乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进 被引量：8

1

作者 陈勇兵 陈如坤 +4 位作者 陈力 吴明 施立 杨文涛 钱永跃 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期189-190,F002,共3页

　目的　建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型。方法　通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60 min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞。结果　形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达... 　目的　建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型。方法　通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60 min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞。结果　形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达 95%以上。结论　该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础。 展开更多

关键词 乳鼠 心肌成纤维细胞 细胞培养 免疫细胞化学染色

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新型假型逆转录病毒载体的构建 被引量：4

2

作者 陈勇兵 陈如坤 +4 位作者 陈力 吴明 施立 杨文涛 钱永跃 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期644-646,F003,i001,共5页

目的 将疱疹性口炎病毒壳G糖蛋白(VSV-G)用于构建新型假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)。方法 利用三质粒系统一过性转染293T/17细胞,通过磷酸钙共沉淀法产生VSV-G/MuLV;一过性转染后的病毒上清转导包装细胞系293/GPC以产生VSV-G/MuLV生... 目的 将疱疹性口炎病毒壳G糖蛋白(VSV-G)用于构建新型假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)。方法 利用三质粒系统一过性转染293T/17细胞,通过磷酸钙共沉淀法产生VSV-G/MuLV;一过性转染后的病毒上清转导包装细胞系293/GPC以产生VSV-G/MuLV生产细胞系。G418筛选未成功转导的细胞,经筛选后的293/GPG细胞生产VSV-G/MuLV;用病毒上清转染NIH3T3细胞,并采用G418克隆筛选法测定病毒滴度。结果 感染后的NIH3T3细胞在G418的筛选培养下,有大量克隆形成。经计数和计算,VSV-G/MuLV病毒上清滴度为6×106。结论 成功构建了VSV-G/MuLV;该型病毒转染效率高,可直接转导大多数细胞,在有效监控条件下,VSV-G/MuLV作为载体可用于基因治疗。 展开更多

关键词 LV 转导 VSV 逆转录病毒载体 转染 细胞 一过性 克隆 筛选 质粒

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大鼠肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态观察 被引量：28

3

作者 张赛 陈如坤 +1 位作者 林敏 何雪明 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1597-1600,共4页

目的　研究大鼠肺缺血再灌注损伤 (IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法　采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注 0min、30min、1h、2h、6h及 12h采取肺组织及左房血标本 ,测定血氧分压、肺组织湿 /干重... 目的　研究大鼠肺缺血再灌注损伤 (IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法　采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注 0min、30min、1h、2h、6h及 12h采取肺组织及左房血标本 ,测定血氧分压、肺组织湿 /干重比 ,并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构 ,确定凋亡发生。TUNEL法测定肺组织中凋亡指数。台盼蓝活体染色评价细胞死亡程度 ,并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。结果　肺IR后 ,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多 ,并且不同程度出现形态学改变 ,细胞体积缩小变圆 ,细胞核呈多形性 ,核被膜外折或内陷 ,核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状 ,胞浆浓缩 ,胞浆内嗜锇性板层体减少、排空增多 ,细胞膜上微绒毛减少或消失 ,提示细胞凋亡发生 ,肺泡Ⅰ型上皮细胞则少有上述改变。单独缺血30min ,肺泡细胞凋亡指数无增高。肺再灌注后 0 5h起 ,肺泡细胞凋亡指数显著增高 ,再灌注 2h时达到高峰。与细胞凋亡指数相比 ,坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。结论　肺IR后发生凋亡的主要是肺泡Ⅱ型上皮细胞。肺泡细胞凋亡指数于再灌注 2h达到高峰。 展开更多

关键词 肺泡细胞 凋亡指数 肺组织 大鼠 肺缺血再灌注损伤 胞浆 肺功能损害 细胞体积 亚显微结构 核膜

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Cox迷宫Ⅲ型手术同期换瓣治疗风湿性二尖瓣病变伴房颤 被引量：20

4

作者 陈如坤 王永清 +1 位作者 陈勇兵 陈锁成 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期815-817,共3页

