一次性生物反应器的研究进展 被引量：8

1

作者 王远山 朱旭 +1 位作者 牛坤 徐建妙 《发酵科技通讯》 CAS 2015年第3期56-64,共9页

对一次性生物反应器的发展历程、特点、应用及放大等进行了综述,重点介绍了波浪混合式、搅拌式和轨道振摇式三种一次性生物反应器,并对一次性生物反应器面临的挑战及其未来发展进行了展望。

关键词 一次性生物反应器 工作原理 应用 放大

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具有非对映选择性还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株筛选与鉴定 被引量：3

2

作者 毛芳芳 王亚军 +2 位作者 罗希 魏积福 郑裕国 《化学与生物工程》 CAS 2012年第7期12-16,共5页

6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀钙的关键手性前体。从自然环境中筛选得到一株具有非对映选择性还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的菌株X25,结合表型特征、生理生化特征和分子遗传学鉴定,确定菌株X25属于季... 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀钙的关键手性前体。从自然环境中筛选得到一株具有非对映选择性还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的菌株X25,结合表型特征、生理生化特征和分子遗传学鉴定,确定菌株X25属于季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)。研究了P.guilliermondii X25静息细胞非对映选择性还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯制备6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯过程。结果表明,最佳催化条件为35℃、pH值7.0;在低底物转化率时,能够制备光学纯6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。 展开更多

关键词 阿托伐他汀钙 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 羰基还原酶 季也蒙毕赤酵母

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糖尿病治疗药物及其合成进展 被引量：18

3

作者 朱芳莹 董正伟 +1 位作者 朱文渊 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第3期175-181,共7页

糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,而且患病率呈逐年上升趋势,糖尿病的治疗已成为全球性的重大公共卫生问题。介绍了糖尿病治疗药物及其分类,重点介绍了格列美脲、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮、阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列... 糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性疾病,而且患病率呈逐年上升趋势,糖尿病的治疗已成为全球性的重大公共卫生问题。介绍了糖尿病治疗药物及其分类,重点介绍了格列美脲、二甲双胍、罗格列酮、吡格列酮、阿卡波糖、伏格列波糖、瑞格列奈、那格列奈、西他列汀和维格列汀等重要降糖药物的作用机理、合成路线及应用等,以期为更加安全、有效、合理地选择降糖药物提供一定的依据。 展开更多

关键词 糖尿病 降糖药 合成 化学法 生物法

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模拟移动床色谱技术分离果糖研究进展 被引量：8

4

作者 姜夏伟 王亚军 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2015年第4期55-60,共6页

主要综述了模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱分离技术从果葡糖浆中分离果糖的应用研究进展。从工作原理、固定相、阀系统、自动化控制、数学模型及工艺参数优化等方面对SMB技术进行了系统介绍,为我国的高纯果糖浆和结晶果糖的... 主要综述了模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱分离技术从果葡糖浆中分离果糖的应用研究进展。从工作原理、固定相、阀系统、自动化控制、数学模型及工艺参数优化等方面对SMB技术进行了系统介绍,为我国的高纯果糖浆和结晶果糖的产业发展提供参考意见。 展开更多

关键词 果葡糖浆 SMB 色谱分离

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羰基还原酶不对称还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯 被引量：8

5

作者 曹政 王亚军 +2 位作者 肖黎 柳志强 郑裕国 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期17-22,共6页

选择R-羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶双酶,协同催化(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原制备阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。转化条件优化结果显示:在不添加外源性辅酶NADP(H)、菌体用量15.0 g/L、147... 选择R-羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶双酶,协同催化(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原制备阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。转化条件优化结果显示:在不添加外源性辅酶NADP(H)、菌体用量15.0 g/L、147.0 g/L(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯、128.2g/L葡萄糖,30℃、pH 6.5条件下反应6 h后,底物转化率达到100%,产物d.e.值大于99.5%。 展开更多

关键词 不对称生物还原 阿托伐他汀 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 辅酶再生

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生物催化法合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯 被引量：6

6

作者 肖黎 王亚军 +2 位作者 曹政 柳志强 郑裕国 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期29-34,共6页

