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中国经济海藻养殖技术概况与展望 被引量:10
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作者 刘福利 牛建峰 +5 位作者 隋正红 单体锋 王铁杆 唐贤明 梁洲瑞 逄少军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1-9,共9页
我国是全球海藻生产和消费大国。当前,我国海藻养殖种类以海带、紫菜、江蓠和裙带菜等为主体,兼有小规模养殖的羊栖菜、鼠尾藻、麒麟菜、石花菜、礁膜、浒苔、长茎葡萄蕨藻等。海藻养殖方式包括浅海养殖、潮间带养殖和陆基养殖。近年来... 我国是全球海藻生产和消费大国。当前,我国海藻养殖种类以海带、紫菜、江蓠和裙带菜等为主体,兼有小规模养殖的羊栖菜、鼠尾藻、麒麟菜、石花菜、礁膜、浒苔、长茎葡萄蕨藻等。海藻养殖方式包括浅海养殖、潮间带养殖和陆基养殖。近年来,在全球气候变化、海水污染、海岸工程等多重压力下,海藻养殖环境不佳,养殖病害多发;另外,海洋生态文明建设大背景下的近海水域利用政策变化,对海藻养殖产业及其养殖技术提出了新的要求与挑战。对我国海藻养殖技术进行回顾,总结经验、查找不足,提出新思路、新方法,以期为我国海藻养殖产业可持续发展提供支撑。 展开更多
关键词 经济海藻 养殖技术 多营养层次综合养殖 海带 紫菜 江蓠
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南海北部神狐海域地质环境综合调查及科学意义 被引量:9
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作者 朱俊江 李三忠 +10 位作者 陆敬安 康冬菊 牟泽霖 赵彦彦 陈朝晖 张晓华 杨国明 吴佳庆 宋德磊 王长盛 熊梓翔 《地球科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1416-1426,共11页
在南海北部神狐海域水合物活跃区域开展了一次综合的海洋地质、物理海洋和生态环境调查,10个站位分布在水深1000~4000 m范围内的陆坡和深水盆地区域,是南海北部油气活跃的重要区域和天然气水合物试采区域.航次主要对10个海底站位进行了... 在南海北部神狐海域水合物活跃区域开展了一次综合的海洋地质、物理海洋和生态环境调查,10个站位分布在水深1000~4000 m范围内的陆坡和深水盆地区域,是南海北部油气活跃的重要区域和天然气水合物试采区域.航次主要对10个海底站位进行了表层沉积物箱式和重力活塞柱状取样.针对天然气水合物试采区域,开展了一台"海燕"水下滑翔机的海洋物理环境连续走航剖面观测.利用海底地震仪在两个站位开展了连续海底地震和微振动观测.进行了站位的分层水体和沉积物样品中微生物学实验研究.初步航次结果展示了沉积物为黏土和软泥.站位和水下滑翔机走航观测提供了水体内海洋物理环境参数变化特征.海底地震仪观测展示了研究区天然地震活动和可能与水合物活动有关的微震动和短持续事件记录.微生物学实验揭示了沉积物中的微生物细菌群落特征. 展开更多
关键词 南海神狐海域 天然气水合物 海底地震仪 水下滑翔机 箱式和重力活塞沉积样 海洋物理环境 海洋地质学
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栉孔扇贝sox9基因的cDNA克隆及其在不同发育时期性腺中的表达特征 被引量:7
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作者 梁少帅 于潇含 +1 位作者 杨丹丹 秦贞奎 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1184-1192,共9页
SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(C... SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(Chlamys farreri)sox9(Cf-sox9)全长的c DNA序列,其长度为2835 bp,开放阅读框为1413 bp,编码470个氨基酸。预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG-box和SOXE亚族的高保守区域,但没有脊椎动物羧基端的Pro-Gln-Ser rich区域。原位杂交和免疫组织化学技术确定Cf-sox9 m RNA和Cf-SOX9蛋白均定位在栉孔扇贝精巢和卵巢的所有生殖细胞中,并且在不同发育时期性腺中呈现了类似的表达规律,即在精巢中,阳性信号在精母细胞中最强,在精子中最弱;在卵巢中,阳性信号在卵原细胞、卵母细胞以及成熟卵中呈现逐渐减弱的趋势。这一表达特征与脊椎动物性腺中多样的性别差异表达特征不同,提示sox9在贝类性腺发育和配子发生中的作用可能与大多数脊椎动物不同。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 SOX9 性腺 配子发生
