鸭传染性产蛋减少症(暂定名)的病原分离初报 被引量：29

1

作者 廖敏 牟小东 +6 位作者 耿阳 边葶苈 陆新浩 陈秋英 任祖伊 丁铲 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第1期22-26,共5页

本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起... 本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起的病毒粒子。病毒对酸敏感、能耐受pH9的碱性环境,50℃1 h可使病毒失去感染能力。SPF鸡人工感染试验结果显示,感染鸡生长缓慢、致死亡率低、能回收病毒。说明引起鸭产蛋量下降的疫病病原是病毒性的,并导致鸡感染发病,我们将此病暂称为鸭传染性产蛋减少症。 展开更多

关键词 蛋鸭 产蛋下降 病毒分离鉴定

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鸡球虫疫苗及其佐剂研究进展 被引量：8

2

作者 杜爱芳 徐慧 +1 位作者 张德福 禹海杰 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期58-64,共7页

鸡球虫病是养禽业中最重要的疾病之一,每年造成数十亿美元的重大经济损失.当前,药物防治是控制鸡球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之.鸡球虫疫苗和相关佐剂已经成为当前研究... 鸡球虫病是养禽业中最重要的疾病之一,每年造成数十亿美元的重大经济损失.当前,药物防治是控制鸡球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之.鸡球虫疫苗和相关佐剂已经成为当前研究的热点.本文就鸡球虫病免疫防治的最新进展,从转基因疫苗、核酸与亚单位疫苗、常规疫苗、免疫佐剂4方面研究展开论述. 展开更多

关键词 鸡球虫病 疫苗 佐剂

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简单异尖线虫PCR检测方法的建立 被引量：8

3

作者 曹庭盛 李孝军 +1 位作者 蔡渭明 杜爱芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期279-282,共4页

根据GenBank上公布的简单异尖线虫核糖体DNA的内转录区(ITS-1、5.8S、ITS-2)序列设计特异性引物,对线虫样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为430bp,与预期扩增序列同源性为99%。该PCR检测体... 根据GenBank上公布的简单异尖线虫核糖体DNA的内转录区(ITS-1、5.8S、ITS-2)序列设计特异性引物,对线虫样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为430bp,与预期扩增序列同源性为99%。该PCR检测体系的特异性强,不能在宫脂线虫、伪地新线虫DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.4pg。该检测体系的建立为简单异尖线虫的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。 展开更多

关键词 简单异尖线虫 内转录区 PCR

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我国部分地区1996～2008年传染性支气管炎病毒分离株膜蛋白基因的遗传变异与系统进化分析 被引量：4

4

作者 时莉 肖朝庭 +3 位作者 宋翥远 张秀美 阿合买提.买买提 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期31-37,共7页

1996-2008年从我国不同地区分离30株传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Viruses，IBV）野毒株的M基因，采用RT-PCR方法克隆测定所分离的野毒株和澳大利亚T株的M基因序列，利用生物信息学软件与GenBank中公布的部分国内外IBV毒... 1996-2008年从我国不同地区分离30株传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Viruses，IBV）野毒株的M基因，采用RT-PCR方法克隆测定所分离的野毒株和澳大利亚T株的M基因序列，利用生物信息学软件与GenBank中公布的部分国内外IBV毒株的M基因序列进行比较分析，研究我国IBV的分子流行学特点和分子遗传变异规律。结果发现所测毒株M基因具有4种不同长度的开放阅读框：669bp、672bp、678bp和681bp，分别编码222、223、225和226个氨基酸的多肽，这些长度的差异是由5′端的核苷酸插入或缺失造成的。30个IBV分离株间的同源性在89．5％～100％之间。以疫苗株H120氨基酸位置为参照，在被比较的73株IBVM蛋白中发现62个位点存在变异，其中以2～5、10～16、44～46、217～222等4个区域氨基酸取代率较高。系统进化分析显示，被比较的73个IBV毒株分为5个进化群，我国的IBV分属于其中的4个群，其中第一群和第四群与我国所使用的疫苗病毒株相距较远。同时发现部分近年的分离株与10多年前分离株具有很近遗传进化关系。从M基因看，在我国出现了多种基因型IBV共存的现象，分离株与疫苗株的遗传差异提示我们需要对疫苗的选用做出重新评估。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 膜蛋白基因 分子流行病学 遗传变异

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香菇多糖对鸡球虫3-1E重组蛋白的免疫增强作用 被引量：5

