室内人工培育中华蜜蜂幼虫技术研究 被引量：20

1

作者 王倩 孙亮先 +3 位作者 肖培新 刘锋 康明江 胥保华 《山东农业科学》 2009年第11期113-116,共4页

以中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)幼虫为试验材料,研究了不同饲粮配方、饲养模式和培养板对中蜂幼虫发育的影响。得出以下结果:幼虫饲粮LD1和LD3对幼虫的饲喂效果显著优于LD2;比较不同移虫模式下幼虫发育成功率:日转移法为61.1%... 以中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)幼虫为试验材料,研究了不同饲粮配方、饲养模式和培养板对中蜂幼虫发育的影响。得出以下结果:幼虫饲粮LD1和LD3对幼虫的饲喂效果显著优于LD2;比较不同移虫模式下幼虫发育成功率:日转移法为61.1%,不转移法为70.8%;其中,在不转移饲喂模式下,使用新培养板培养的发育成功率(69.8%)显著高于重复利用的培养板培养的发育成功率(39.6%)(P<0.01)。表明室内以LD1或LD3饲喂,采用"不转移法"模式,并使用新培养板,更利于中蜂幼虫的发育。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 幼虫 人工培育

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中华蜜蜂精子介导egfp基因转移 被引量：13

2

作者 郭冬生 孙亮先 +1 位作者 曾志将 张巧利 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期878-882,共5页

中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫，也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴，然后通过人工授精技术将精子导入处女王... 中华蜜蜂Apis cerana cerana是一种真社会性昆虫，也是我国重要的经济昆虫。本实验目的是为了检测精子是否可以作为载体将外源egfp基因介导转入中华蜜蜂。首先将雄蜂精子与线性化的质粒DNA共浴，然后通过人工授精技术将精子导入处女王，再对实验蜂群后代进行分析。结果显示EGFP蛋白在一群实验组蜂的1～2日龄小幼虫中表达较强，能检测到0．01％～0．02％荧光阳性小幼虫个体；通过PCR和RT—PCR技术分析，证实转入的外源egfp基因获得表达。实验结果表明精子载体法能够用于中华蜜蜂外源基因的转移和表达。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 精子 基因转移 EGFP基因 精子载体法 人工授精

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一种高质量蜜蜂核酸的快速提取方法 被引量：9

3

作者 郭冬生 孙亮先 +1 位作者 张巧利 曾志将 《泉州师范学院学报》 2005年第4期85-88,共4页

基因组DNA的提取是蜜蜂分子生物学研究的一项基本而重要的技术.但由于蜜蜂样品具有脂肪、蛋白、几丁质含量很高的特点,所以用常规方法无法获得较高质量的DNA.文章研究对蜜蜂基因组DNA的提取方法作了重要改进,可以从不同发育时期的蜜蜂... 基因组DNA的提取是蜜蜂分子生物学研究的一项基本而重要的技术.但由于蜜蜂样品具有脂肪、蛋白、几丁质含量很高的特点,所以用常规方法无法获得较高质量的DNA.文章研究对蜜蜂基因组DNA的提取方法作了重要改进,可以从不同发育时期的蜜蜂中快速、大量提取高质量的蜜蜂基因组DNA.此外,对蜜蜂总RNA的提取方法也进行了探索. 展开更多

关键词 蜜蜂 总RNA 基因组DNA 提取

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蜂王浆对三种革兰氏阴性菌的抑菌特性 被引量：8

4

作者 李利君 孙亮先 +2 位作者 彭莺 杨远帆 倪辉 《泉州师范学院学报》 2008年第2期96-99,共4页

利用抑菌圈试验法研究蜂王浆对大肠杆菌、假单胞菌和沙门氏菌等3种革兰氏阴性菌的抑菌特性.实验结果表明:蜂王浆对3种供试菌株都具有抑制作用.其抑菌活性随蜂王浆浓度的增加而增加;蜂王浆对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用主要由其低pH值... 利用抑菌圈试验法研究蜂王浆对大肠杆菌、假单胞菌和沙门氏菌等3种革兰氏阴性菌的抑菌特性.实验结果表明:蜂王浆对3种供试菌株都具有抑制作用.其抑菌活性随蜂王浆浓度的增加而增加;蜂王浆对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用主要由其低pH值引起,而对假单胞菌的抑制作用除了低pH的原因外,还有其他的抑菌因素.蜂王浆的抑菌活性随贮存温度和贮存时间的变化而变化,贮存温度越高、时间越长,抑菌活性越弱;但在-20℃贮存15 d,蜂王浆对3种试验菌的抑制作用不会发生明显的改变;而在25℃贮藏5 d后其抑菌活性显著降低.另外,蜂王浆的抗菌成分主要是醚溶物和水溶物,而醚水不溶物不具有抑菌活性. 展开更多