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斑石鲷肌肉、脑细胞系的建立与生物学特性 被引量:7
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作者 王梦珣 朱鹤 +2 位作者 王玉珏 翟介明 张全启 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期67-74,共8页
斑石鲷(Oplegnathus punctatus),是一种具有极高经济价值的海水养殖鱼类,尚未见其细胞系建立的相关报道。本研究以斑石鲷肌肉、脑组织为材料,采用组织块移植培养技术,建立了斑石鲷肌肉、脑细胞系,分别定名为OPPM、OPPB。斑石鲷肌肉细胞... 斑石鲷(Oplegnathus punctatus),是一种具有极高经济价值的海水养殖鱼类,尚未见其细胞系建立的相关报道。本研究以斑石鲷肌肉、脑组织为材料,采用组织块移植培养技术,建立了斑石鲷肌肉、脑细胞系,分别定名为OPPM、OPPB。斑石鲷肌肉细胞系已传至183代,脑细胞系已传至174代,细胞均为成纤维样细胞。OPPM细胞最适培养温度为28℃,OPPB细胞最适培养温度为26℃。在FBS浓度为10%~20%条件下细胞生长旺盛。对OPPM、OPPB分别提取DNA进行18SrRNA基因片段特异性扩增,均获得819bp DNA片段,与斑石鲷18SrRNA序列进行比对,一致性达99.6%,表明该细胞起源于斑石鲷,而染色体分析表明两个细胞系染色体数目和核型均出现不同程度变异。OPPM细胞与OPPB细胞液氮冷冻保存10个月后,复苏后经台盼蓝细胞染色,约91.2%、86.7%细胞具有活性,且复苏后增殖速度快,可正常传代。使用脂质体转染法将pEGFP-C1质粒转染至OPPM、OPPB,可高效表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。OPPM和OPPB细胞系的建立将为斑石鲷免疫学研究及基因功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 斑石鲷 细胞系 原代培养:传代培养
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卵形鲳鲹源海豚链球菌检测方法的建立及应用
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作者 李姿懿 孙敏敏 +5 位作者 王义芬 王茁宇 牛晶晶 宋建强 贺艳 齐洁 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期44-51,共8页
为快速分析组织样本中的海豚链球菌(Streptococcus iniae)载量,本研究选取海豚链球菌特异性基因SimA作为目的基因,建立了海豚链球菌的实时荧光绝对定量检测方法。该方法最低检测值为1.93×10^(2)拷贝数/μL,在1.93×10^(2)~1.93... 为快速分析组织样本中的海豚链球菌(Streptococcus iniae)载量,本研究选取海豚链球菌特异性基因SimA作为目的基因,建立了海豚链球菌的实时荧光绝对定量检测方法。该方法最低检测值为1.93×10^(2)拷贝数/μL,在1.93×10^(2)~1.93×10^(9)拷贝数/μL间有良好的区分度,同时重复实验的变异系数低于1%,具有较高的重现性。该方法可特异性地检测海豚链球菌,与坎氏弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌等10种病原菌不发生交叉反应。用建立的绝对定量方法检测卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)浸泡感染海豚链球菌后组织菌体的载量,结果显示,随着感染时间的延长肝、脾、心、肾、脑、鳃、肠等组织的海豚链球菌载量呈上升趋势。但组织间也存在较大差异。在感染后的12~24 h,脑为菌体载量最高的组织,肠为菌体载量最低的组织;在感染后的48~72 h,肾为菌体载量最高的组织,鳃为菌体载量最低的组织。由此推断,浸泡感染的海豚链球菌对卵形鲳鲹的脑、肾组织嗜性最强,对脾、肝、心、肠和鳃组织嗜性相对较弱。研究结果表明,本研究建立的海豚链球菌绝对定量检测方法可以应用于海豚链球菌感染卵形鲳鲹的动态监测,为防治海豚链球菌提供了依据。 展开更多
