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副猪格拉瑟菌4个抗原蛋白的小鼠免疫保护效力比较
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作者 董玉岗 杨金钱 +7 位作者 丁略烜 史琳琪 杨梦娟 张俊峰 关丽君 司丽芳 薛云 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1057-1064,共8页
为筛选可用于副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达GPS的CyaY、SmpA、AfuA和OppA14个抗原的重组蛋白,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化这4个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果,... 为筛选可用于副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达GPS的CyaY、SmpA、AfuA和OppA14个抗原的重组蛋白,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化这4个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果,采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,4个重组蛋白r CyaY、r SmpA、rAfuA和rOppA1的分子量分别约为12 ku、16 ku、41 ku和62 ku,均主要以可溶性形式表达,其表达量占菌体总蛋白的16.50%~26.50%。4个重组蛋白的纯化效果均较好,其浓度介于1.00 mg/mL~4.00 mg/mL。Western blot结果显示,rOppA1和rAfuA与GPS猪阳性血清的反应原性最强,rCyaY的反应原性中等,rSmpA的反应原性最弱。采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定4个重组蛋白的浓度后分别与ISA 201佐剂混合制成疫苗,对小鼠经皮下注射方式免疫2次,分别在小鼠免疫前、首免后21 d和二免后14 d采血,采用间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的抗体水平;二免后14 d分别以5 LD_(50)(8.40×10^(8)cfu)和10 LD_(50)(1.68×10^(9)cfu)的5型GPS H5L3株对小鼠经腹腔攻毒,统计各重组蛋白疫苗对小鼠的免疫攻毒保护率。ELISA结果显示,各重组蛋白疫苗免疫组小鼠血清中IgG抗体水平随免疫次数的增加而升高,且均与PBS对照组抗体水平差异极显著(P<0.01)。小鼠攻毒试验结果显示,采用5 LD_(50)H5L3株攻毒后,rCyaY、rSmpA、rAfuA和rOppA1蛋白疫苗对小鼠的免疫保护率分别为83.3%(5/6)、83.3%(5/6)、33.3%(2/6)和100%(6/6);采用10 LD_(50)H5L3株攻毒后,rCyaY、r SmpA和rOppA1蛋白疫苗仍能对小鼠提供33.3%(2/6)、16.7%(1/6)和50%(3/6)的免疫保护率,但rAfuA蛋白疫苗不能为小鼠提供有效的免疫保护力(0/6)。本研究首次在相同条件下表达了GPS的4个重要保护性重组抗原蛋白rCyaY、rSmpA、r AfuA和r OppA1,并评价了它们对小鼠的免疫保护效力,证实rOppA1具有成为亚单位疫苗候� 展开更多
关键词 副猪格拉瑟菌 抗原 小鼠 保护效力 亚单位疫苗
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