目的　观察换瓣同时作Cox迷宫Ⅲ型手术与单独换瓣相比较的疗效。方法　选择单独换瓣 +迷宫Ⅲ型手术病例 (迷宫组 )与这一期间另外所作的单独换瓣病例 (对照组 )各 5 6例 ,均系风湿性病变、心功能Ⅲ～Ⅳ级、慢性持续性心房纤颤 1年以上... 目的　观察换瓣同时作Cox迷宫Ⅲ型手术与单独换瓣相比较的疗效。方法　选择单独换瓣 +迷宫Ⅲ型手术病例 (迷宫组 )与这一期间另外所作的单独换瓣病例 (对照组 )各 5 6例 ,均系风湿性病变、心功能Ⅲ～Ⅳ级、慢性持续性心房纤颤 1年以上。术后均用华法林抗凝治疗。结果　主动脉阻断时间和心脏停搏时间迷宫组较对照组长 ,分别为 75min± 2 2min对 4 1min± 11min(P <0 0 5 )和12 4min± 4 0min对 6 8min± 19min(P <0 0 5 )。复跳后出血迷宫组 2例 ,对照组 1例 ,均止血有效。两组术后早期死亡率均为 1 8% (1/ 5 6 )。迷宫组术后窦性心律者占 98 2 % (5 4 / 5 5 ) ,在作最大体力活动时无窦性迟钝现象 ,均有心房收缩功能 ;术后 1年 ,心功能Ⅰ级者占 98 2 % (5 4 / 5 5 ) ,Ⅱ级 1 8% (1/5 5 ) ;无抗凝严重出血 ,亦无血栓栓塞并发症 ;晚期死亡率 1 8% (1/ 5 5 )。对照组中 7例在术后 2 4h内心房纤颤曾暂时消失 ,以后仍为慢性心房纤颤 ,而另有 1例心房纤颤长期消失已 2年 ;术后 1年 ,心功能Ⅰ级者占 94 6 % (5 2 / 5 5 ) ,Ⅱ级占 3 6 % (2 / 5 5 ) ,Ⅲ级占 1 8% (1/ 5 5 ) ;无抗凝严重出血 ,脑栓塞偏瘫 1例 ,占 1 8% (1/ 5 5 ) ;晚期死亡率 3 6 % (2 / 5 5 )。结论　换瓣同期行迷宫Ⅲ型手术安全有效 ,能消除? 展开更多

关键词 Cox迷宫Ⅲ型手术 治疗风湿性二尖瓣病变 房颤 二尖瓣替换术

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19例心脏穿透伤的诊治 被引量：20

5

作者 徐勇 王永清 +2 位作者 叶伟文 何正富 陈如坤 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期45-46,共2页

关键词 心脏穿透伤 诊断 治疗 生理指数 心脏穿透伤指数

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5例心脏直视术后并发胸骨裂开的护理 被引量：14

6

作者 鲍向英 吴伊琼 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2010年第2期112-114,共3页

总结了5例心脏直视术后并发胸骨裂开患者的护理经验。重点是密切观察病情,协助医生及早诊断和处理,维护心功能稳定,做好胸骨后冲洗护理,减少胸骨活动度,监测和控制血糖,同时加强营养支持和卧位与活动的指导,促进胸骨愈合。经积极治疗和... 总结了5例心脏直视术后并发胸骨裂开患者的护理经验。重点是密切观察病情,协助医生及早诊断和处理,维护心功能稳定,做好胸骨后冲洗护理,减少胸骨活动度,监测和控制血糖,同时加强营养支持和卧位与活动的指导,促进胸骨愈合。经积极治疗和护理,4例痊愈,1死亡。 展开更多

关键词 心脏外科手术 胸骨裂开 护理

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7例复杂型心脏直视术后延迟关胸患者的监护 被引量：12

7

作者 鲍向英 章云娣 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2008年第10期894-895,共2页

总结7例复杂型心脏直视术后因出现低心排综合征、创面严重渗血和心律失常等并发症致延迟关胸患者的监护。重点为密切监测血压、心率、中心静脉压及尿量变化,维护血液动力学稳定;加强呼吸道监护,避免胸腔内压力增高因素;加强心包和纵隔... 总结7例复杂型心脏直视术后因出现低心排综合征、创面严重渗血和心律失常等并发症致延迟关胸患者的监护。重点为密切监测血压、心率、中心静脉压及尿量变化,维护血液动力学稳定;加强呼吸道监护,避免胸腔内压力增高因素;加强心包和纵隔引流管观察;做好纵隔冲洗及手术切口护理,预防纵隔、胸骨感染和压疮发生。本组死亡2例,其中1例为顽固性室颤抢救成功后合并急性肺水肿、心衰而死亡,1例死于严重低心排,肾衰,其余5例患者病情稳定送手术室二期关胸,经积极治疗护理后康复出院。 展开更多

关键词 心脏外科手术 症状 护理方法 患者

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shRNA介导胰岛素样生长因子Ⅰ类受体基因沉默诱导人肺癌A549细胞凋亡的体内外研究 被引量：6