关键词 海豚链球菌 卵形鲳鲹 绝对定量 检测 组织嗜性
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环境因素和繁殖特性对真江蓠受精效率的影响
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作者 张赢月 杨金鑫 +2 位作者 齐聪 杜启睿 徐涤 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期70-75,共6页
真江蓠(Gracilaria vermiculophylla)是一种重要的产琼胶海藻,为了解决江蓠生产实践中的孢子育苗问题,加深对其受精过程的研究,本文选择了真江蓠精子数量、共培养时间(雌、雄配子体)、精子放置时间和雄配子体脱水时间作为繁殖特性因素,... 真江蓠(Gracilaria vermiculophylla)是一种重要的产琼胶海藻,为了解决江蓠生产实践中的孢子育苗问题,加深对其受精过程的研究,本文选择了真江蓠精子数量、共培养时间(雌、雄配子体)、精子放置时间和雄配子体脱水时间作为繁殖特性因素,温度、光照强度和光照周期作为外界环境因素对真江蓠受精效率的影响进行探究。结果表明,7个因素均对真江蓠受精过程有显著影响,受精过程最适条件为温度25℃、光照强度25μmol·m^(-2)·s^(-1)、光照周期14L/10D。而且精子数量的增加、配子体共培养时间的增加、精子脱离雄配子体时间的减少以及对于雄配子体适当的脱水刺激,均有利于提高受精效率。此外,真江蓠还显示出精子与果胞能够在短时间(约0.5 h)内快速受精的能力。本研究结果有助于解决藻体营养繁殖而产生的苗种退化问题,对江蓠孢子育苗具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 真江蓠 受精 配子体 影响因素 繁殖特性
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两种青岛沿岸常见江蓠科物种室内培养过程中附生菌群的组成及其变化分析
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作者 齐聪 薄志文 +2 位作者 梁恩源 杜启睿 徐涤 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期70-77,共8页
为了探究青岛沿岸两种常见江蓠科物种(真江蓠(Gracilaria vermiculophylla)和龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis))在室内培养后生长状态不如野生状态是否是因为附生菌群发生变化。本研究中首先对16S rDNA特异引物对(799F-1392R)在真... 为了探究青岛沿岸两种常见江蓠科物种(真江蓠(Gracilaria vermiculophylla)和龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis))在室内培养后生长状态不如野生状态是否是因为附生菌群发生变化。本研究中首先对16S rDNA特异引物对(799F-1392R)在真江蓠和龙须菜中的适用性进行了评估,之后采用16S rDNA测序法对真江蓠及龙须菜的附生菌群落多样性、群落结构组成及其变化进行分析。研究结果显示,引物对(799F-1392R)能够避免真江蓠和龙须菜叶绿体基因序列的干扰,并能与其附生菌16S rDNA高效结合;野生与室内培养的江蓠附生菌群落存在差异,与野外生长的江蓠附生菌群落相比,室内培养的江蓠附生菌群落丰富度更低,且随着培养时间的延长,附生菌的组成门类逐渐减少。真江蓠与龙须菜间的附生菌群落组成也存在差异,不同的附生菌对这两种江蓠偏好不同。研究结果表明,室内培养环境与野生环境的巨大差异是造成附生菌组成变化的主要原因,而物种的化学组成差异也导致两种江蓠表面附着不同的细菌。本研究为扩展藻菌关系的认知和优化藻类室内培养条件提供了理论支持。 展开更多
关键词 真江蓠 龙须菜 附生菌 16S rDNA测序 菌群变化
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哺乳动物的味觉受体及其介导的信号途径研究进展 被引量:5
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作者 张敏 魏书磊 刘振辉 《鲁东大学学报(自然科学版)》 2012年第2期160-166,共7页
味觉是动物重要的生理感觉之一,众多研究结果表明,哺乳动物具有酸、甜、苦、咸、鲜(umami)、脂等六种基本味觉.近年来对于这六种味觉受体及其介导的信号途径的研究取得了很大进展,本文对此进行了综述.
