目的 DBO(6,8-dichloro-2,3-dihydro-3-hydroxymethyl-1,4-benzoxazine)作为雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂,可诱导人脐静脉内皮细胞发生自噬,促进其凋亡,但是DBO对白血病细胞是否亦具有同样的作用却不明确...目的 DBO(6,8-dichloro-2,3-dihydro-3-hydroxymethyl-1,4-benzoxazine)作为雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制剂,可诱导人脐静脉内皮细胞发生自噬,促进其凋亡,但是DBO对白血病细胞是否亦具有同样的作用却不明确。本研究旨在探讨DBO对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖、自噬与凋亡的影响。方法常规方法复苏、传代培养K562细胞,设置对照组(DMSO)、DBO处理组。处理24、48和72h后收集细胞,采用蛋白质印迹法检测LC3蛋白的表达。细胞免疫荧光实验检测LC3斑点的表达;透射电镜观察细胞自噬现象。CCK-8比色法检测K562细胞的活性和增殖能力。细胞周期实验检测K562细胞分裂能力。AnnexinⅤFITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果蛋白质印迹结果显示,K562细胞经雷帕霉素处理后LC3-Ⅱ蛋白水平表达升高,p62蛋白水平表达降低;经50μmol/L DBO处理24、48和72h后,LC3-Ⅱ和p62蛋白水平表达与雷帕霉素处理后结果相似,并呈时间依赖性。K562细胞经10、25和50μmol/L处理后,LC3-Ⅱ蛋白水平表达升高,p62蛋白水平表达降低,呈剂量依赖性,而使用自噬抑制剂3-MA后LC3-Ⅱ蛋白表达降低,P62蛋白表达升高。细胞免疫荧光实验显示,DBO作用72h后,与对照组相比,DBO处理组LC3斑点的表达量增加。透射电镜观察结果显示,与对照组相比,DBO处理组细胞胞质内可见较多自噬小体和自噬溶酶体,细胞核不规则,染色质边缘化。CCK8检测结果显示,DBO对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性。DBO经10、25、50和100μmol/L处理24h的细胞增殖抑制率分别为(0.68±0.05)%、(2.76±0.35)%、(12.64±3.90)%和(22.58±2.41)%,F=67.389,P<0.001,处理组与对照组之间差异有统计学意义;48h的增殖抑制率分别为(3.83±1.06)%、(6.23±1.27)%、(15.90±1.10)%和(24.50±2.51)%,F=145.738,P<0.001,处理组与对照组之间差异有统计学意义;72h的增殖抑制率分别为(8.78�展开更多