8

作者 董爱强 孔敏坚 +3 位作者 马志原 钱建芳 范军强 徐小红 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第21期1506-1509,共4页

目的评价 RNA 干扰(RNA interference,RNAi)技术对人肺癌 A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体(IGF-IR)表达的抑制作用及其体内外抑瘤效应。方法将 IGF-IR 特异 shRNA转染人肺癌 A549细胞株,检测 IGF-IR 表达水平和 bcl-2及 caspase-... 目的评价 RNA 干扰(RNA interference,RNAi)技术对人肺癌 A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体(IGF-IR)表达的抑制作用及其体内外抑瘤效应。方法将 IGF-IR 特异 shRNA转染人肺癌 A549细胞株,检测 IGF-IR 表达水平和 bcl-2及 caspase-3的表达变化;MTT 法检测体外培养细胞的生长抑制率;流式细胞技术检测细胞增殖周期;Western 印迹法分析 Akt 和 ERK 磷酸化程度;荷瘤裸鼠肺癌模型中观察瘤内注射的抑瘤效应及凋亡情况。结果 IGF-IR 表达抑制率达89.8%,bcl-2表达为对照组的46%±6%,caspase-3激活为对照组的156%±8%,Akt、ERK 磷酸化分别为对照组的20%和36%±3%;肿瘤细胞活力明显下降;直接瘤内注射后肿瘤体积减少至对照组的40%～50%,并促进肿瘤细胞凋亡。结论运用 RNAi 技术能有效抑制 A549细胞 IGF-IR 的表达,使细胞增殖能力减弱,凋亡增加,瘤体生长受抑。 展开更多

关键词 肺肿瘤 受体 IGF1型 RNA干扰

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胸腺瘤伴重症肌无力患者瘤组织中Bcl-2和Fas的表达水平 被引量：7

9

作者 沈钢 柴(王莹) +2 位作者 岳岚 魏红权 林敏 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期240-242,共3页

目的探讨凋亡相关基因 bcl-2、Fas 在胸腺瘤伴重症肌无力患者瘤组织中的表达状况及其临床意义。方法经手术治疗的25例胸腺瘤伴重症肌无力患者的肿瘤组织标本为病例组,25例先天性心脏病患者手术时切取的正常胸腺组织标本为对照组,通过免... 目的探讨凋亡相关基因 bcl-2、Fas 在胸腺瘤伴重症肌无力患者瘤组织中的表达状况及其临床意义。方法经手术治疗的25例胸腺瘤伴重症肌无力患者的肿瘤组织标本为病例组,25例先天性心脏病患者手术时切取的正常胸腺组织标本为对照组,通过免疫组化的方法检测两组标本中 Bcl-2和 Fas 蛋白的表达水平。结果胸腺瘤中 Bcl-2及 Fas 表达水平均显著高于对照组,经 Ridit分析两者差异均有统计学意义(U 值分别为2.645、3.200,P 均<0.05),但 Bcl-2和 Fas 的表达水平与胸腺瘤患者的重症肌无力 Ossermen 分型、术前病程、年龄及性别等临床因素均无显著相关。结论Bcl-2和 Fas 在胸腺瘤伴重症肌无力的发病中可能具有重要作用。 展开更多

关键词 胸腺瘤 重症肌无力 基因 BCL-2 抗原 CD95 凋亡

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RNA干扰沉默IGF-Ⅰ R表达对非小细胞肺癌细胞生物学特性及化疗敏感性的影响 被引量：5

10

作者 孔敏坚 董爱强 +3 位作者 马志原 程海峰 钱建芳 范军强 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第4期373-380,共8页

目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子类受体(IGF-Ⅰ R)表达的阻断效应,和IGF-Ⅰ R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变。方法:应用U6启动子,介导DNA... 目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子类受体(IGF-Ⅰ R)表达的阻断效应,和IGF-Ⅰ R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变。方法:应用U6启动子,介导DNA模板转录生成短发夹样RNA(shRNA),并转染人肺癌A549细胞株,从而产生IGF-Ⅰ R特异性小干扰RNA(siRNA),经RT-PCR和Western blot检测IGF-Ⅰ R表达的改变;联合应用化疗药物顺铂(DDP),通过MTT法和流式细胞技术等,观察细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及DDP半数致死量(IC50)的变化。结果:IGF-Ⅰ R表达水平明显下降(抑制率高达89.8%),肿瘤细胞增殖能力明显减弱,细胞滞留于G0期的比例上升;DDP对肿瘤细胞24h、48h、72h的IC50均明显减少,IGF-Ⅰ R siRNA1组DDP作用72h的IC50为0.92 mg/L,明显低于control-siRNA组的3.77mg/L,0.5mg/L DDP联合IGF-Ⅰ R siRNA1作用48h后,A549细胞的生长抑制率达32.1%,明显高于control-siRNA组的18.9%,细胞凋亡率从27.8%上升至44.2%。结论:运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-Ⅰ R的表达,使细胞增殖能力减弱,化疗敏感性增加。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺/病理学 胰岛素样生长因子Ⅰ类受体 RNA干扰 化疗敏感性 凋亡