利用E.coli BL21/pCDFDuet-gdh-cr-X共表达全细胞催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。结果表明:在菌体用量4.85 g/L、葡萄糖与底物质量浓度比为1∶1、温度28℃、pH 7.0条件下,80.0 g... 利用E.coli BL21/pCDFDuet-gdh-cr-X共表达全细胞催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。结果表明:在菌体用量4.85 g/L、葡萄糖与底物质量浓度比为1∶1、温度28℃、pH 7.0条件下,80.0 g/L 6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯生物还原2 h后,底物转化率可达99.0%,产物d.e.值大于99.5%。在考察范围内,NADP+用量对催化效率无显著作用。 展开更多

关键词 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 羰基还原酶 葡萄糖脱氢酶 共表达

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手性医药化学品生物催化合成进展与实践 被引量：4

7

作者 郑裕国 沈寅初 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第2期24-29,共6页

手性生物催化是利用生物催化剂对手性分子构型的识别能力进行选择性催化的新型物质加工过程,具有催化效率高、选择性强和反应条件温和等优势。近十年来,生物催化技术快速崛起,树立了多个大品种原料药过程替代的成功范例,成为手性医药化... 手性生物催化是利用生物催化剂对手性分子构型的识别能力进行选择性催化的新型物质加工过程,具有催化效率高、选择性强和反应条件温和等优势。近十年来,生物催化技术快速崛起,树立了多个大品种原料药过程替代的成功范例,成为手性医药化学品绿色制造不可或缺的重要工具。笔者分析了生物催化商业和学术发展的新动向,并结合笔者在手性药物生物催化合成的产业化开发实践,指出了今后的发展方向。 展开更多

关键词 手性药物 生物催化 酶工程 绿色制药

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阿卡波糖结构类似物组分A形成机制研究及其制备 被引量：3

8

作者 黄剑川 王超儿 王亚军 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第4期1-6,共6页

本文初步探究了阿卡波糖结构类似物组分A的形成机制,并首次尝试制备克级样品。实验数据揭示,阿卡波糖异构化是组分A形成的原因,该过程不依赖菌丝体的参与。建立了利用阿卡波糖异构化反应合成组分A的方法,在60°C、pH 11条件下反应3... 本文初步探究了阿卡波糖结构类似物组分A的形成机制,并首次尝试制备克级样品。实验数据揭示,阿卡波糖异构化是组分A形成的原因,该过程不依赖菌丝体的参与。建立了利用阿卡波糖异构化反应合成组分A的方法,在60°C、pH 11条件下反应3 h,组分A得率最高(33.6%)。利用强酸型阳离子交换层析和中性氧化铝层析,从阿卡波糖异构化反应液中制备到纯度达95.4%(w/w)的组分A,为后续系统研究发酵液中杂质组分A的分离去除提供材料。 展开更多

关键词 阿卡波糖 异构化反应 纯化 层析

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E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)-cr羰基还原酶分离纯化及酶学性质研究 被引量：3

9

作者 王亚军 吴配配 +1 位作者 罗希 郑裕国 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期607-615,共9页

利用强酸型阳离子交换层析和疏水作用层析技术,从实验室构建的羰基还原酶工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-cr细胞中分离得到电泳纯NADP(H)依赖型的羰基还原酶,LC-MS-QTOF分析揭示其相对分子质量为35.4 k Da。该酶能不对称还原6-氰基-... 利用强酸型阳离子交换层析和疏水作用层析技术,从实验室构建的羰基还原酶工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-cr细胞中分离得到电泳纯NADP(H)依赖型的羰基还原酶,LC-MS-QTOF分析揭示其相对分子质量为35.4 k Da。该酶能不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯(CHOHB)、4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯、(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,对丙酮酸乙酯、丁二酮也表现出较高的还原能力。该羰基还原酶的最适作用条件为:30℃,p H7.5;且活性不依赖于金属离子。它催化CHOHB还原反应的最大反应速度vmax 54.3μmol·mg-1·min-1,KmCHOHB值4.4 mmol·L-1;作用于COBE时,最大反应速度vmax 36.5μmol·mg-1·min-1,KmCOBE值1.2×10-1 mmol·L-1。E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-cr羰基还原酶在他汀手性侧链制造上具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 R-羰基还原酶 分离纯化 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 (S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