5

作者 施伟领 徐慧 +1 位作者 叶秀娟 杜爱芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1444-1449,共6页

将150只海蓝雏鸡分为5组,每组30只,3日龄首免,2周后加强免疫1次,二免后2周用鸡柔嫩艾美尔球虫攻击。通过测定免疫后鸡只的淋巴细胞转化水平,抗体水平I、L-1诱生活性,比较分析不同剂量的香菇多糖对3-1E重组蛋白免疫原性的增强作用;通过... 将150只海蓝雏鸡分为5组,每组30只,3日龄首免,2周后加强免疫1次,二免后2周用鸡柔嫩艾美尔球虫攻击。通过测定免疫后鸡只的淋巴细胞转化水平,抗体水平I、L-1诱生活性,比较分析不同剂量的香菇多糖对3-1E重组蛋白免疫原性的增强作用;通过测定攻虫后鸡只存活率、相对增重率、卵囊值和抗球虫指数的变化,分析香菇多糖对3-1E重组融合蛋白免疫保护效果的影响。结果表明,香菇多糖能够显著增强淋巴细胞转化水平(P<0.05)和血清抗体水平(P<0.05),但不能明显提高IL-1的诱生活性(P>0.05);而且能够显著增强3-1E重组蛋白的免疫保护效果。表明香菇多糖对3-1E重组蛋白具有较好的免疫增强作用。 展开更多

关键词 香菇多糖 佐剂 鸡球虫 免疫

原文传递

狂犬病病毒核蛋白在Bac-To-Bac/AcMNPV杆状病毒系统的表达 被引量：6

6

作者 尹伟 徐洁萍 +2 位作者 张金阳 颜焰 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期86-89,115,共5页

为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重... 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 核蛋白基因 Bac—To—Bac/AcMNPV杆状病毒表达系统.

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乳酸恩诺沙星对实验性鸡大肠杆菌病及沙门氏菌病的药效 被引量：6

7

作者 唐一鸣 姜中其 +1 位作者 方兰勇 陈俭 《浙江农业科学》 2010年第5期1110-1113,共4页

对乳酸恩诺沙星可溶性粉开展鸡实验性大肠杆菌病及沙门氏菌病的药效研究,为临床合理应用乳酸恩诺沙星提供依据。结果表明,乳酸恩诺沙星及盐酸环丙沙星对鸡大肠杆菌C84051的MIC均为0.062 5μg·mL-1;对鸡沙门氏菌C79-13的MIC分别为0.... 对乳酸恩诺沙星可溶性粉开展鸡实验性大肠杆菌病及沙门氏菌病的药效研究,为临床合理应用乳酸恩诺沙星提供依据。结果表明,乳酸恩诺沙星及盐酸环丙沙星对鸡大肠杆菌C84051的MIC均为0.062 5μg·mL-1;对鸡沙门氏菌C79-13的MIC分别为0.125和6.4μg·mL-1。对雏鸡进行攻毒,按75、125及175mg·L-1的乳酸恩诺沙星及100 mg·L-1的盐酸环丙沙星混饮给药,连续用药3 d,对鸡大肠杆菌病的保护率分别为100%、100%、100%及90%,而攻毒不给药组雏鸡死亡率为100%;乳酸恩诺沙星各剂量组及盐酸环丙沙星药物对照组对鸡沙门氏菌病的保护率均为100%,而攻毒不给药组雏鸡的死亡率为100%。研究提示,乳酸恩诺沙星可溶性粉能有效控制鸡大肠杆菌和沙门氏菌感染,降低感染鸡群的死亡率。 展开更多

关键词 乳酸恩诺沙星 药敏 药效 大肠杆菌病 沙门氏菌病 雏鸡

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规模猪场猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫程序检测 被引量：4

8

作者 周志平 朱晓路 +1 位作者 范坤晓 周继勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期36-38,共3页

关键词 合成肽疫苗 猪口蹄疫 疫苗免疫 规模猪场 程序检测 O型 世界动物卫生组织 口蹄疫病毒

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传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析 被引量：1

9

作者 肖朝庭 时莉 +3 位作者 宋翥远 刘然 阿合买提.买买提 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期17-23,共7页

