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题名沪地龙3个基原的多重位点特异性PCR鉴别
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作者
李雷
李奇璋
张汉明
张磊
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机构
海军军医大学药学院
淮北师范大学生命科学学院创新药物研发中心
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出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第16期5619-5626,共8页
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基金
国家自然科学基金资助项目(82225047)
科技部“中医药现代化”重点研发计划(2022YFC3501703)。
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文摘
目的沪地龙3个基原药材(通俗环毛蚓Pheretima vulgaris、威廉环毛蚓P.guillelmi、栉盲环毛蚓P.pectinifera)在外观性状方面相似度高,传统鉴定方法难以有效区分,通过建立多重位点特异性PCR方法同时鉴别沪地龙3个基原。方法通过比对沪地龙和其他7个蚯蚓品种线粒体全基因序列的多态性位点差异,分别设计通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,建立单基原反应体系,并对耐受性和适用性进行考察和验证;而后优化特异性引物组合,构建多重位点特异性PCR鉴别体系;反应体系为25μL:2×Rapid Taq Master Mix 12.5μL,引物1.5μL(通俗环毛蚓∶威廉环毛蚓∶栉盲环毛蚓=1∶1.2∶0.8),DNA模板0.5μL(50 ng/μL),灭菌水补足至25μL。PCR扩增条件:95℃预变性4min;95℃变性15 s,60℃退火15 s,72℃延伸20 s,循环33次;产物末端72℃延伸7 min。结果通俗环毛蚓可得到535 bp条带,威廉环毛蚓可得到219 bp条带,栉盲环毛蚓可得到435 bp条带,其他品种蚯蚓样品均无条带。结论多重位点特异性PCR鉴别体系可根据条带位置同时鉴别沪地龙3个基原。该方法可用于沪地龙基原和真伪鉴别,并为地龙的质量控制和研究提供参考。
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关键词
沪地龙
通俗环毛蚓
威廉环毛蚓
栉盲环毛蚓
多重位点特异性聚合酶链式反应
分子鉴定
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Keywords
Shanghai Pheretima
Pheretima vulgaris Chen
Pheretima guillemi Michaelsen
Pheretima pectenifera Michaelsen
multiplex site-specific polymerase chain reaction
molecular identification
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分类号
R286.2
[医药卫生—中药学]
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