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腈水解酶固定化的研究进展 被引量：3

10

作者 黄季维 邹树平 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第2期114-117,共4页

腈水解酶在医药及其中间体、农药及其中间体、食品、饲料添加剂等精细化学品工业生产中具有十分广泛的应用。固定化腈水解酶便于贮存和重复利用,有利于产物分离和连续化生产。介绍了常用的腈水解酶固定化方法,如包埋法、吸附法、共价法... 腈水解酶在医药及其中间体、农药及其中间体、食品、饲料添加剂等精细化学品工业生产中具有十分广泛的应用。固定化腈水解酶便于贮存和重复利用,有利于产物分离和连续化生产。介绍了常用的腈水解酶固定化方法,如包埋法、吸附法、共价法、交联法以及新型固定化方法,如膜截留固定化法、定向固定化法。这些固定化方法对提高腈水解酶稳定性和重复使用批次起着重要的作用。 展开更多

关键词 腈水解酶 固定化 研究进展

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具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株筛选和鉴定 被引量：3

11

作者 盛骏桢 王亚军 +1 位作者 罗希 郑裕国 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期54-59,共6页

从土样中分离得到一株具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株ZJB-09225,经生理生化特征鉴定和18S rDNA测序后鉴定为卡里比克毕赤酵母(Pichia caribbic ZJB-09225)。研究结果发现,在最适发酵条件下培养3... 从土样中分离得到一株具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株ZJB-09225,经生理生化特征鉴定和18S rDNA测序后鉴定为卡里比克毕赤酵母(Pichia caribbic ZJB-09225)。研究结果发现,在最适发酵条件下培养32 h,生物量为8.8 g/L,体积酶活达7.2 U/L;P.caribbic ZJB-09225最适作用温度、最适作用pH值分别为35℃和7.5。在最适的催化条件下,P.caribbic ZJB-09225细胞催化50.0 g/L(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯3 h后,产物6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯得率3.4%,产物d.e.值99.5%以上。 展开更多

关键词 羰基还原酶 卡里比克毕赤酵母 阿托伐他汀 (R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯

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手性医药化学品生物催化绿色制造 被引量：2

12

作者 郑裕国 柳志强 沈寅初 《生物产业技术》 2013年第6期20-26,共7页

生物催化具有选择性强、催化效率高、反应条件温和、环境友好等优点，广泛应用于传统化学方法不能或者不易合成的手性化合物的生产过程中，已成为化学合成法的一种重要补充。同时，生物催化能够更好地解决资源、能源和环境方面的压力，... 生物催化具有选择性强、催化效率高、反应条件温和、环境友好等优点，广泛应用于传统化学方法不能或者不易合成的手性化合物的生产过程中，已成为化学合成法的一种重要补充。同时，生物催化能够更好地解决资源、能源和环境方面的压力，维持和谐的生态环境，促进工业的可持续发展。近年来，生物催化技术已在手性医药化学品产业化生产中得到了广泛的应用，有效地实现了手性医药化学品的绿色制造。本文就生物催化介入的手性医药化学品的产业化技术和过程进行介绍。 展开更多

关键词 生物催化技术 手性化合物 绿色制造 化学品 医药 化学合成法 环境友好 可持续发展

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全细胞生物转化二氯丙醇合成环氧氯丙烷的工艺研究 被引量：2

13

作者 邹树平 秦超 +1 位作者 胡忠策 郑裕国 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期43-46,共4页

针对传统环氧氯丙烷生产工艺中二氯丙醇皂化过程产生大量高碱度、高含盐量有机废水问题,提出利用生物法转化二氯丙醇合成环氧氯丙烷的绿色工艺。利用表达重组卤醇脱卤酶的大肠杆菌全细胞为生物催化剂,考察了pH、温度、全细胞菌体添加量... 针对传统环氧氯丙烷生产工艺中二氯丙醇皂化过程产生大量高碱度、高含盐量有机废水问题,提出利用生物法转化二氯丙醇合成环氧氯丙烷的绿色工艺。利用表达重组卤醇脱卤酶的大肠杆菌全细胞为生物催化剂,考察了pH、温度、全细胞菌体添加量、底物浓度等对生物转化过程的影响。结果表明,优化的工艺条件为:最适pH为8.3,最适反应温度为45℃,全细胞菌体添加量为10 mg(DCW)/mL,底物浓度为20 mmol/L,在此条件下转化8 h后,1,3-二氯丙醇的最高转化率可达92.3%。全细胞生物催化剂重复反应3次后活力仍保留在80%以上,显示了其良好的应用前景。 展开更多