关键词 哺乳动物 味觉 受体 信号通路
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三种扇贝种间血液生理指标比较及热胁迫对栉孔扇贝血液生理指标的影响
9
作者 崔畅 杨祖晶 +5 位作者 窦峥 陆维 邢强 黄晓婷 胡景杰 包振民 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期73-81,共9页
为了比较3种扇贝血液中的K^(+)、Na^(+)、Ca^(2+)和Cl−浓度,血氧(pO_(2))和血二氧化碳(pCO_(2))气体分压及血液酸碱度(pH)的差异情况,实验利用血气分析仪对栉孔扇贝、虾夷扇贝和海湾扇贝的血液生理指标进行测定。结果显示,扇贝的血液生... 为了比较3种扇贝血液中的K^(+)、Na^(+)、Ca^(2+)和Cl−浓度,血氧(pO_(2))和血二氧化碳(pCO_(2))气体分压及血液酸碱度(pH)的差异情况,实验利用血气分析仪对栉孔扇贝、虾夷扇贝和海湾扇贝的血液生理指标进行测定。结果显示,扇贝的血液生理指标呈现显著的物种差异,其中栉孔扇贝血液的K^(+)浓度[(15.74±1.47)mmol/L]、Na^(+)浓度[(388.07±11.38)mmol/L]、Cl^(−)浓度[(462.43±6.88)mmol/L]和pO_(2)[(140.13±15.35)mmHg]最高。此外,栉孔扇贝和虾夷扇贝的Ca2+浓度和pCO_(2)含量较高,而海湾扇贝的pH最高。对相同月龄不同大小栉孔扇贝血液指标进行比较,发现栉孔扇贝的血液pH值与其壳高呈正相关(r=0.611),而生理指标与壳高呈负相关。随着温度的升高,栉孔扇贝血液的Ca2+浓度显著增加,而pO_(2)显著下降,K^(+)、Na^(+)和Cl^(−)浓度先升高后恢复到初始水平,而pH和pCO_(2)保持相对稳定。研究结果为贝类血液生理研究提供参考,也为贝类生理状态的评估提供了一种新的思路与方法。 展开更多
关键词 扇贝 栉孔扇贝 血液 离子浓度 气体分压 酸碱平衡 热胁迫
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条斑紫菜SOD基因家族的全基因组分析及温度和失水胁迫下表达研究
10
作者 管晓伟 王冬梅 +1 位作者 陈睿 曲伟华 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期60-68,共9页
为探究超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)在条斑紫菜响应温度和失水胁迫时发挥的作用,本文利用生物信息学的方法对条斑紫菜SOD基因家族的进化树、染色体定位、基因结构和蛋白结构等方面进行研究分析。在条斑紫菜中共鉴定出12个... 为探究超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)在条斑紫菜响应温度和失水胁迫时发挥的作用,本文利用生物信息学的方法对条斑紫菜SOD基因家族的进化树、染色体定位、基因结构和蛋白结构等方面进行研究分析。在条斑紫菜中共鉴定出12个SOD基因(PySOD),包括8种Cu/Zn-SOD、3种Mn-SOD和1种Fe-SOD,不均等地分布在3条染色体上,且各含0~2个内含子;SOD基因启动子区域含有不同数目的胁迫响应、生长发育和激素响应元件;Mn-SOD和Fe-SOD二级结构中α螺旋所占比重大,Cu/Zn-SOD中β折叠所占比重大。基于条斑紫菜受到温度和失水胁迫的转录组数据和qPCR结果,PySOD不同胁迫条件下具有不同的表达模式,尤其在失水胁迫时Cu/Zn-SOD表达量呈现不同程度的上调。这种PySOD基因的全基因组分析为了解植物中SOD基因的进化关系提供信息,并且条斑紫菜受温度和失水胁迫时SOD基因的表达分析为改良条斑紫菜育种提供参考。 展开更多
关键词 条斑紫菜 温度胁迫 失水胁迫 超氧化物歧化酶 基因家族
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双壳类软体动物贝壳DNA高效提取及方法学评价 被引量:3
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作者 张凤梅 连姗姗 +3 位作者 刘思诺 胡乃娜 陈晓妹 王师 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第S01期41-47,共7页