关键词 蜂王浆 革兰氏阴性菌 抑菌作用

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四个意大利蜜蜂品系RAPD遗传标记的分析 被引量：4

5

作者 孙亮先 胥保华 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第3期335-338,共4页

前期研究中筛选到可在平湖浆蜂 (Ep)、美意 (Em)、澳意 (Eo)和苏意 (Es)中扩增出多态性条带的RAPD -PCR随机引物W18(5’ -CGGACGGCGG - 3’)和W2 3(5’ -GTACCGCCCG - 3’)。本文以群体遗传学方法对这 4个意蜂品系的RAPD多态性扩增条带... 前期研究中筛选到可在平湖浆蜂 (Ep)、美意 (Em)、澳意 (Eo)和苏意 (Es)中扩增出多态性条带的RAPD -PCR随机引物W18(5’ -CGGACGGCGG - 3’)和W2 3(5’ -GTACCGCCCG - 3’)。本文以群体遗传学方法对这 4个意蜂品系的RAPD多态性扩增条带进行分析。分析结果表明 ,在引物W18扩增出的多态性条带中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带仅在美意中检测到 ,其基因频率分别为 0 .0 5 5 9和 0 .0 4 2 0 ;6 32bp条带在平湖浆蜂中出现的基因频率 (0 .90 86 )远高于美意 (0 .0 36 3)、澳意 (0 .0 190 )和苏意 (0 .0 0 0 0 ) ;2 0 92bp条带在美意与澳意中出现的基因频率分别为 0 .0 2 2 3和 0 .0 6 6 7,而在苏意和平湖浆蜂未检测到该条带。在W2 3引物扩增条带中 ,仅在澳意中检测到 6 5 1bp条带 ,其基因频率为 0 .0 348。RAPD多态性扩增条带基因频率的聚类分析结果表明 ,平湖浆蜂与苏意的亲缘关系最近 ,其遗传相关系数为 0 .982 0 ;平湖浆蜂、苏意与美意的遗传系数均为 0 .970 0 ,而与澳意的遗传相关系数均为 0 .96 90 ,表明这两个地方蜂种与美意的亲缘关系略高于澳意。美意与澳意的亲缘关系相对较远 ,其遗传相关系数为 0 .96 90。本研究结果在鉴定意蜂地理亚种下的各品系中具有实际应用价值。 展开更多

关键词 浆蜂 品系 遗传相关系数 RAPD多态性 亲缘关系 意蜂 遗传标记 扩增 基因频率 研究结果

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电穿孔导入法在意大利蜜蜂卵基因转移上的应用 被引量：4

6

作者 郭冬生 孙亮先 +1 位作者 黄志祥 张巧利 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期418-421,共4页

研究目的是探讨电穿孔技术在意大利蜜蜂卵基因转化中应用的可能性。实验用质粒pEGFP-Nl对意大利蜜蜂卵电转导条件优化进行系统研究,然后利用所得到的电穿孔优化条件,对大量意大利蜜蜂早、晚期卵进行绿色荧光蛋白基因转移研究。实验结果... 研究目的是探讨电穿孔技术在意大利蜜蜂卵基因转化中应用的可能性。实验用质粒pEGFP-Nl对意大利蜜蜂卵电转导条件优化进行系统研究,然后利用所得到的电穿孔优化条件,对大量意大利蜜蜂早、晚期卵进行绿色荧光蛋白基因转移研究。实验结果获得1组较佳电学参数：脉冲电压750 V/cm,脉冲时间160μs,电击次数1;意蜂早期卵阳性表达率为0.31%～0.90%,晚期卵为0.00%～0.30%。结果表明电穿孔法可以促使意大利蜜蜂卵摄入外源基因,且意大利蜜蜂早期卵电转导效果比晚期卵好。 展开更多

