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miR-494在阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究
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作者 沈盛晖 叶建华 +2 位作者 吴相忠 冯频频 彭鹏 《心电与循环》 2024年第4期316-322,I0001,共8页
目的探讨miR-494在阿霉素(DOX)诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制。方法将大鼠H9C2细胞分为4组:对照组、DOX组、DOX+阴性对照(NC)模拟物组、DOX+miR-494模拟物组;除对照组,其余3组均采用5μmol/L DOX与细胞共孵育法构建心肌细胞损伤模... 目的探讨miR-494在阿霉素(DOX)诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制。方法将大鼠H9C2细胞分为4组:对照组、DOX组、DOX+阴性对照(NC)模拟物组、DOX+miR-494模拟物组;除对照组,其余3组均采用5μmol/L DOX与细胞共孵育法构建心肌细胞损伤模型;后两组分别进行NC模拟物、miR-494模拟物转染。采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-494、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)m RNA表达水平,原位末端转移酶标记染色法检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、PTEN、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-494与PTEN的相互作用。结果与对照组比较,DOX组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显升高(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显降低(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。PTEN与miR-494存在结合位点;PTEN-WT的荧光素酶活性被miR-494模拟物明显抑制(P=0.010),而PTEN-MUT的荧光素酶活性不受miR-494模拟物影响(P=0.707)。与对照组比较,DOX组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。结论miR-494可能通过靶向抑制PTEN表达来调控PI3K/Akt信号通路,以改善DOX诱导的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 阿霉素 miRNA-494 心肌细胞 磷酸酶和张力蛋白同系物 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路
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