 7,TLR7）激动剂（Tlr7a）对人细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-inducedkiller cell,CIK）杀瘤效果的影响。方法采集3名健康志愿者外周血,分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,按照常规CIK细胞培养（Control组）或day0额外添加Tlr7a（Tlr7a组）2种方案培养2周。采用细胞计数法检测细胞的增殖效率,流式细胞术检测细胞亚群的比例,CCK-8比色法检测CIK细胞对人红白血病细胞（K562细胞）的杀伤活性。结果与对照比,Tlr7a处理后,总细胞中主要效应细胞CD3^＋CD56^＋双阳细胞占比增加4.1%,分别为（11.9±2.9）%和（16.0±5.8）%。杀伤实验结果显示,当E∶T为20∶1时,2组细胞对K562杀伤率分别为（98.8±4.2）%和（74.4±12.3）%。相比于Control组,Tlr7a组的细胞杀伤功能明显增强（P〈0.05）。结论 TLR7激动剂（Tlr7a）具有增强CIK效应细胞的扩增能力,其刺激后获得的CIK细胞对K562肿瘤细胞的杀伤效果更好。 展开更多

关键词 CIK细胞 TOLL样受体 肿瘤 杀伤率

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自体血浆和庆大霉素对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型和活性的影响 被引量：2

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作者 曹劲松 尹卫国 +1 位作者 陈聪 罗晓玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期906-908,912,共4页

目的探索自体血浆添加量和庆大霉素对培养的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)免疫表型和活性的影响。方法采用流式细胞术分析自体血浆和庆大霉素对CIK细胞中不同亚型免疫细胞比例的影响,细胞计数、MTT法检测处理后的CIK细胞对HeLa细胞... 目的探索自体血浆添加量和庆大霉素对培养的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)免疫表型和活性的影响。方法采用流式细胞术分析自体血浆和庆大霉素对CIK细胞中不同亚型免疫细胞比例的影响,细胞计数、MTT法检测处理后的CIK细胞对HeLa细胞的细胞毒性差异。结果自体血浆实验组与对照组之间不存在显著性差异,而庆大霉素实验组与对照组相比,CD3+细胞、CD56+细胞、CD3+CD8+细胞和CD3+CD56+细胞的数量均下降,差异有统计学意义(P<0.05),下降幅度分别为1.4、1.7、1.4和2.5倍。进一步研究发现,庆大霉素实验组与对照组的CIK细胞对HeLa细胞的细胞毒性分别为43.0%和90.0%,两者存在显著性差异(P<0.05)。结论自体血浆对CIK细胞不同亚型比例无明显影响,庆大霉素可引起CD3+细胞、CD56+细胞、CD3+CD8+细胞和CD3+CD56+细胞减少,有一定细胞毒性。 展开更多

关键词 CIK细胞 细胞培养 自体血浆 庆大霉素

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过继性免疫细胞治疗肾癌的临床研究进展 被引量：2

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作者 陈杰 罗晓玲 张力图 《中国癌症防治杂志》 CAS 2013年第3期280-283,共4页

肾癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿外科常见的恶性肿瘤,其治疗手段以手术为主,晚期和转移性肾癌对化疗和放疗均不敏感。生物免疫治疗是肿瘤综合治疗的第四大模式,过继性免疫细胞治疗为目前生物免疫治疗中较为成熟和有效的方法,已在... 肾癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿外科常见的恶性肿瘤,其治疗手段以手术为主,晚期和转移性肾癌对化疗和放疗均不敏感。生物免疫治疗是肿瘤综合治疗的第四大模式,过继性免疫细胞治疗为目前生物免疫治疗中较为成熟和有效的方法,已在肾癌的临床治疗中取得较好疗效。近年有关过继性免疫细胞治疗肾癌的临床研究进展迅速,本文就此作一综述。 展开更多

关键词 肾肿瘤 免疫治疗 过继性免疫细胞治疗

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TLR7激动剂替代IFN-γ诱导CIK细胞杀伤肿瘤的研究 被引量：2

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作者 李旺 陈艳媛 +3 位作者 魏志璋 王宇环 罗晓玲 高东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1157-1159,共3页

