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西沙海藻共附生放线菌的分离鉴定及其抗菌活性评价 被引量：2
1
作者 于伟伟 唐贤明 +4 位作者 熊子君 张世清 王蓉 曾晓起 郭志凯 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1472-1489,共18页
【目的】为了探究南海海藻共附生放线菌资源的多样性及潜在的应用价值,对中国西沙群岛来源的海藻进行共附生放线菌的分离鉴定与抗菌活性筛选。【方法】利用稀释涂布平板法,采用2种不同分离培养基对不同采样位点的6种海藻进行放线菌分离... 【目的】为了探究南海海藻共附生放线菌资源的多样性及潜在的应用价值,对中国西沙群岛来源的海藻进行共附生放线菌的分离鉴定与抗菌活性筛选。【方法】利用稀释涂布平板法,采用2种不同分离培养基对不同采样位点的6种海藻进行放线菌分离;通过16S rRNA基因序列分析、构建系统发育树对分离的放线菌进行鉴定;用打孔法对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)等10种敏感细菌进行抗菌活性筛选;对筛选得到的目标活性菌株HZ014进行全基因组测序,通过AntiSMASH在线工具分析其次级代谢产物生物合成基因簇,预测其产生新型活性物质的潜力。【结果】从6种海藻中分离得到36株共附生放线菌,基于16S rRNA基因序列比对和系统发育分析,鉴定结果为链霉菌属(Streptomyces)2株、红球菌属(Rhodococcus)2株、诺卡氏菌属(Nocardia)3株、小单孢菌属(Micromonospora)5株和盐孢菌属(Salinispora)24株;抗菌活性筛选结果表明,36株共附生放线菌发酵粗提物对至少1种敏感细菌表现出一定的抑制作用,不同菌株发酵粗提物的抗菌活性存在明显差异,盐孢菌发酵粗提物抑菌谱较另外4个属更广;AntiSMASH分析结果显示,菌株HZ014基因组中超过22.28%的基因序列与次级代谢产物合成相关,表明盐孢菌属存在巨大的生物合成潜能,值得深入发掘。【结论】西沙海藻中蕴藏着丰富的可培养稀有放线菌资源,首次从西沙海藻共附生环境中分离得到专性海洋稀有放线菌盐孢菌属,且分离得到的36株海藻共附生放线菌发酵粗提物对部分敏感细菌具有较好的抗菌活性,在渔业病害防治中具有潜在的开发应用价值,有望为海洋药物或生物菌剂的研发提供新资源。 展开更多
关键词 海藻 共附生放线菌 盐孢菌属 抗菌活性
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切段部位、长度和培养温度对琼枝藻繁殖的影响
2
作者 童立豪 黄良夫 +2 位作者 吴翔宇 石耀华 唐贤明 《热带生物学报》 2024年第3期361-367,共7页
为了探究琼枝藻(Betaphycus gelatinae)组织切段培养的适宜条件,以琼枝藻为材料,研究不同切段部位(茎尖、分枝中部和主干)和切段长度(5、10、15 mm)的外植体切段在不同培养温度(21、24、27、30、33℃)下的出芽和生长。不同切段部位和切... 为了探究琼枝藻(Betaphycus gelatinae)组织切段培养的适宜条件,以琼枝藻为材料,研究不同切段部位(茎尖、分枝中部和主干)和切段长度(5、10、15 mm)的外植体切段在不同培养温度(21、24、27、30、33℃)下的出芽和生长。不同切段部位和切段长度的成活率和出芽率均达100%。不同切段部位出芽数由大到小依次为主干、分枝中部和茎尖;茎尖以伸长生长为主,主干和分枝中部则以上端切面膨大发芽为主;芽体形成于上端切面皮层,下端切面无芽体生成,表现出明显的极性。不同切段长度出芽数由大到小依次为15 mm组、10 mm组和5 mm组,15 mm组的个体出芽数分别为茎尖(5.90±0.67)个、分枝中部(10.16±1.14)个、主干(11.90±0.88)个;5 mm组出芽密度最高。琼枝藻切段培养适宜的生长温度为(21~27)℃,在此范围内,成活率和出芽率均为100%,且出芽数随温度的升高而增加;超过27℃,藻体切段的成活率和出芽率均下降。研究结果表明,琼枝藻最适组织切段培养部位为主干,长度为15 mm,培养温度为27℃。 展开更多
关键词 琼枝藻 外植体 组织培养 出芽增殖 温度
