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题名MTT显色反应实验条件分析
被引量：17
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作者
赵承彦
靖志安
牛青霞
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机构
河南省肿瘤研究所生物医学研究室
汕头大学医学院微生物系
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出处
《河南医学研究》
CAS
2000年第2期107-111,共5页
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基金
河南省自然科学基金
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文摘
目的 :检验分析MTT实验方法本底高、灵敏度低、稳定性差的影响因素 ,改进实验条件提高灵敏度和稳定性 ,降低本底。方法 :用MTT比色方法 ,细胞毒试验及细胞增殖实验 ,分析比较不同条件下MTT显色反应的性能特点。结果 :比较了 13种溶剂对Formazan的溶解性能。分析检验了琥珀酸脱氢酶在细胞上的分布特点、pH值对MTT反应体系的影响、酚红和牛血清对检验结果的影响 ,提出相应对策。检测了MTT反应时间曲线和细胞活力曲线。分析了改进后的MTT实验方法的灵敏度和稳定性。结论 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面。MTT反应体系的pH值为 6 7,比较好的Formazan溶剂是正丙醇、异丙醇和乙二醇乙醚。去掉细胞培养上清 ,检测细胞上的酶 ,用溶剂使蛋白质变性 ,经沉淀去掉蛋白质影响 ,能使MTT实验方法的本底降低 ,灵敏度提高。通常情况下该方法检测K 5 62细胞和人淋巴细胞的灵敏度分别为 10 0 0和 10 0 0 0个细胞左右。
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关键词
MTT
酶释放法
比色方法
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Keywords
MTT
enzyme release way
colorimetric assay
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分类号
R392.12
[医药卫生—免疫学]
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题名酶释放法用于细胞介导的细胞毒试验问题分析
被引量：3
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作者
赵承彦
靖志安
牛青霞
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机构
河南省肿瘤研究所生物医学研究室
汕头大学医学院微生物系
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出处
《河南医学研究》
CAS
2000年第1期1-5,共5页
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基金
河南省自然科学基金资助项目
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文摘
目的 :检验分析酶释放法用于细胞毒试验存在的问题。方法 :用51Cr释放法和MTT比色法、NAG比色法 ,单独或相互比较 ,检验分析细胞毒试验中效靶细胞相互作用规律 ,酶在细胞代谢中分布情况 ,细胞死伤前后酶释放特点。结果 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面 ,而以NAG为底物的酶分布在细胞内。细胞有自主释放酶的功能 ,正常细胞与受损伤细胞释放酶速度不同。细胞毒作用过程中效应细胞也有损伤 ,也有酶释放 ,与靶细胞死伤后释放的酶属于同一类 ,而且混合在一起 ,目前尚无可行的定量分离和鉴别方法。酶释放法用于细胞毒试验 ,对于不同状态的标本检验结果没有规律性 ,不能反映机体免疫功能状态。结论 :酶释放法不宜用于细胞介导的细胞毒试验。
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关键词
细胞毒试验
酶释放法
MTT
NAG
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Keywords
cytotoxicity assay
enzyme release way
MTT
NAG
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分类号
R392.12
[医药卫生—免疫学]
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