关键词 卤醇脱卤酶 全细胞生物转化 二氯丙醇 皂化废水 环氧氯丙烷

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摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质 被引量：1

14

作者 郑仁朝 王天真 +1 位作者 黎小军 郑裕国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期129-138,共10页

立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepha... 立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。 展开更多

关键词 摩氏摩根菌 酯酶 分离纯化 酶学性质 (S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸

原文传递

生物转化液下游预处理工艺开发 被引量：1

15

作者 许贤恩 王仁凤 王亚军 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第3期11-15,共5页

生物转化液中大量菌体细胞、蛋白、细胞碎片的存在导致产物回收困难,本文考察了运用混凝技术、破乳技术去除转化液中的菌体及蛋白质的可行性。实验结果揭示,添加铝盐、铁盐及其高聚物有助于去除转化液中的菌体及蛋白质;对于已发生乳化... 生物转化液中大量菌体细胞、蛋白、细胞碎片的存在导致产物回收困难,本文考察了运用混凝技术、破乳技术去除转化液中的菌体及蛋白质的可行性。实验结果揭示,添加铝盐、铁盐及其高聚物有助于去除转化液中的菌体及蛋白质;对于已发生乳化现象的转化液,则需要添加少量表面活性剂如十二烷基硫酸钠后再进行混凝处理。处理过的生物转化液,蛋白质、菌体去除率接近100%,方便后续产物回收。工作为工业生物催化过程下游产品回收提供借鉴。 展开更多

关键词 生物转化液 乳化 混凝 破乳

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棘白菌素B提取液脱色工艺 被引量：1

16

作者 邹树平 刘苗 +3 位作者 钟伟 牛坤 姚黎栋 郑裕国 《生物加工过程》 CAS 2015年第2期98-102,共5页

研究碱性阴离子交换树脂WD-6对发酵棘白菌素B(ECB)提取液的脱色效果。通过对ECB提取液和ECB标准溶液的全波长扫描,确定ECB提取液中色素的最佳吸收波长为315nm;考察了树脂添加量、脱色温度、摇床转速和脱色时间对脱色率和ECB损失率的影响... 研究碱性阴离子交换树脂WD-6对发酵棘白菌素B(ECB)提取液的脱色效果。通过对ECB提取液和ECB标准溶液的全波长扫描,确定ECB提取液中色素的最佳吸收波长为315nm;考察了树脂添加量、脱色温度、摇床转速和脱色时间对脱色率和ECB损失率的影响,获得最佳脱色工艺:树脂添加量4%(质量分数),脱色温度30℃,摇床转速150r/min,脱色时间100min。在此条件下,ECB提取液的脱色率可达88.3%,ECB损失率仅为4.8%。 展开更多

关键词 棘白菌素B 脱色 离子交换树脂

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反-Prelog规则羰基还原酶产生菌Debaryomyces castellii ZJB-12032产酶条件优化研究

17

作者 姚震 罗希 +1 位作者 王亚军 郑裕国 《发酵科技通讯》 CAS 2014年第2期1-5,共5页

6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合... 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合反-prelog规则。通过优化D.castellii ZJB-12032发酵产酶条件,包括碳源、氮源、磷源、接种量、接种时间、发酵时间,获得其最佳培养基配方:麦芽糖50 g/L、NaNO315 g/L、NaH2PO4·2H2O 0.5 g/L、Na2HPO4·12H2O 0.5 g/L,最适发酵条件:接种量10%,种龄8 h,培养温度30℃,发酵时间24h。在上述最佳发酵条件下,发酵液体积酶活达到10.2 U/L,比酶活1.20 U/g dcw,产物d.e.值99.6%,D.castellii ZJB-12032表现出高差向选择性。 展开更多

关键词 6-氰基-(3R 5R)-二羟基己酸叔丁酯 羰基还原酶 反-Prelog规则

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