采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组... 采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组全长为27630bp（不包括polyA），A＋T含量为61．8％，它与我国IBV分离株全基因组同源性在83．9％～95．2％之间，其中与KQ6的同源性最高（95．2％），与其余株均在88％以下。在基因组内基因的同源性中，以S1、S2与E变异最大，除KQ6外，其余各株（含台湾株）与H52在S1蛋白上的同源性只有72．4％～80．7％，在S2蛋白上的同源性为85．5％～88．1％，E蛋白为82．9％～93．3％。系统进化分析表明，国内分离株，除KQ6外，在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异，这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗（如H120，H52）不能有效地免疫保护我国的鸡群。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 疫苗株H52 克隆

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捻转血矛线虫病的疫苗防治研究 被引量：3

10

作者 杜爱芳 周前进 +1 位作者 张红丽 姜小磊 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期187-194,共8页

疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形... 疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形式不能为动物提供有效的免疫保护;免疫策略难以制定、佐剂难以选择也成为疫苗研制中的桎梏.因此,开发与天然提取物具有相似功能的转基因蛋白成为目前疫苗研究中的焦点,秀丽隐杆线虫表达系统和寄生性线虫细胞系的培育是研究中比较有潜力的两个方向;同时,RNAi技术等新方法的运用也加快了新的疫苗候选抗原的鉴定进程. 展开更多

关键词 捻转血矛线虫 肠道抗原 重组抗原 秀丽隐杆线虫 细胞系

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快速检测牛巴贝斯焦虫LAMP方法的建立 被引量：4

11

作者 李群 王素华 +2 位作者 周前进 蔡渭明 杜爱芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期781-784,共4页

为提高牛巴贝斯焦虫(Babesia bovis)病检出率,本研究采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种快速、灵敏、特异的检测B.bovis的方法。根据GenBank中登录的B.bovis细胞色素b基因(cyt b)序列,设计4条LAMP引物,优化反应体系条件,在Bst DNA聚... 为提高牛巴贝斯焦虫(Babesia bovis)病检出率,本研究采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种快速、灵敏、特异的检测B.bovis的方法。根据GenBank中登录的B.bovis细胞色素b基因(cyt b)序列,设计4条LAMP引物,优化反应体系条件,在Bst DNA聚合酶的作用下,62℃反应60min,加入EvaGreen后,肉眼观测。结果表明,该LAMP检测体系特异性强,与双芽巴贝斯焦虫(B.bigemina)DNA等不发生交叉反应;敏感性高,最小检测值为0.014fg(相当于1.58×10-3虫体的拷贝数),为一般PCR方法的1000倍。该方法具有简单、快速、低成本的特点,可用于B.bovis病的现场快速检测。 展开更多

关键词 牛巴贝斯焦虫 环介导等温扩增技术

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抗弓形虫MIC3单抗的制备及其在速殖子免疫荧光观察中的应用 被引量：4

12

作者 刘钊 禹海杰 +2 位作者 卓洵辉 周前进 杜爱芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1030-1033,共4页

为开展弓形虫速殖子阶段蛋白表达和定位的相关研究,利用弓形虫重组微线体蛋白3(MIC3)抗原研制单克隆抗体,筛选出适合在虫体内用免疫荧光观察该蛋白的单抗分泌株,建立了弓形虫间接免疫荧光观察方法。结果显示,经4轮亚克隆后得到3株稳定... 为开展弓形虫速殖子阶段蛋白表达和定位的相关研究,利用弓形虫重组微线体蛋白3(MIC3)抗原研制单克隆抗体,筛选出适合在虫体内用免疫荧光观察该蛋白的单抗分泌株,建立了弓形虫间接免疫荧光观察方法。结果显示,经4轮亚克隆后得到3株稳定分泌抗MIC3单抗的分泌株:4G1、1G12和5D7;经测定,3株MIC3单抗4G1、1G12和5D7的亚型分别为IgG1、IgG2b、IgG2b,效价分别为1∶3 200、1∶12 800、1∶1 600。筛选得到的2株MIC3单抗(4G1和1G12)可用于间接免疫荧光检测MIC3蛋白在虫体中的分布。通过弓形虫阳性感染猪血液样品推片的免疫荧光试验,验证了这3株单抗具有特异性。结果表明,研制的MIC3单抗和虫体荧光观察体系可用于速殖子MIC3蛋白在虫体表达定位和其他研究,也可作为其他速殖子抗原荧光观察的比较对象。 展开更多

关键词 弓形虫 微线体蛋白3 单克隆抗体 免疫荧光观察 蛋白表达定位

原文传递

家蚕钙网蛋白的基因结构与初步表达谱研究 被引量：1

13

作者 董久鸣 徐和平 +1 位作者 何达 徐豫松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期619-626,共8页

钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网/肌浆网主要的Ca2+结合蛋白,在细胞功能的调节方面发挥重要作用。利用双向电泳技术及质谱技术研究家蚕脂肪体蛋白组的变化,通过分析检索蛋白质组数据,获得了钙结合蛋白的氨基酸序列。通过电子克隆、c... 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网/肌浆网主要的Ca2+结合蛋白,在细胞功能的调节方面发挥重要作用。利用双向电泳技术及质谱技术研究家蚕脂肪体蛋白组的变化,通过分析检索蛋白质组数据,获得了钙结合蛋白的氨基酸序列。通过电子克隆、cDNA3′末端快速扩增(3′rapid amplification of cDNA ends,3′RACE)方法克隆了家蚕钙网蛋白基因cDNA全长序列,命名为BmCRT(GenBank登录号:FJ360528)。BmCRT基因cDNA全长1 705 bp,开放阅读框序列(ORF)长1 197 bp,编码398个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BmCRT与其它物种的CRT都具有保守的N-结构域、脯氨酸富集结构域和C-端结构域。BmCRT基因组结构分析表明:该基因由7个外显子和6个内含子组成。分析BmCRTmRNA在不同发育时期的表达变化显示,该基因在家蚕幼虫眠期的mRNA表达量比食桑期高,而在4龄和5龄食桑期mRNA表达量没有随着生长变化而变化。 展开更多

关键词 钙网蛋白 蛋白质组 基因结构 家蚕

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捻转血矛线虫H11部分功能域基因的原核表达与分析 被引量：3

14

作者 张红丽 姜小磊 +1 位作者 周前进 杜爱芳 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期591-596,共6页

生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登... 生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的H11基因序列设计引物，扩增H11开放阅读框670～1710bp的部分基因序列，命名为HPS（H1jpartial sequence）．基因片段与表达载体pET-28b分别以NdeI、XhoI酶切后构建重组表达载体pET28bHPS，并将其转入大肠杆菌BL21中，提取质粒经PCR和酶切鉴定获得阳性质粒并对其进行测序．结果表明，扩增得到的目的基因片段为1041bp，与已发表的ZJ株和国外株参考序列比较，核苷酸同源性分别为100％和98．8％将重组表达载体用IPTG诱导表达，表达产物利用SDS-PAGE和Western-blotting检测表明，HPS基因在大肠杆菌中成功表达，融合蛋白的分子量约为37．34kDa，诱导6h的蛋白表达量可达到58．9％． 展开更多

关键词 捻转血矛线虫 H11 表达

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减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达弓形虫SAG1基因 被引量：3

15

作者 曲道峰 王素华 +1 位作者 蔡渭明 杜爱芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期188-192,共5页

将PCR扩增获得的弓形虫SAG1基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建成pcDNA3-SAG1真核表达质粒,高压电转化入dam和phoP基因双突变的减毒沙门氏菌(ZJ111株)中,并直接转染Vero细胞,胰酶消化、收集细胞,SDS-PAGE和western blot可检测到30ku... 将PCR扩增获得的弓形虫SAG1基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建成pcDNA3-SAG1真核表达质粒,高压电转化入dam和phoP基因双突变的减毒沙门氏菌(ZJ111株)中,并直接转染Vero细胞,胰酶消化、收集细胞,SDS-PAGE和western blot可检测到30ku左右的蛋白条带和印迹带。结果表明减毒沙门氏菌能将外源基因呈递给Vero细胞并进行表达。 展开更多

关键词 SAG1基因 PCDNA3.1 真核表达 VERO细胞

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乳酸恩诺沙星对小鼠的急性毒性试验 被引量：3

16

作者 唐一鸣 姜中其 陈俭 《中国兽药杂志》 2010年第4期29-30,60,共3页

研究了乳酸恩诺沙星对小鼠的急性毒性,用寇氏法计算实验小鼠的半数致死量(LD50)和95%置信限。结果表明,乳酸恩诺沙星对小白鼠灌胃染毒及腹腔注射染毒的LD50分别为3579mg/kg和571.3mg/kg,其95%可信限分别为3011～4255mg/kg和498.3～655.1... 研究了乳酸恩诺沙星对小鼠的急性毒性,用寇氏法计算实验小鼠的半数致死量(LD50)和95%置信限。结果表明,乳酸恩诺沙星对小白鼠灌胃染毒及腹腔注射染毒的LD50分别为3579mg/kg和571.3mg/kg,其95%可信限分别为3011～4255mg/kg和498.3～655.1mg/kg。研究提示,乳酸恩诺沙星属低毒物质,其可溶性粉能用于开展药效试验。 展开更多