目的:探讨TLR7激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN-γ体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK组和Tlr7a-CI... 目的:探讨TLR7激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN-γ体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK组和Tlr7a-CIK组。对各组分别进行免疫杀伤性研究,检测细胞免疫表型并分析对K562肿瘤细胞的杀伤活性。结果:CD56+细胞在Tlr7a-CIK组显著增加(P<0.05),Tlr7a-CIK组杀伤活性较CIK组显著增强(P<0.05)。结论:Tlr7a可以替代IFN-γ促进CIK细胞杀伤肿瘤。 展开更多

关键词 免疫细胞 Toll样受体7激动剂 抗肿瘤 白血病

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过继性免疫细胞治疗临床应用中的几个问题 被引量：1

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作者 黄浩 张正涵 +2 位作者 Allen Edward Goldenthal 罗成林 罗晓玲 《中国细胞生物学学报》 CSCD 北大核心 2014年第9期1306-1310,共5页

过继性免疫细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)是肿瘤免疫治疗的重要组成部分,在我国发展非常迅速,然而其临床应用一直存在很大争议,甚至在有关临床疗效的争议中一度沉寂。而近几年,随着免疫技术的提高,ACT技术再次引起临床工作者的重... 过继性免疫细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)是肿瘤免疫治疗的重要组成部分,在我国发展非常迅速,然而其临床应用一直存在很大争议,甚至在有关临床疗效的争议中一度沉寂。而近几年,随着免疫技术的提高,ACT技术再次引起临床工作者的重视,作者就ACT技术发展历程和临床应用过程中细胞类型选择、细胞数量确定、疗效评价等问题作一简要综述。 展开更多

关键词 肿瘤 免疫治疗 过继性免疫细胞治疗

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小鼠S1PR3慢病毒表达载体的构建及表达 被引量：1

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作者 王航 蔡克银 黄浩 《海南医学》 CAS 2015年第18期2653-2656,共4页

目的构建小鼠1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)慢病毒表达载体,并检测其表达情况。方法小鼠心肌组织m RNA并逆转录得到c DNA,设计并合成引物,采用亚克隆方式将目的基因克隆至慢病毒表达载体p Lent-IRES-EGFP中,将表达载体与包装质粒共转293T细... 目的构建小鼠1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)慢病毒表达载体,并检测其表达情况。方法小鼠心肌组织m RNA并逆转录得到c DNA,设计并合成引物,采用亚克隆方式将目的基因克隆至慢病毒表达载体p Lent-IRES-EGFP中,将表达载体与包装质粒共转293T细胞,进行目的基因的过表达慢病毒包装,随后收集培养成功病毒,使用病毒感染小鼠L929细胞,检测感染后L929细胞表达S1PR3情况。结果从小鼠心机组织c DNA中扩增出大小约1 100 bp的目的片段;双酶切后成功将S1PR3克隆到慢病毒表达载体p Lent-IRES-EGFP,表达质粒与包装质粒供转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达绿色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠L929细胞,成功表达出S1PR3。结论本研究成功构建了可以高表达S1PR3的p Lenti6.3-S1PR3-IRES-EGFP慢病毒表达载体,为进一步调控S1PR3相关的细胞功能奠定了基础。 展开更多

关键词 慢病毒 1-磷酸鞘氨醇受体3 血管损伤 再内皮化

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Immune Cell SR对冻存PBMNC诱导培养CIK的效果研究 被引量：1

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作者 马冬磊 林科佳 +4 位作者 陈晨 魏宗科 魏志璋 罗晓玲 王宇环 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期894-899,共6页

目的:探讨Immune Cell SR(血清替代物)在冻存复苏后PBMNC诱导CIK细胞培养过程中的效果,为免疫细胞的工业化生产提供一个新的策略。方法:提取健康志愿者外周血单个核细胞,经短期冻存后复苏并诱导培养CIK细胞,采用台盼蓝拒染法检测细胞活... 目的:探讨Immune Cell SR(血清替代物)在冻存复苏后PBMNC诱导CIK细胞培养过程中的效果,为免疫细胞的工业化生产提供一个新的策略。方法:提取健康志愿者外周血单个核细胞,经短期冻存后复苏并诱导培养CIK细胞,采用台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术分析免疫细胞亚群,并用Calcein-AM/PI双染法检测其杀伤活性;结果:冻存后PBMNC中在对照组未能正常扩增,与新鲜组相比,2%SR组细胞扩增倍数较低,且差异显著(P<0.05),5%SR组、10%AP组与新鲜组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);冻存前后CD3^+、CD3^+CD8^+、CD3^+ CD56^+细胞亚群比较均无明显差异(P>0.05);细胞培养后,各组间CD3^+、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8+、CD3^+CD56^+、CD3^-CD56^+亚群及体外杀伤活性比较均无明显差异(P>0.05);结论:采用5%SR替代自体血浆可以很好地诱导冻存的PBMNC培养CIK细胞,且无外源性蛋白,安全可靠,为免疫细胞冻存技术在细胞治疗中的应用提供条件。 展开更多

