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水牛TLR2cDNA的克隆与生物信息学分析 被引量：4
1
作者 张晓茹 匡文华 +8 位作者 成鹰 杜丽 张冬琳 郝永昌 雷明 刘涛 焦寒伟 王凤阳 祁超 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期35-41,共7页
本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2)cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接。将拼接产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的序列全长2 455bp,含有一个... 本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2)cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接。将拼接产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的序列全长2 455bp,含有一个大小为2 355bp的开放阅读框,共编码784个氨基酸,分子质量为90.2ku,理论等电点为6.92;TLR2ORF序列与GenBank上登载的水牛核苷酸序列同源性为99.53%,与黄牛、马、人、黑猩猩和狗的核苷酸序列同源性分别为97.88%、84.94%、83.12%、82.95%和82.74%,具有很高的相似性;该蛋白是一个跨膜蛋白,存在LRR、LRR-TYP、LRRCT及TIR结构域,与Toll样受体家族成员的共同结构相一致。水牛TLR2基因的成功克隆及序列分析和结构预测为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 TOLL样受体2 水牛 分子克隆 生物信息学分析
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转基因表达的时空调控
2
作者 杜丽 孟庆文 +1 位作者 满处日嘎 王凤阳 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第10期102-105,共4页
建立转基因表达的时空调控系统,对于分析基因在组织或发育阶段的特异表达,以及建立研究外源基因表达、调控的动物模型等方面,具有极其重要的应用价值。论文综述了近年来基于四环素(tetracy-cline,Tet)的调控系统,基于酵母转录激活蛋白,... 建立转基因表达的时空调控系统,对于分析基因在组织或发育阶段的特异表达,以及建立研究外源基因表达、调控的动物模型等方面,具有极其重要的应用价值。论文综述了近年来基于四环素(tetracy-cline,Tet)的调控系统,基于酵母转录激活蛋白,小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和RNA干扰(RNA interference,RNAi)等转基因表达的时空调控技术研究进展。 展开更多
关键词 转基因 表达 时空调控
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水牛CD14 cDNA的克隆、表达及鉴定
3
作者 陈品林 杜丽 +7 位作者 雷明 成鹰 陈兴生 莫蘼 刘涛 张冬琳 崔森 王凤阳 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期28-32,共5页
目的:克隆水牛白细胞分化抗原14(buffalo cluster of differentiation antigen14,bCD14)基因,表达bCD14蛋白,并进行Western Blot鉴定。方法:采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bCD14基因,构建重组质粒pET28a-bCD14,转化入Ecoli BL2... 目的:克隆水牛白细胞分化抗原14(buffalo cluster of differentiation antigen14,bCD14)基因,表达bCD14蛋白,并进行Western Blot鉴定。方法:采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bCD14基因,构建重组质粒pET28a-bCD14,转化入Ecoli BL21,IPTG诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析及Western blot鉴定。结果:bCD14基因含有一个1 122bp的开放阅读框,编码373个氨基酸;与印度水牛、挪威大鼠和人CD14的cDNA序列同源性分别为97.95%、68.78%、78.60%,氨基酸同源性分别为96.78%、61.27%、72.34%;主要以包涵体形式表达,表达蛋白经Western Blot鉴定,得到了一条约46 kD的特异性条带。结论:该文成功克隆了bCD14基因,表达了bCD14蛋白,为进一步揭示水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的免疫机制奠定了基础。 展开更多
关键词 水牛 CD14 克隆 表达 纯化
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海南坡鹿MD2 cDNA的克隆及其生物信息学分析
4
作者 杜丽 谢少林 +8 位作者 成鹰 张晓茹 匡文华 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 雷明 刘涛 王凤阳 《热带生物学报》 2011年第1期1-5,共5页
以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码... 以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98.55%,77.43%,78.47%和74.74%。该基因编码的蛋白质相对分子质量约为19×103,理论等电点为8.18。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为非跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占16.25%,β-折叠片占38.13%,无规则卷曲占45.63%。 展开更多
关键词 海南坡鹿 MD2 克隆 生物信息学分析
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五指山小型猪PDCD10 cDNA的克隆及生物信息学分析
5
作者 杜丽 荣辉 +6 位作者 张珈宁 侯冠彧 周汉林 郭莳雨 贾晓哓 史巧芸 王凤阳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期40-42,174,175,共5页