通过对虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)、牡蛎(Crassostrea gigas)和侏儒蛤(Mulimia lateralis)4种双壳贝类进行壳DNA提取实验,本研究提出一种适用于双壳类软体动物贝壳DNA提取方法。首先用EDTA(15%)脱... 通过对虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)、牡蛎(Crassostrea gigas)和侏儒蛤(Mulimia lateralis)4种双壳贝类进行壳DNA提取实验,本研究提出一种适用于双壳类软体动物贝壳DNA提取方法。首先用EDTA(15%)脱钙液对贝壳进行预处理去除表面的杂质,经PBS缓冲液(4×)清洗后放入37℃烘箱30 min,称取重量为1 g的壳放入液氮中冷却后使用中通量组织研磨仪研磨成粉末,分装到2 mL离心管中,加入裂解液后在56℃、200 r/min条件下裂解3 h后,常温下12 000 r/min离心10 min得到上清液,加入无水乙醇和醋酸钠沉淀DNA。经微量紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳分析和全基因组重测序比对分析来评价提取到的基因组DNA质量,结果显示该方法可获得完整性好的高质量DNA。本研究提出的贝壳DNA提取方法操作简单、快速,且成本低,为双壳贝类的遗传分析提供了一种方法,本方法在贝类遗传学和分子育种研究中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 双壳贝类 贝壳 DNA提取 遗传分析
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“海大金贝”类胡萝卜素浓度与生长性状的相关性分析 被引量:3
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作者 张璐 李雪 +5 位作者 李宁 王姝玥 李旭 孙贵东 胡晓丽 包振民 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期41-47,共7页
类胡萝卜素在动物生长、繁殖、抗氧化等过程中发挥重要作用。虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)新品种"海大金贝",其闭壳肌因富集类胡萝卜素而呈橘红色,具有较高的经济价值。为研究类胡萝卜素积累与"海大金贝"生... 类胡萝卜素在动物生长、繁殖、抗氧化等过程中发挥重要作用。虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)新品种"海大金贝",其闭壳肌因富集类胡萝卜素而呈橘红色,具有较高的经济价值。为研究类胡萝卜素积累与"海大金贝"生长的关系,本研究对一个"海大金贝"群体在6个养殖时间点进行生长性状(壳高、壳长、壳宽、总重、软体重、闭壳肌重)测量和闭壳肌中类胡萝卜素浓度的测定,并对生长性状与闭壳肌中类胡萝卜素浓度的相关性进行了分析。研究显示,"海大金贝"养殖群体生长性状值与闭壳肌中类胡萝卜素浓度无明显相关性,但相邻取样时间点间生长性状值的增长率与闭壳肌类胡萝卜浓度的增长率呈高度正相关。其中,壳高、壳长、体重、软体重4个性状的增长率与类胡萝卜素浓度增长率呈极显著线性正相关(P<0.01),相关系数r分别为0.999 3、0.998 5、0.982 9和0.977 3;壳宽与闭壳肌重的增长率与闭壳肌中类胡萝卜素总浓度增长率呈显著正相关(P<0.05),相关系数r分别为0.947 1、0.885 3。研究结果表明,闭壳肌中类胡萝卜素积累可能对"海大金贝"的生长有促进作用。 展开更多
关键词 虾夷扇贝 类胡萝卜素 生长性状 相关性 海大金贝
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紫扇贝、海湾扇贝及其正反杂交子代群体遗传结构的AFLP分析 被引量:3
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作者 孙妍 黄晓婷 +3 位作者 胡丽萍 王师 王春德 包振民 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1-5,共5页
本研究应用AFLP分子标记技术,对紫扇贝(Argopecten purpuratu,PP)、海湾扇贝(Argopecten irradians,Ⅱ)、正交子一代(紫扇贝♀×海湾扇贝♂,PI)及反交子一代(海湾扇贝♀×紫扇贝♂,PⅠ)群体的遗传结构进行了分析和比较。用5对A... 本研究应用AFLP分子标记技术,对紫扇贝(Argopecten purpuratu,PP)、海湾扇贝(Argopecten irradians,Ⅱ)、正交子一代(紫扇贝♀×海湾扇贝♂,PI)及反交子一代(海湾扇贝♀×紫扇贝♂,PⅠ)群体的遗传结构进行了分析和比较。用5对AFLP引物扩增得到433个位点,其中多态位点为88.45%;正反交子代中的扩增位点大部分(97.23%)来源于紫扇贝和海湾扇贝;扩增中出现了非孟德尔遗传位点,如紫扇贝和海湾扇贝的部分扩增位点在杂交子代中丢失,正反交子代中出现12个紫扇贝和海湾扇贝中没有的扩增位点;通过多态位点比率、Nei’s基因多样性、香农式多样性指数、遗传距离和AMOVA分析发现,正反杂交子代之间的遗传分化最小,与紫扇贝和海湾扇贝的遗传分化均显著。 展开更多