关键词 乳酸恩诺沙星 小鼠 急性毒性

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猪圆环病毒2型Rep蛋白在真核细胞中的表达与定位 被引量：1

17

作者 张鑫 尹伟 +3 位作者 金玉兰 何嘉玲 颜焰 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第1期1-6,共6页

为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero... 为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero细胞中表达。结论认为pEGFP-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞和Vero细胞后48h,PCV2的Rep蛋白主要定位在PK15细胞和Vero细胞的细胞核。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2 REP蛋白 细胞定位

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体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选 被引量：2

18

作者 陆新浩 刘友生 +5 位作者 白露 陈秋英 刘鸿 廖敏 周继勇 任祖伊 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第10期88-91,共4页

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒的作用,对5种常见的抗病毒药:金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林和阿昔洛韦进行体外抗鸭坦布苏病毒药物筛选试验。结果:利巴韦林药物浓度为0.156～0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病... 为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒的作用,对5种常见的抗病毒药:金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林和阿昔洛韦进行体外抗鸭坦布苏病毒药物筛选试验。结果:利巴韦林药物浓度为0.156～0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖。试验表明,利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 利巴韦林 抗病毒药物

原文传递

重组H5亚型流感病毒HA1抗原的制备及其特性分析

19

作者 颜焰 陈洪勋 +2 位作者 李玲燕 周继勇 简子健 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-5,共5页

为获得重组表达的H5亚型流感病毒血凝素(HA1)抗原,将PCR扩增的H5亚型流感病毒HA1基因克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pETHA1-H5。结果显示,转化pETHA1-H5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下以包涵体形式表达了HA1蛋白。... 为获得重组表达的H5亚型流感病毒血凝素(HA1)抗原,将PCR扩增的H5亚型流感病毒HA1基因克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pETHA1-H5。结果显示,转化pETHA1-H5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下以包涵体形式表达了HA1蛋白。HA1重组蛋白能与不同禽类(鸡、鸭和鹅)H5亚型流感病毒阳性血清发生特异性反应,同时以HA1重组蛋白为抗原制备的单克隆抗体具有与H5亚型完整病毒粒子抗原反应的能力,说明重组表达的HA1蛋白保留了自然条件下H5亚型流感病毒的抗原特征。将重组表达的HA1蛋白作为ELISA抗原检测禽血清中的H5亚型流感病毒抗体,以HI试验结果为参考,两者的符合率为96.6%,证明HA1重组蛋白作为ELISA检测抗原是可行的。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5亚型 HA1基因 原核表达 抗原性

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Act-1核心启动子转录的EGFP基因在秀丽隐杆线虫体内的表达

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作者 周前进 姜小磊 +1 位作者 张红丽 杜爱芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期336-340,共5页

克隆获得的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)Act-1基因的核心启动子,经BglⅡ和HindⅢ限制性内切酶消化后,与用相同酶消化的pEGFP-4.1载体连接(由pEGFP-N1去掉CMV启动子形成),构建重组表达载体Pact-EGFP。通过脂质体介导转染Vero细... 克隆获得的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)Act-1基因的核心启动子,经BglⅡ和HindⅢ限制性内切酶消化后,与用相同酶消化的pEGFP-4.1载体连接(由pEGFP-N1去掉CMV启动子形成),构建重组表达载体Pact-EGFP。通过脂质体介导转染Vero细胞,结果发现EGFP在Vero细胞中有表达,但表达量很低。通过显微注射将Pact-EGFP与pRF4共注射到C.elegans性腺,结果发现EGFP能够在C.elegans的皮层、副皮层以及咽部表达,根据表达部位不同,获得了2种转基因线虫株。研究结果显示:EGFP在C.elegans体内的表达水平明显高于在Vero细胞内的表达,表明C.elegansAct-1基因的核心启动子区域可能存在与转录水平密切相关的独特的转录调节元件。该研究为进一步实现寄生性线虫基因在C.elegans表达提供了参考。 展开更多

关键词 Act—1核心启动子 EGFP 秀丽隐杆线虫 显微注射 转染

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