为了克隆五指山小型猪程序性死亡因子10(PDCD10)cDNA基因并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法,克隆得到PDCD10全长cDNA序列,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列并预测其编码... 为了克隆五指山小型猪程序性死亡因子10(PDCD10)cDNA基因并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法,克隆得到PDCD10全长cDNA序列,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:经比对分析发现,五指山小型猪PDCD10基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、牛、鸡、非洲爪蟾、斑马鱼、黑腹果蝇等具有较高的相似性。生物信息学分析结果表明,该cDNA序列全长1 250 bp,在序列3'末端有终止信号AATAAA。含636 bp(184～819 nt)的开放阅读框,编码212个氨基酸。该蛋白理论等电点(PI)及分子质量分别为7.80和24 701.57 u。 展开更多
关键词 五指山小型猪 CDNA文库 程序性死亡因子10(PDCD10) 克隆 序列分析
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五指山小型猪DAZAP2cDNA的克隆及其生物信息学分析
6
作者 杜丽 荣辉 +6 位作者 张珈宁 侯冠彧 周汉林 郭莳雨 贾晓哓 史巧芸 王凤阳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期31-33,163,共4页
为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码... 为了克隆五指山小型猪DAZ相关蛋白2(DAZAP2)cDNA全长并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法克隆得到DAZAP2全长cDNA序列,并运用生物信息学软件对其核苷酸序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:五指山小型猪DAZAP2基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、苏门达腊猩猩、斑马鱼、非洲爪蟾、牛、褐家鼠等动物具有很高的相似性。DAZAP2 cDNA全长943 bp,5'非翻译区长69 bp,3'非翻译区长367 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸。该蛋白的分子质量为17 311 ku,等电点为7.48。 展开更多
关键词 五指山小型猪 CDNA文库 DAZ相关蛋白2(DAZAP2) 克隆 序列分析
原文传递
水牛Cdc42 cDNA的克隆与生物信息学分析
7
作者 张晓茹 匡文华 +7 位作者 成鹰 杜丽 雷明 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 祁超 王凤阳 《热带生物学报》 2011年第4期349-354,共6页
通过RT-PCR扩增得到水牛细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)cDNA序列,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的序列全长626bp,含有1个大小为576bp的开放阅读框,共编码191个氨基酸... 通过RT-PCR扩增得到水牛细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)cDNA序列,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的序列全长626bp,含有1个大小为576bp的开放阅读框,共编码191个氨基酸,相对分子质量为21.3×103,理论等电点为6.16;Cdc42ORF序列与Genbank上登载的黄牛、狗、小鼠和人的核苷酸序列同源性分别为99.65%、96.70%、94.97%和94.10%,具有很高的相似性;该蛋白为非跨膜蛋白,存在1个RHO结构域。 展开更多
关键词 CDC42 水牛 基因克隆 生物信息学分析
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布鲁菌Omp31基因的克隆、表达及其蛋白的生物信息学分析
8
作者 郭莳雨 成鹰 +7 位作者 贾晓晓 史巧芸 荣辉 张珈宁 朱华培 杜丽 焦寒伟 王凤阳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期8-10,共3页
为了进一步研究Omp31蛋白的功能,试验利用DNAMan软件设计上、下游引物,通过PCR技术从马耳他布鲁菌M5-90株中克隆获得Omp31基因,构建原核表达重组质粒pET28a-Omp31,并转化E.coli BL21(DE3)感受态;再以IPTG诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE... 为了进一步研究Omp31蛋白的功能,试验利用DNAMan软件设计上、下游引物,通过PCR技术从马耳他布鲁菌M5-90株中克隆获得Omp31基因,构建原核表达重组质粒pET28a-Omp31,并转化E.coli BL21(DE3)感受态;再以IPTG诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE和Western-blot检测,并运用生物信息学软件对所获得的核苷酸序列进行分析。结果表明:成功克隆了马耳他布鲁菌外膜蛋白Omp31基因,并构建出重组质粒pET28a-Omp31;经IPTG诱导,得到与预期大小相符的目的蛋白;生物信息学分析发现,Omp31蛋白核苷酸序列包括1个723 bp的开放读码框,编码240个氨基酸;该蛋白二级结构中存在大量无规则卷曲和少量α螺旋。 展开更多
关键词 布鲁菌Omp31 克隆 原核表达 生物信息学分析
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水牛四种主要细菌性传染病研究概况
9
作者 杜丽 王凤阳 《动物医学进展》 北大核心 2016年第8期99-103,共5页
随着国内水牛养殖集约化程度的提高,对于水牛细菌性传染病研究水平提升的需求日益迫切。乳房炎、布鲁菌病、结核病和李氏杆菌病是水牛4种主要的细菌性传染病,国内相关研究报道较少。血清学调查可以为水牛细菌性传染病的流行提供基础数据... 随着国内水牛养殖集约化程度的提高,对于水牛细菌性传染病研究水平提升的需求日益迫切。乳房炎、布鲁菌病、结核病和李氏杆菌病是水牛4种主要的细菌性传染病,国内相关研究报道较少。血清学调查可以为水牛细菌性传染病的流行提供基础数据;病原分型可以为水牛细菌性传染病的诊断提供重要依据;诊断技术的准确性和特异性研究可以提高水牛细菌性传染病的诊断水平。基于此,对国外关于乳房炎、布鲁菌病、结核病和李氏杆菌病等水牛细菌病在血清学调查、病原分型、诊断技术等方面的研究进展进行了综述,旨在为提高我国水牛细菌性传染病的研究水平提供参考。 展开更多
关键词 水牛 细菌性传染病 诊断
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