关键词 紫扇贝(Argopecten purpuratu) 海湾扇贝(Argopecten irradians) 杂交 AFLP
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基于MethylRAD-Seq技术对仿刺参DNA甲基化图谱的研究 被引量:2
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作者 李玉强 王睿甲 +6 位作者 李语丽 孙红振 李仰平 牟闯 吕佳 王师 包振民 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期41-50,共10页
全基因组DNA甲基化作为重要的表观遗传学现象,其在生物体诸多生理生化过程中起了重要作用。研究表明全基因组DNA甲基化在基因的表达调控、维持胚胎正常发育、染色体结构稳定等方面发挥了重要作用。DNA甲基化也成为当今的研究热点之一,... 全基因组DNA甲基化作为重要的表观遗传学现象,其在生物体诸多生理生化过程中起了重要作用。研究表明全基因组DNA甲基化在基因的表达调控、维持胚胎正常发育、染色体结构稳定等方面发挥了重要作用。DNA甲基化也成为当今的研究热点之一,目前在脊椎动物领域研究相对较多,但是对无脊椎动物的甲基化规律的研究比较匮乏,因此本研究以棘皮动物门中仿刺参作为研究对象,采用最新的全基因组DNA甲基化检测方法 MethylRAD-Seq技术探究了仿刺参三种组织的甲基化状况,得到了甲基化标签数量、甲基化位点分布以及甲基化标签密度等信息;此外通过整合仿刺参甲基化文库数据和表达谱数据发现基因甲基化水平与表达水平之间存在弱的正相关性,这暗示了无脊椎动物基因组DNA甲基化可能起到促进基因表达的作用。 展开更多
关键词 DNA甲基化 MethylRAD 仿刺参
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高效自动化HD-Marker文库构建流程的建立及评估
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作者 杨志辉 吕佳 +5 位作者 刘平平 张天琦 黄晓文 倪萍 包振民 王师 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期66-75,共10页
针对HD-Marker (High-throughput, sequencing-based GoldenGate approach)技术应用于育种研究时面临的短时间内快速完成大批量样品基因分型的挑战,本研究基于自动化移液工作站建立了HD-Marker文库自动化构建体系并评估了此方法在文库... 针对HD-Marker (High-throughput, sequencing-based GoldenGate approach)技术应用于育种研究时面临的短时间内快速完成大批量样品基因分型的挑战,本研究基于自动化移液工作站建立了HD-Marker文库自动化构建体系并评估了此方法在文库构建中的可靠性。本研究基于自动化移液工作站建立了HD-Marker文库自动化构建流程,并评估了此方法在文库构建中的可靠性。结果表明扩增产物具有较高均匀性,浓度范围在23.1~38.7 ng/μL之间;90.63%的文库可获得清晰文库条带;文库位点捕获效率均在97%以上,分型位点比例能达到100%,与标准WGS文库数据相比,位点分型准确性也在97%~100%之间。此自动化文库构建流程可并行处理96个样品的文库制备,整体运行时间仅为人工操作的1/7。本研究首次实现了标准化的自动化HD-Marker基因分型文库制备,为大规模育种群体的基因分型效率的提高提供依据,并为全基因组选择育种的实施提供了具有实用价值的高效率技术平台。 展开更多
关键词 自动化移液工作站 HD-Marker 文库构建 基因分型 全基因组选择育种
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黄姑鱼肠道上皮细胞体外分离培养及鉴定 被引量:1
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作者 王立改 曾延清 +4 位作者 汪波 谭朋 陈睿毅 竺奇慧 徐冬冬 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期1296-1304,共9页