关键词 电穿孔 绿色荧光蛋白基因 基因转移 意大利蜜蜂卵

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蜜蜂转基因技术 被引量：4

7

作者 张巧利 孙亮先 +1 位作者 郭冬生 胥保华 《泉州师范学院学报》 2005年第4期94-99,共6页

简述了建立蜜蜂转基因技术体系的方法和筛选标记.以显微注射法将改造过的pig-gyBac、mariner等转座子转基因载体导入受精卵是蜜蜂转基因工作的最佳候选方案,精子介导法和病毒载体法也值得尝试.增强型荧光蛋白(EGFP)基因是转基因蜜蜂的... 简述了建立蜜蜂转基因技术体系的方法和筛选标记.以显微注射法将改造过的pig-gyBac、mariner等转座子转基因载体导入受精卵是蜜蜂转基因工作的最佳候选方案,精子介导法和病毒载体法也值得尝试.增强型荧光蛋白(EGFP)基因是转基因蜜蜂的最佳筛选标记.并对蜜蜂转基因技术体系在基因功能研究和生物反应器的开发等方面的应用前景进行了探讨. 展开更多

关键词 蜜蜂 转基因 载体 显微注射 转座子 精子

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蜜蜂精子介导GFP基因转移研究 被引量：4

8

作者 郭冬生 张巧利 孙亮先 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期118-123,共6页

将pGFP-2质粒线性化，利用精子介导，通过人工授精技术导入意大利蜜蜂处女王，然后将授精王介绍到无王群繁殖后代。结果：试验群产生了一群绿色荧光阳性蜜蜂；对阳性蜂群后代分析发现，1-2日龄幼虫能检测到荧光，提取蜜蜂DNA进行PCR扩... 将pGFP-2质粒线性化，利用精子介导，通过人工授精技术导入意大利蜜蜂处女王，然后将授精王介绍到无王群繁殖后代。结果：试验群产生了一群绿色荧光阳性蜜蜂；对阳性蜂群后代分析发现，1-2日龄幼虫能检测到荧光，提取蜜蜂DNA进行PCR扩增得到预想的片断，通过RT-PC分析，从转录水平上证实转导的外源基因获得表达。结论：以绿色荧光蛋白（GFP）基因为报告基因，通过精子介导法能够生产克隆转基因蜜蜂。 展开更多

关键词 意大利蜜蜂 精子 基因转移 GFP

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四个意大利蜜蜂品系苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异分析 被引量：1

9

作者 孙亮先 陈朝阳 +1 位作者 袁建军 谢进金 《漳州师范学院学报（自然科学版）》 2004年第1期54-59,共6页

研究了意大利蜜蜂(A.m.ligustica)4个王浆、蜂蜜生产性能不同品系—美意(Em)、澳意(Eo)、苏意(Es)和平湖浆蜂(Ep)的MDHⅡ同工酶基因型频率、基因频率及杂合纯合度.试验发现,MDHⅡ的a、b、c三个等位基因在4个品系中出现的频率不同.c在Em... 研究了意大利蜜蜂(A.m.ligustica)4个王浆、蜂蜜生产性能不同品系—美意(Em)、澳意(Eo)、苏意(Es)和平湖浆蜂(Ep)的MDHⅡ同工酶基因型频率、基因频率及杂合纯合度.试验发现,MDHⅡ的a、b、c三个等位基因在4个品系中出现的频率不同.c在Em、Eo、Es和Ep中的基因频率分别为0.507、0.483、0.680和0.820,为优势等位基因.该结果表明在产浆性能高的品系中c基因频率较高,意味着可将c基因频率作为意蜂王浆产量性能的一个遗传标记.等位基因a在Em、Eo、Es和Ep中频率分别为0.323、0.263、0.193和0.087;在Em中出现的频率最高.而等位基因b在Eo中频率(0.253)高于其他3个品系(Em,0.170; Es,0.127;Ep,0.093).Ep的纯合度最高,达0.753,高于Em(0.533)、Eo(0.633)和Es(0.540).经独立性检验,4个意蜂品系MDHⅡ同工酶的基因型频率、基因频率、纯合度均达到极显著差异水平. 展开更多