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光照强度与琼枝藻生长、光合色素和颜色值的相关性分析 被引量：4
3
作者 童立豪 吴翔宇 +3 位作者 黄良夫 曾俊 石耀华 唐贤明 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期79-85,共7页
文章探讨了不同光照强度(1000、3000、5000、7000和9000 lx)下琼枝藻(Betaphycus gelatinae)的生长、光合色素及颜色变化,基于CSE-1成像色度检测分析系统,研究了琼枝藻颜色参数L^(*)a^(*)b^(*)(CIE 1976)与光照强度、生长、光合色素的... 文章探讨了不同光照强度(1000、3000、5000、7000和9000 lx)下琼枝藻(Betaphycus gelatinae)的生长、光合色素及颜色变化,基于CSE-1成像色度检测分析系统,研究了琼枝藻颜色参数L^(*)a^(*)b^(*)(CIE 1976)与光照强度、生长、光合色素的相关性。结果显示,琼枝藻的相对生长速率和增重率均随光照强度的增加显著增大,适宜生长的光照强度为7000~9000 lx,光照强度为1000 lx时琼枝藻无明显生长。叶绿素a(Chl-a)、类胡萝卜素(Car)、藻红蛋白(PE)和藻蓝蛋白(PC)含量总体上随光照强度的增加呈下降趋势。随着光照强度的增加,琼枝藻的颜色由红褐色逐渐变为绿色,三刺激值XYZ在CIE 1931色度图上呈现明显的分布差异。光照强度与明度(L^(*))呈显著正相关(P<0.05),与红绿色度(a^(*))呈极显著负相关(P<0.01);生长速率与L^(*)、黄蓝色度(b^(*))均呈显著正相关(P<0.05);Chl-a与L^(*)呈显著负相关(P<0.05),与a^(*)呈显著正相关(P<0.05);PE和PC均与a^(*)呈显著正相关(P<0.05)。 展开更多
关键词 琼枝藻 光照强度 生长 光合色素 颜色参数 相关性分析
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巨藻中谷胱甘肽S转移酶基因对细长聚球藻PCC7942耐镉性的影响 被引量：1
4
作者 顾梓鹏 任玉东 +4 位作者 程芬 张晓雯 徐东 叶乃好 梁成伟 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第2期127-136,共10页
谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一个较大的基因家族,在生物体生长发育和对环境变化响应中发挥重要的调控作用。本研究从巨藻(Macrocystis pyrifera)配子体中克隆了6个完整的GST基因(mpgst1、mpgst2、mpgst3、mpgst4... 谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一个较大的基因家族,在生物体生长发育和对环境变化响应中发挥重要的调控作用。本研究从巨藻(Macrocystis pyrifera)配子体中克隆了6个完整的GST基因(mpgst1、mpgst2、mpgst3、mpgst4、mpgst5和mpgst6)。随后将6个巨藻GST基因分别转化至细长聚球藻(SynechococcuselongatusPCC7942)中,提取细长聚球藻转化株基因组DNA作为模板进行PCR验证及测定转化株GST酶活进行基因功能验证,结果显示,6个mpgst基因都分别成功整合到细长聚球藻的基因组中,但只有含mpgst1、mpgst4和mpgst6基因的细长聚球藻转化株(MG1、MG4和MG6)具有耐镉性。在镉离子胁迫下,细长聚球藻转化株MG1、MG4和MG6的生长、光合色素含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm值均显著高于野生株(P<0.05)。本研究结果为进一步研究巨藻GST基因的抗重金属胁迫功能奠定了基础。 展开更多
关键词 谷胱甘肽S转移酶基因 转基因 镉离子胁迫 巨藻 细长聚球藻PCC7942
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斑节对虾PmML1和PmML2基因的鉴定及表达分析
5