本研究旨在建立黄姑鱼(Nibea albiflora)肠道上皮细胞的体外分离培养及鉴定方法,为海水鱼类肠道功能及其发病机制相关研究提供细胞模型。以黄姑鱼肠道组织为研究对象,采用胰蛋白酶(0.25%)、胶原蛋白酶(1 mg/mL)和透明质酸酶(0.16 mg/mL... 本研究旨在建立黄姑鱼(Nibea albiflora)肠道上皮细胞的体外分离培养及鉴定方法,为海水鱼类肠道功能及其发病机制相关研究提供细胞模型。以黄姑鱼肠道组织为研究对象,采用胰蛋白酶(0.25%)、胶原蛋白酶(1 mg/mL)和透明质酸酶(0.16 mg/mL)联合消化法对肠道组织进行不同时间(0、20、40、60和80 min)的消化,并对消化后的肠道细胞及残留肠道组织分别进行台盼蓝和苏木精-伊红(HE)染色,再通过显微镜观察确定终止细胞消化的最佳时间。在此基础上,对肠道上皮细胞进行原代培养并传代。在传代培养过程中,通过分析细胞形态、细胞生长曲线和肠道上皮细胞标志性蛋白表达等对培养细胞进行鉴定。结果表明:黄姑鱼肠道组织在消化40 min时便可以得到较多的肠道上皮细胞,在消化60 min时可以得到更多的细胞团,至80 min时肠道上皮细胞基本从基膜上全部消化下来,因此,本研究建议在40~60 min终止细胞消化为宜。所培养的传代肠道细胞呈"铺路石"形态,生长曲线呈明显的"S"形,经角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色呈阳性。进一步的实时荧光定量PCR分析表明上皮细胞标志性蛋白封闭蛋白(Claudin)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、碱性磷酸酶(AKP)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在培养的传代细胞中均有表达。综合上述结果表明,本研究所分离培养的细胞即为黄姑鱼肠道上皮细胞。综上所述,本研究成功建立了黄姑鱼肠道上皮细胞的体外分离培养及鉴定方法,为海水鱼类肠道功能及其相关机制研究提供了技术支撑。 展开更多
关键词 黄姑鱼 肠道上皮细胞 细胞培养 生长曲线
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人工诱导栉孔扇贝雌核发育胚胎的SNP标记分析 被引量:2
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作者 陈亮 赵柏淞 +3 位作者 李玲 商文聪 胡晓丽 包振民 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期48-52,共5页
利用紫外线照射灭活的同源精子,激活栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵子分裂,获得雌核发育胚胎,流式细胞仪检测胚胎细胞平均单倍体率为82.5%。对获得的胚胎进行全基因组扩增,获得足量的基因分型模板,利用高分辨率溶解曲线(HRM)... 利用紫外线照射灭活的同源精子,激活栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵子分裂,获得雌核发育胚胎,流式细胞仪检测胚胎细胞平均单倍体率为82.5%。对获得的胚胎进行全基因组扩增,获得足量的基因分型模板,利用高分辨率溶解曲线(HRM)技术对其进行96个单核苷酸多态性(SNP)位点分型。结果显示,诱导雌核发育胚胎的位点检出率为96.27%,其中99.06%的位点分型结果与相应雌性亲本相符;单个胚胎中只表现一种等位形式的位点占91.67%~96.88%,平均为94.81%,较雌性亲本的纯合位点比例(64.25%)明显提高。本研究利用灭活同源精子诱导获得栉孔扇贝雌核发育胚胎,并利用单个胚胎的全基因组扩增产物进行基因位点分析,为扇贝人工诱导雌核发育个体的早期多基因位点检测和评价提供参考。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 雌核发育 全基因组扩增 单核苷酸多态性
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许氏平鲉肌肉生长发育的初步研究 被引量:2
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作者 王梦娅 金超凡 +2 位作者 张奉燕 黄可佳 贺艳 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期44-50,共7页