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15例老年心脏黏液瘤患者的围术期监护 被引量：7

11

作者 鲍向英 章云娣 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2008年第2期130-132,共3页

报告了15例老年心脏黏液瘤患者的围术期监护。重点为术前加强心、肺功能监测,动态监测血压、血糖变化,积极改善全身情况,做好限期手术准备;术后加强心律失常、低心排综合征、栓塞等并发症监护,做好呼吸道护理和体温监测。本组术后出现... 报告了15例老年心脏黏液瘤患者的围术期监护。重点为术前加强心、肺功能监测,动态监测血压、血糖变化,积极改善全身情况,做好限期手术准备;术后加强心律失常、低心排综合征、栓塞等并发症监护,做好呼吸道护理和体温监测。本组术后出现低心排综合征2例,经积极对症治疗和采取相应的护理措施,1例病情好转,1例死亡;其余患者未出现严重并发症,顺利康复老年心脏黏液瘤手术风险大,围术期死亡率高,积极有效的围术期监护是提高手术成功率、减少术后并发症的重要保证。 展开更多

关键词 老年人 心脏 黏液瘤 围手术期护理

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非小细胞肺癌同时伴脑转移的外科处理 被引量：5

12

作者 董爱强 吴春雷 +2 位作者 陈如坤 马志原 祝向东 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期712-713,共2页

关键词 非小细胞肺癌(NSCLC) 外科处理 脑转移 非手术治疗 姑息性放疗 以手术为主 回顾性分析 远处转移 自然病程 生存时间

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风湿性二尖瓣病变伴房颤的外科治疗 被引量：2

13

作者 陈如坤 陈勇兵 +1 位作者 王永清 陈锁成 《中华胸心血管外科杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期264-266,共3页

目的　回顾性分析二尖瓣置换术 (MVR)同期Cox迷宫III型手术治疗风湿性二尖瓣病变伴房颤 (Af)的效果。方法　 1994年 3月至 1999年 2月间采用上述方法治疗病人 5 4例。其中男 30例 ,女2 4例 ;年龄 (45 32± 6 37)岁。风湿病史 15... 目的　回顾性分析二尖瓣置换术 (MVR)同期Cox迷宫III型手术治疗风湿性二尖瓣病变伴房颤 (Af)的效果。方法　 1994年 3月至 1999年 2月间采用上述方法治疗病人 5 4例。其中男 30例 ,女2 4例 ;年龄 (45 32± 6 37)岁。风湿病史 15年以上 ,房颤病史 2～ 7年。术前心功能III～IV级。均行MVR +Cox迷宫III型手术 ,三尖瓣中度以上关闭不全者附加三尖瓣成形术 (TVP) 34例 ,清除左房血栓 4例。结果　本组无手术死亡 ,主动脉阻断和体外循环时间分别为 (75± 2 0 )min和 (12 4± 36 )min。复跳后出血 2例 ,止血治疗均有效。随访 2 4～ 5 0个月 ,术后Af均消失。有 1例为结性心律 ;窦性心律者占98 11% (5 2 / 5 3例 ) ,最大体力活动时均无窦性迟钝现象 ,无需安装起搏器 ,均有心房收缩功能 ;术后 1年心功能Ⅰ级者占 98 11% (5 2 / 5 3例 ) ,II级 1 88% (1/ 5 3例 ) ;无抗凝严重出血 ,亦无血栓栓塞并发症。术后早期死亡 1例 (1 85 % ) ,术后 1周死于多脏器功能衰竭。术后第 3年晚期死亡 1例 (1 88% )。结论　MVR同期行迷宫III型手术治疗风湿性二尖瓣病变伴房颤安全有效 ,能消除Af,恢复心房收缩功能 ,可避免术后血栓栓塞并发症 ,远期疗效确切。 展开更多