作者 符丹凤 刘洪涛 +1 位作者 杨明秋 何玉贵 《热带生物学报》 2022年第5期440-450,共11页
为进一步了解ML家族基因在斑节对虾先天免疫中的作用,采用PCR和RACE方法克隆到斑节对虾(Penaeus monodon)2个ML家族基因PmML1和PmML2,并对其进行生物信息学分析,同时通过实时荧光定量PCR技术分析2个ML家族基因在斑节对虾各组织的表达分... 为进一步了解ML家族基因在斑节对虾先天免疫中的作用,采用PCR和RACE方法克隆到斑节对虾(Penaeus monodon)2个ML家族基因PmML1和PmML2,并对其进行生物信息学分析,同时通过实时荧光定量PCR技术分析2个ML家族基因在斑节对虾各组织的表达分布。结果显示:PmML1的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为462 bp,编码153个氨基酸;PmML2的ORF为471 bp,编码156个氨基酸。2个基因都具有1个典型的ML家族蛋白结构域。多重比对结果显示,2个基因的ML结构域与组成3对二硫键的半胱氨酸残基位置都相对保守。氨基酸序列对比结果显示,PmML1和PmML2之间的相似性仅为42.37%。PmML1与日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)的ML蛋白MjML4的相似性最高,比例高达91.5%,PmML2与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的ML蛋白相似性最高,比例高达88.46%。系统进化分析结果显示,PmML1和PmML2存在于2个不同的分支,说明2个基因的进化相对独立,证明本研究中鉴定到的是2个不同的基因。实时荧光定量PCR结果显示,PmML1在对虾眼柄中的表达量最高,其次为肠、胃、心、鳃、肌肉和肝胰腺,在血细胞的表达水平最低;PmML2在眼柄中表达量最高,其次为肠、鳃、胃、血细胞、心、肝胰腺和肌肉,在肌肉中的表达水平最低。眼柄是重要的神经内分泌调节器官,推测PmML1和PmML2可能在斑节对虾神经内分泌调控等过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 斑节对虾 ML基因 克隆 组织表达
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西沙石珊瑚共附生放线菌的分离培养及抗菌活性评价 被引量：1
6
作者 李依霖 熊子君 +2 位作者 张世清 王蓉 郭志凯 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1756-1771,共16页
【背景】珊瑚礁生态系统是海洋中一类极其重要的生态系统,健康珊瑚礁中丰富的共附生放线菌群体是珊瑚抵御各种致病菌的重要防线,因此,这类放线菌是寻找抗菌活性分子的重要资源,其药用潜力巨大。【目的】从西沙石珊瑚样品中分离共附生放... 【背景】珊瑚礁生态系统是海洋中一类极其重要的生态系统,健康珊瑚礁中丰富的共附生放线菌群体是珊瑚抵御各种致病菌的重要防线,因此,这类放线菌是寻找抗菌活性分子的重要资源,其药用潜力巨大。【目的】从西沙石珊瑚样品中分离共附生放线菌,并从中筛选具有良好抗菌活性的菌株。【方法】通过稀释涂布法分离珊瑚共附生放线菌,并根据16S rRNA基因序列构建系统发育树进行菌种鉴定;通过平板对峙法对放线菌进行抗菌活性筛选并确定目标菌株;将目标菌株涂布于不同氯化钠浓度的ISP2固体培养基上培养,测试其盐度耐受能力;通过平板对峙法对该菌株发酵产物的热稳定性和光稳定性进行测试;采用NanoPore和Illumina方法完成目标活性放线菌全基因组测序,并通过antiSMASH在线分析预测其次级代谢产物生物合成基因簇及其结构类型。【结果】从6份西沙石珊瑚样品中分离得到104株可培养放线菌,根据菌落形态和分离来源去重后对其中27株放线菌进行16S rRNA基因序列测序,通过序列比对和系统发育树分析将菌株初步鉴定为盐孢菌属(Salinispora)(25株)、链霉菌属(Streptomyces)(1株)和戈登菌属(Gordonia)(1株)。活性筛选结果表明,盐孢菌株SH098抑菌活性最好,该菌株在无盐的培养基中不生长,盐耐受范围为2%−5%,其发酵产物的抗菌活性具有良好的热稳定性和光稳定性。全基因组序列分析显示,盐孢菌株SH098基因组中21.93%的基因序列与次级代谢产物合成相关,预测的次级代谢产物结构类型多样,有待深入发掘。【结论】首次从我国西沙石珊瑚中分离得到具有嗜盐特性和抗农业病原细菌活性的盐孢菌,丰富了我国西沙海域来源的专性海洋放线菌资源,为海水养殖业的新型微生态制剂的研发提供新菌种资源,也为后期挖掘新型抗菌活性物质奠定了研究基础。 展开更多