鱼类肌肉占体重的40%~60%,不同于哺乳动物仅有肌纤维增大的肌肉生长模式,大部分鱼类肌肉呈现兼有肌纤维增生(Hyperplasia)和肥大(Hypertrophy)的生长模式,且在不同阶段,肌纤维肥大与增生对肌肉生长的贡献存在差异。对于许氏平鲉(Sebaste... 鱼类肌肉占体重的40%~60%,不同于哺乳动物仅有肌纤维增大的肌肉生长模式,大部分鱼类肌肉呈现兼有肌纤维增生(Hyperplasia)和肥大(Hypertrophy)的生长模式,且在不同阶段,肌纤维肥大与增生对肌肉生长的贡献存在差异。对于许氏平鲉(Sebastes schlegelii)等大型经济鱼类,肌肉生长是其生长性状的核心,但目前对其肌肉生长规律的研究不多。本研究通过组织切片染色与统计学分析相结合的方法,研究许氏平鲉不同发育时期肌肉的生长发育特征。结果表明,在出生后30~100 d期间,随着日龄的推移,许氏平鲉的肌纤维数目、直径以及横截面积均呈现显著增加的趋势,肌肉生长主要依赖于肌纤维的肥大生长。对1~4龄的许氏平鲉肌纤维生长的研究中,作者观察到在不同年龄的许氏平鲉白肌中存在“马赛克”增生现象,且随着年龄的推移,新生纤维(直径<20μm)所占肌纤维比例逐渐降低。这表明许氏平鲉的肌肉具有无限生长的能力,但此能力因年龄的增长而逐渐减弱。本研究结果为研究重要经济鱼类肌肉无限生长的分子调控机制提供了组织学资料。 展开更多
关键词 许氏平鲉 肌肉生长 “马赛克”生长 肌纤维肥大 肌纤维增生
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影响龙须菜果孢子体形成内外因素的初步研究 被引量:2
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作者 杨金鑫 张赢月 +3 位作者 杨泽 闫昊 徐涤 张学成 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期65-69,共5页
龙须菜是中国重要的人工栽培海藻,主要用途是琼胶生产原料和鲍鱼饵料。目前龙须菜大规模栽培采用的是人工夹苗的方式,而其孢子采苗的生产方式也得到越来越多的关注。本文将人工培育的由四分孢子萌发长成的一对龙须菜雌、雄配子体进行受... 龙须菜是中国重要的人工栽培海藻,主要用途是琼胶生产原料和鲍鱼饵料。目前龙须菜大规模栽培采用的是人工夹苗的方式,而其孢子采苗的生产方式也得到越来越多的关注。本文将人工培育的由四分孢子萌发长成的一对龙须菜雌、雄配子体进行受精,测试了雌雄配子体藻枝部位、温度、硝酸盐浓度等因素对果孢子体形成过程的影响,结果表明:龙须菜雌配子体藻枝的不同等级分枝表现出不同的生殖力,一级分枝最尖端新生细胞的成熟速度快于其它等级;温度对果孢子体形成有极显著影响(P<0.01),20℃为最适温度;硝酸盐浓度没有显著影响。 展开更多
关键词 龙须菜 受精 果孢子体 影响因素
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高效非损伤性扇贝DNA提取方法的建立及效果评价 被引量:1
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作者 张天琦 刘平平 +4 位作者 吕佳 马岑 黄晓文 张嘉俊 王师 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期24-31,共8页
本研究建立了一种高效、经济的非损伤性扇贝DNA提取方法,在不影响扇贝个体生存状态的前提下,采用擦拭法和室温裂解相结合的方式在20 min内即可获得个体基因组DNA。以虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)和海... 本研究建立了一种高效、经济的非损伤性扇贝DNA提取方法,在不影响扇贝个体生存状态的前提下,采用擦拭法和室温裂解相结合的方式在20 min内即可获得个体基因组DNA。以虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)和海湾扇贝(Argopecten irradians)为实验对象,研究了不同擦拭材料(棉签、滤纸)和不同擦拭部位(外套膜、鳃丝、内脏团)的核酸提取效果,评估了本方法在贝类基因分型领域应用的可行性。研究表明,用棉签、滤纸2种材料擦拭扇贝的鳃丝、内脏团或外套膜组织均能获得主带清晰完整的基因组DNA,且不影响扇贝的存活状态。在3种扇贝中采用棉签擦拭法的DNA得率均高于滤纸法,以这2种方式获得的DNA为模板进行SSR和SNP标记分析,能获得均一稳定的扩增条带,SSR标记分型结果准确可靠。本研究建立了简便、快速进行扇贝基因型分析的非损伤性DNA提取方法,为贝类全基因组选育和珍稀贝类资源的种质保护开发提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 扇贝 非损伤性取样 DNA提取 基因分型
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