关键词 外周血单个核细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 冻存 血浆替代物

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GP73融合蛋白原核表达及纯化

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作者 谢平丽 赵艳洁 +3 位作者 李跃辉 王宇环 罗晓玲 李官成 《肿瘤药学》 CAS 2014年第3期172-175,共4页

目的原核表达并纯化高尔基体糖蛋白-73(GolgiProtein73,GP73)。方法以人肝癌细胞系HepG2总RNA为模板,经RT-PCR扩增GP73基因,克隆至原核表达载体pET-21a(+)-TRX中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。His-tag磁珠纯化重组蛋白GP73,SDS-... 目的原核表达并纯化高尔基体糖蛋白-73(GolgiProtein73,GP73)。方法以人肝癌细胞系HepG2总RNA为模板,经RT-PCR扩增GP73基因,克隆至原核表达载体pET-21a(+)-TRX中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。His-tag磁珠纯化重组蛋白GP73,SDS-PAGE鉴定。结果克隆目的基因的序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pET21a(+)-TRX-GP73经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子量为80 kD,与预期相符。结论本实验成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化了GP73重组蛋白,为后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 GP73 原核表达 重组蛋白GP73

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EGFL7原核表达载体的构建及鉴定

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作者 谢平丽 李峰 +3 位作者 李跃辉 王宇环 罗晓玲 李官成 《医学临床研究》 CAS 2014年第10期1889-1891,共3页

【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体，并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板，PCR扩增 EGFL7基因，克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中，转化大肠杆菌 BL21（DE3），IPTG 诱... 【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体，并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板，PCR扩增 EGFL7基因，克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中，转化大肠杆菌 BL21（DE3），IPTG 诱导表达。 His‐tag 磁珠纯化重组蛋白 EGFL7，SDS‐PAGE 鉴定。【结果】克隆目的基因序列正确，未发生碱基突变；重组表达质粒pET21a（＋）‐TRX‐EGFL7经双酶切鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子量为80kD ，与预期相符。【结论】成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了EGFL7重组蛋白，为后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 表皮生长因子/遗传学 大肠杆菌 基因扩增 遗传载体

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靶向S1PR3基因shRNA慢病毒表达载体构建及功能鉴定

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作者 王航 黄浩 +1 位作者 蔡克银 丁世芳 《海南医学》 CAS 2016年第11期1721-1726,共6页

目的构建靶向小鼠S1PR3基因的sh RNA慢病毒表达载体,并验证其对内皮祖细胞迁移能力的影响。方法依照sh RNA设计原则,合成对应的sh RNA序列,将其克隆到PHBLV载体中,使用三载体系统进行病毒包装,收集制备成功的病毒,并用荧光显微镜法测定... 目的构建靶向小鼠S1PR3基因的sh RNA慢病毒表达载体,并验证其对内皮祖细胞迁移能力的影响。方法依照sh RNA设计原则,合成对应的sh RNA序列,将其克隆到PHBLV载体中,使用三载体系统进行病毒包装,收集制备成功的病毒,并用荧光显微镜法测定病毒滴度,使用病毒感染EPC后,测定各组细胞中S1PR3蛋白表达情况,选择合适的病毒感染EPC后,测定其对EPC迁移能力的影响。结果成功将sh RNA序列克隆到慢病毒表达载体PHBLV-U6-RFP,表达质粒与辅助质粒共转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达红色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠EPC,可以不同程度干扰细胞中S1PR3蛋白表达,S1PR3蛋白表达受到抑制后,EPC的迁移能力明显减弱。结论我们成功构建了可以有效干扰S1PR3表达的慢病毒载体,并初步观察了其对EPC细胞的迁移能力的影响,为后续进一步调控S1PR3相关的细胞功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 慢病毒 1-磷酸鞘氨醇受体3 内皮祖细胞 细胞迁移

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