关键词 石珊瑚 共附生放线菌 分离培养 沙栖盐孢菌 抗菌活性
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海洋链霉菌Streptomyces sp. rssa2的次生代谢产物及其抗菌活性研究 被引量：1
7
作者 王蓉 郭志凯 +2 位作者 程芬 冯全英 詹夏菲 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2023年第1期19-24,共6页
目的 研究1株珊瑚来源的共附生链霉菌菌株Streptomyces sp. rssa2的次生代谢产物及其抗菌活性。方法 采用正相硅胶柱色谱、ODS反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱(HPLC)等手段对rssa2的发酵产物进行分离纯... 目的 研究1株珊瑚来源的共附生链霉菌菌株Streptomyces sp. rssa2的次生代谢产物及其抗菌活性。方法 采用正相硅胶柱色谱、ODS反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱(HPLC)等手段对rssa2的发酵产物进行分离纯化,通过核磁、质谱数据并结合文献数据鉴定化合物结构;通过滤纸片法和稀释法对化合物的抗菌活性进行测定。结果 从海洋链霉菌Streptomyces sp. rssa2的液体麦芽提取物培养基发酵产物中分离得到3个主要成分,其结构分别鉴定为大环内酯类化合物aldgamycin G(1)、aldgamycin E(2)、swalpamycin(3)。抗菌活性测试结果显示,化合物1~3均对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的生长具有弱抑制活性。结论 化合物1~3均为首次从珊瑚共附生链霉菌中分离获得,并且发现它们具有一定程度的抗菌活性,具有潜在的研究价值。 展开更多
关键词 海洋链霉菌 次生代谢产物 大环内酯 阿德加霉素 抗菌活性
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方斑东风螺3个选育世代遗传多样性和遗传结构的微卫星分析 被引量：3
8
作者 梁园 付敬强 +3 位作者 沈铭辉 骆轩 游伟伟 柯才焕 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期85-93,共9页
采用12个多态性微卫星标记对方斑东风螺(Babylonia areolata)泰国选育系TF4~TF6连续3代选育群体的遗传多样性与遗传结构进行了分析。3个群体的多态信息含量分别为0.730、0.717和0.708,均高于0.5,表现出较高的多态性。平均等位基因数(A)... 采用12个多态性微卫星标记对方斑东风螺(Babylonia areolata)泰国选育系TF4~TF6连续3代选育群体的遗传多样性与遗传结构进行了分析。3个群体的多态信息含量分别为0.730、0.717和0.708,均高于0.5,表现出较高的多态性。平均等位基因数(A)、有效等位基因数(Ae)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和Shannon’s信息指数(I)的变化范围分别为11.667~12.583、6.334~6.915、0.658~0.672、0.737~0.787和1.837~2.003,整体呈降低趋势,但差异并不显著(P>0.05)。分子方差分析结果显示,群体间的遗传变异仅占总变异的0.95%;群体间的遗传分化系数(Fst)介于0.00569~0.01324,处于低等分化水平(Fst<0.05)。主坐标分析和STRUCTURE分析结果显示,3个群体呈现出相似的遗传背景和遗传结构。以上研究结果表明,经过连续多代的人工选育,方斑东风螺选育群体保持着较高的遗传多样性水平,遗传变异和遗传分化水平较低,遗传结构趋于稳定,仍具有较高的遗传选育潜力。 展开更多