关键词 意大利蜜蜂品系 苹果酸脱氢酶Ⅱ基因 遗传差异 基因频率 遗传标记

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饲喂蜂王浆对果蝇繁殖力影响的研究 被引量：3

10

作者 孙亮先 林春玉 +2 位作者 陈朝阳 陈晓雅 陈顺燕 《中国蜂业》 2008年第3期5-6,共2页

在果蝇羽化至性成熟期间补饲不同剂量的蜂王浆,研究了蜂王浆对果蝇繁殖力的影响。结果表明,补饲蜂王浆可极显著提高雌果蝇的繁殖力,其F1代成蛹数最高可比对照组高158%;而王浆对雄果蝇的繁殖力影响不明显。试验还发现,王浆对果蝇繁殖力... 在果蝇羽化至性成熟期间补饲不同剂量的蜂王浆,研究了蜂王浆对果蝇繁殖力的影响。结果表明,补饲蜂王浆可极显著提高雌果蝇的繁殖力,其F1代成蛹数最高可比对照组高158%;而王浆对雄果蝇的繁殖力影响不明显。试验还发现,王浆对果蝇繁殖力的影响主要发生在雌性果蝇的性发育阶段。 展开更多

关键词 蜂王浆 果蝇 繁殖力

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电穿孔作用将外源基因导入中华蜜蜂卵的研究 被引量：2

11

作者 郭冬生 曾志将 孙亮先 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期222-225,共4页

将中华蜜蜂卵与带有绿色荧光蛋白基因的质粒DNA混合,经电穿孔作用后,人工孵化蜜蜂卵,并对孵化的幼虫进行检测。结果筛选出一组较理想的中华蜜蜂卵电穿孔参数(750V.cm-1,100μs,1);通过荧光检测,电击卵孵化的幼虫体内可以表达EGFP基因,... 将中华蜜蜂卵与带有绿色荧光蛋白基因的质粒DNA混合,经电穿孔作用后,人工孵化蜜蜂卵,并对孵化的幼虫进行检测。结果筛选出一组较理想的中华蜜蜂卵电穿孔参数(750V.cm-1,100μs,1);通过荧光检测,电击卵孵化的幼虫体内可以表达EGFP基因,阳性表达率最高可达1.05%,且外源DNA转染早期卵的效率显著高于晚期卵。结果表明电穿孔作用成功地将外源基因引入中华蜜蜂卵内,质粒DNA转染中华蜜蜂卵的效率与卵的生长时期有关。 展开更多

关键词 电穿孔 绿色荧光蛋白基因 基因转移 中华蜜蜂卵

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蜂王浆介导外源基因转移的初步研究 被引量：2

12

作者 郭冬生 孙亮先 张巧利 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期730-733,共4页

采用DNA延滞实验研究蜂王浆与DNA的结合能力,然后通过蜂群哺育和人工培育两种方式,对1日龄工蜂幼虫进行短期饲喂,初步研究蜂王浆介导绿色荧光蛋白基因的方法和转移情况。结果表明:在蜂群环境下,蜂王浆中的外源DNA短期内不会完全被分解;... 采用DNA延滞实验研究蜂王浆与DNA的结合能力,然后通过蜂群哺育和人工培育两种方式,对1日龄工蜂幼虫进行短期饲喂,初步研究蜂王浆介导绿色荧光蛋白基因的方法和转移情况。结果表明:在蜂群环境下,蜂王浆中的外源DNA短期内不会完全被分解;但用蜂王浆作媒介并未实现蜜蜂基因转染,蜜蜂能否通过蜂王浆介导实现基因转移,还需进一步探讨。 展开更多

关键词 蜂王浆 基因转移 中华蜜蜂

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毕赤酵母发酵过程胞内活性氧的定量分析 被引量：1

13

作者 肖安风 孙亮先 +1 位作者 倪辉 蔡慧农 《泉州师范学院学报》 2009年第4期87-90,共4页

利用流式细胞术对毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧(ROS)的变化进行定量检测和分析,建立发酵过程单位细胞胞内ROS的相对含量以及单位体积细胞胞内ROS相对含量的计算方法,分析ROS积累对毕赤酵母细胞活力的影响.研究结果表明:在甲醇流加阶段... 利用流式细胞术对毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧(ROS)的变化进行定量检测和分析,建立发酵过程单位细胞胞内ROS的相对含量以及单位体积细胞胞内ROS相对含量的计算方法,分析ROS积累对毕赤酵母细胞活力的影响.研究结果表明:在甲醇流加阶段,单位细胞的DCF(2′,7′-二氯荧光黄)染色平均荧光强度随着时间的增加而增加,即单位细胞胞内ROS的含量在甲醇流加阶段一直增加,细胞内产生持续的氧化压力,导致部分细胞死亡;单位体积酵母细胞的胞内ROS含量在甲醇流加阶段保持在一个相对稳定的范围. 展开更多