关键词 心房颤动 人工瓣膜假体植入 心血管外科手术方法 二尖瓣置换术 风湿性二类瓣病变

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组织型纤溶酶原激活剂治疗心血管血栓相关性疾病的研究近况 被引量：2

14

作者 陈勇兵 蔡巍巍 陈如坤 《国外医学（心血管疾病分册）》 2004年第1期16-18,共3页

组织型纤溶酶原激活剂(tPA)能够特异性地激活纤溶酶原,不易引起系统性纤溶状态,是一种理想的溶栓药物。现将有关tPA的作用机理及其在治疗心血管血栓相关性疾病中的研究近况作一综述。

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 治疗 心血管血栓 相关性疾病 心血管疾病

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实施适合国情的抗凝治疗 被引量：2

15

作者 陈如坤 陈鹏 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第16期1381-1382,共2页

关键词 抗凝治疗 人造心脏瓣膜 机械瓣置换术 临床分析

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56例左房粘液瘤的外科治疗 被引量：1

16

作者 陈勇兵 陈如坤 +2 位作者 钱永跃 杨文涛 施立 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期927-928,共2页

关键词 左房粘液瘤 外科治疗 外科手术治疗 分析

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心房颤动非药物治疗的若干问题 被引量：2

17

作者 陈如坤 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期363-365,共3页

关键词 心房颤动 非药物治疗 患者 心律失常 病残率 常见 二尖瓣病变 群发 心跳

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重症肌无力患者胸腺组织中Bcl-2和Fas表达水平的研究 被引量：1

18

作者 沈钢 柴 岳岚 《浙江医学》 CAS 2005年第6期415-416,421,共3页

目的探讨凋亡相关基因Bcl-2、Fas(又称Apo-1抗原,CD95)在重症肌无力患者胸腺组织中的表达及其临床意义。方法通过免疫组化法,检测经手术治疗的56例重症肌无力患者的胸腺组织(31例胸腺增生、25例胸腺瘤)中Bcl-2、Fas的表达水平,并以25例... 目的探讨凋亡相关基因Bcl-2、Fas(又称Apo-1抗原,CD95)在重症肌无力患者胸腺组织中的表达及其临床意义。方法通过免疫组化法,检测经手术治疗的56例重症肌无力患者的胸腺组织(31例胸腺增生、25例胸腺瘤)中Bcl-2、Fas的表达水平,并以25例正常胸腺组织(取自先天性心脏病手术中因显露视野需要而切除的胸腺组织)作为对照组。结果Bcl-2在胸腺瘤、胸腺增生组织中的表达均高于对照组,差别有显著性意义(均P<0.01),胸腺瘤和胸腺增生两组之间的Bcl-2表达水平差别无显著性意义(P>0.05);Fas在胸腺瘤中的表达上升,明显高于胸腺增生组和对照组(均P<0.01),胸腺增生组与对照组Fas表达水平差别无显著性意义(P>0.05)。结论Bcl-2的高水平表达导致胸腺免疫异常,在重症肌无力的发生中起重要作用,而Fas在胸腺瘤的发生中起重要的作用。 展开更多

关键词 重症肌无力 胸腺组织 BCL-2 FAS表达 细胞调亡 CD95 免疫组化

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迷宫术治疗心房颤动的发展

19

作者 陈勇兵 施立 陈如坤 《国外医学（心血管疾病分册）》 2005年第4期199-201,共3页

心房颤动是常见的心律失常,其药物治疗的复杂和长期治疗效果的不确切性,重新激起人们改进房颤治疗方法的兴趣.基于Cox等具有开创性的工作,最新的系列研究表明在合并其他器质性心脏疾病行心脏手术的患者同时行局限、左房消融微创迷宫术... 心房颤动是常见的心律失常,其药物治疗的复杂和长期治疗效果的不确切性,重新激起人们改进房颤治疗方法的兴趣.基于Cox等具有开创性的工作,最新的系列研究表明在合并其他器质性心脏疾病行心脏手术的患者同时行局限、左房消融微创迷宫术治疗房颤的可行性.本文综述了迷宫术治疗房颤的演变和进展. 展开更多

关键词 迷宫术 心房颤动 外科治疗

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人造心脏瓣膜功能障碍研究进展 被引量：1

20

作者 Lokesh Gurung 陈如坤 《浙江医学》 CAS 2005年第2期159-160,F003,共3页

关键词 人造心脏瓣膜 功能障碍 并发症 膜功能 机械瓣 常见原因 研究进展 诊断和治疗 生物瓣 种类

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