关键词 方斑东风螺(Babylonia areolata) 选育群体 微卫星标记 遗传多样性 遗传结构
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中国南海海洋链霉菌Streptomyces sp.rssa1的化学成分研究 被引量：1
9
作者 王蓉 郭志凯 +2 位作者 程芬 冯全英 詹夏菲 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2022年第6期975-980,共6页
对中国南海珊瑚样品来源的链霉菌Streptomyces sp.rssa1代谢产物进行研究。采用正相硅胶柱、ODS反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱以及半制备高效液相色谱等分离方法,从该菌株的大米固体培养基发酵产物中分离得到10个化合物,通过NMR、M... 对中国南海珊瑚样品来源的链霉菌Streptomyces sp.rssa1代谢产物进行研究。采用正相硅胶柱、ODS反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱以及半制备高效液相色谱等分离方法,从该菌株的大米固体培养基发酵产物中分离得到10个化合物,通过NMR、MS等波谱数据,将化合物结构分别鉴定为四霉素A(1)、四霉素B(2)、kanglemycin M(3)、tryptophandehydrobutyrine diketopiperazine(4)、3-吲哚乙酰胺(5)、N-乙酰基色氨酸(6)、苯乙酸(7)、N-乙酰基酪胺(8)、苯甲酰胺(9)、苯乙酰胺(10)。抗菌活性筛选显示,化合物4对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的生长具有弱抑制活性。细胞毒活性测试结果显示,化合物3对巨噬细胞RAW 264.7具有细胞毒活性。环化核苷酸磷酸二酯酶PDE4水解抑制活性筛选未发现化合物在测试浓度下具有抑制活性。 展开更多
关键词 珊瑚 链霉菌 四烯大环内酯 四霉素 二酮哌嗪类化合物
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不同营养盐条件对琼枝生长的影响 被引量：2
10
作者 曾俊 童立豪 +2 位作者 吴翔宇 黄敏 唐贤明 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2021年第4期168-176,共9页
本研究分别测定了不同无机氮浓度(50、100、200、400和800μmol/L)、不同无机磷浓度(2.5、5、10、20、40和80μmol/L)和不同氨氮(NH_(4)^(+)-N)、硝酸盐氮(NO_(3)^(–)-N)浓度比(0/100、25/75、50/50、75/25和100/0)培养条件下,琼枝(Bet... 本研究分别测定了不同无机氮浓度(50、100、200、400和800μmol/L)、不同无机磷浓度(2.5、5、10、20、40和80μmol/L)和不同氨氮(NH_(4)^(+)-N)、硝酸盐氮(NO_(3)^(–)-N)浓度比(0/100、25/75、50/50、75/25和100/0)培养条件下,琼枝(Betaphycus gelatinae)生长及色素含量的变化,评估适合其生长的营养盐条件。结果显示,适合琼枝生长的无机氮浓度为0~200μmol/L,无机磷浓度为2.5~10μmol/L,NH_(4)^(+)-N/NO_(3)^(-)-N浓度比为25/75。在适宜的营养盐条件范围内,琼枝生长状态较好,具有较高的增重率;而当无机氮浓度超过200μmol/L、无机磷浓度超过10μmol/L或NH_(4)^(+)-N/NO_(3)^(-)-N浓度比高于50/50时,培养初期,琼枝生长缓慢,具有一定的耐受能力,但培养时间过长,不利于琼枝正常生长,引起藻体白烂严重、增重率急剧下降。本研究表明,琼枝适合在低营养盐环境下生长,结果可为琼枝规模化增殖栽培提供理论基础。 展开更多
关键词 琼枝 营养盐 生长 色素
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