关键词 毕赤酵母 活性氧 流式细胞术 细胞活力 定量分析

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蛋白酶水解鳕鱼粉条件的研究

14

作者 张其标 孙亮先 +2 位作者 杨远帆 倪辉 蔡慧农 《泉州师范学院学报》 2007年第6期103-106,共4页

对比研究pH、水解温度、时间、底物浓度、产物浓度等条件因子对4种商品蛋白酶水解鳕鱼粉的影响，为利用蛋白酶水解鳕鱼粉提供理论基础．试验结果表明：碱性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为8．0，温度为45℃，时间为20mia，鳕鱼粉浓度为6％... 对比研究pH、水解温度、时间、底物浓度、产物浓度等条件因子对4种商品蛋白酶水解鳕鱼粉的影响，为利用蛋白酶水解鳕鱼粉提供理论基础．试验结果表明：碱性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为8．0，温度为45℃，时间为20mia，鳕鱼粉浓度为6％，氨基酸含量不超过1．95mg·mL^-1；复合蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为6．5，温度为50℃，时间为25mia，鳕鱼粉浓度为6％，氨基酸含量不超过2．08mg·mL^-1；中性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为7．0，温度为40℃，时间为20min，鳕鱼粉浓度为6％～8％，氨基酸含量不超过2．29mg·mL^-1；酸性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为3．0，温度为40℃，时间为20min，鳕鱼粉浓度为6％～8％，氨基酸含量不超过2．82mg·mL^-1． 展开更多

关键词 蛋白酶 鳕鱼粉 水解 水解条件

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利用egfp基因对中华蜜蜂卵进行显微注射的初步研究 被引量：1

15

作者 郭冬生 孙亮先 陈碧强 《中国蜂业》 2008年第7期10-11,共2页

利用显微注射法对中华蜜蜂0～12h卵注射绿色荧光蛋白基因,注射后的卵采取人工繁殖和蜂群自然培养两种方式饲养,结果蜜蜂卵注射后存活率低,绿色荧光蛋白基因表达不理想;实验探讨了中华蜜蜂卵显微注射转基因技术,为今后蜜蜂显微注射转基... 利用显微注射法对中华蜜蜂0～12h卵注射绿色荧光蛋白基因,注射后的卵采取人工繁殖和蜂群自然培养两种方式饲养,结果蜜蜂卵注射后存活率低,绿色荧光蛋白基因表达不理想;实验探讨了中华蜜蜂卵显微注射转基因技术,为今后蜜蜂显微注射转基因研究和改进提供了一定参考价值。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 显微注射 绿色荧光蛋白基因

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水稻幼苗SAGE文库的构建和测序

16

作者 孙亮先 《泉州师范学院学报》 2006年第2期83-88,共6页

基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)是功能基因组学研究中的一项功能强大的工具.对水稻幼苗SAGE文库的构建进行了探索试验,其主要操作步骤为:以磁珠法提取PolyA mRNA用于合成双链cDNA,再经过一系列的酶切、加... 基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)是功能基因组学研究中的一项功能强大的工具.对水稻幼苗SAGE文库的构建进行了探索试验,其主要操作步骤为:以磁珠法提取PolyA mRNA用于合成双链cDNA,再经过一系列的酶切、加接头序列、连接、PCR扩增,获得到26-bp的水稻双标签体,再将26-bp Ditag连接成标签链接体,并将其克隆进pZero-1载体中用于测序.DNA测序结果证明获得了水稻的SAGE标签.试验的各个中间步骤的结果均经过PCR验证. 展开更多

关键词 水稻 基因表达系列分析 基因 文库构建 测序

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蜜蜂遗传标记研究进展

17

作者 孙亮先 《山东畜牧兽医》 2004年第2期41-42,共2页

关键词 蜜蜂 遗传标记 形态学遗传标记 生化遗传标记 分子遗传标记 辅助育种

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