抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量：11

1

作者 白慧玲 赵粤萍 +1 位作者 刘广超 马远方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期514-516,520,共4页

目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jur... 目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用。以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果：获得4株可分泌抗DR5 mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1；腹水mAb效价为1×10^-4-5×10^-6；亲和常数为1×10^9水平，4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论：获得4株抗DR5的mAb，为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。 展开更多

关键词 DR5 单克隆抗体 特性鉴定 亲和常数

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抗人DR5单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的诱导凋亡作用 被引量：5

2

作者 李淑莲 马远方 +4 位作者 刘广超 张军 白慧玲 刘英杰 卢峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期295-297,共3页

目的观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用。方法制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexi... 目的观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用。方法制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞仪检测mDRA-6对HL-60细胞凋亡率的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对HL-60细胞DNA片段化的影响。结果mDRA-6导致HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对HL-60细胞具有明显的杀伤作用,24 ng/mL mDRA-6作用HL-60细胞10 h,细胞死亡率达21.2%;1μg/mL的mDRA-6作用8 h,可使HL-60细胞死亡44.1%;Annexin V及PI双染显示,10μg/mL mDRA-6作用2 h,HL-60细胞的凋亡率达48.1%;20μg/mL mDRA-6作用HL-60细胞3 h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论抗DR5单克隆抗体mDRA-6具有诱导HL-60细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 抗体

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抗DR5单克隆抗体-mDRA-6对白血病细胞的凋亡诱导作用 被引量：5

3

作者 李淑莲 马远方 +3 位作者 刘广超 张军 白慧玲 刘英杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期754-756,共3页

目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA-6对白血病细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5mAb-mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下白血病细胞Jurkat、HL-60、K562的形态变化;MTT... 目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA-6对白血病细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5mAb-mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下白血病细胞Jurkat、HL-60、K562的形态变化;MTT法测定不同浓度的mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞存活率的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞术检测mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞凋亡率的影响。结果:mDRA-6导致Jurkat、HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对Jurkat、HL-60细胞具有明显的杀伤作用,但对K562的杀伤作用较弱,25mg/L的mDRA-6作用12h,Jurkat、HL-60、K562细胞死亡率分别为88.76%,59.76%,5.18%。Annexin V及PI双染显示1mg/L的mDRA-6作用10h,Jurkat细胞凋亡率为86.06%,10mg/L的mDRA-6作用10h,HL-60细胞凋亡率为48.11%,但10mg/L的mDRA-6作用K562细胞10h,细胞凋亡不明显。结论:抗DR5mAb mDRA-6能够诱导白血病细胞凋亡,不同的白血病细胞株对mDRA-6的敏感性不同。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 抗死亡受体5单克隆抗体 白血病

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抗DR5单抗增强顺铂诱导HeLa细胞凋亡作用的研究 被引量：2

4

作者 赵粤萍 贾彩云 +1 位作者 马远方 沈倍奋 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期198-201,共4页

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)主要通过死亡受体5(death recep- tor,DR5)诱导肿瘤细胞凋亡。本文旨在探讨顺铂对HeLa细胞表面DR5分子表达影响及抗DR5单抗mDRA-6对顺铂诱导HeLa细胞凋亡增... 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)主要通过死亡受体5(death recep- tor,DR5)诱导肿瘤细胞凋亡。本文旨在探讨顺铂对HeLa细胞表面DR5分子表达影响及抗DR5单抗mDRA-6对顺铂诱导HeLa细胞凋亡增强作用。用间接免疫荧光染色结合流式细胞术分析DR5分子表达;MTT法检测HeLa细胞毒作用;用AnnexinV/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果:正常HeLa细胞表面DR5表达量为30.01%,顺铂不能上调HeLa细胞表面DR5表达;mDRA-6可以明显提高顺铂对HeLa细胞的细胞毒作用,且存在剂量效应关系。IC_(50)值约为12.5μg/ml。研究结果表明,mDRA-6能够明显增强顺铂对HeLa细胞的细胞毒及细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 MDRA-6 DR5 顺铂 HeLa细胞 细胞毒 凋亡

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抗人DR5单克隆抗体的制备及其生物活性分析 被引量：1

5

作者 刘英杰 马远方 +3 位作者 张军 赵粤萍 白慧玲 李淑莲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期355-356,共2页

关键词 抗人DR5单克隆抗体 生物活性分析 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 apoptosis RECEPTOR TRAIL 制备 LIGAND

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抗动脉粥样硬化基因在人主动脉与冠状动脉内皮细胞系的表达

6

作者 朱诗白 丁文超 +7 位作者 刘瑞敏 孙伊傥 刘明锁 唐一鸣 李涛 姬新颖 马远方 白慧玲 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2013年第1期42-45,共4页

目的检测VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1、ICAM2在人主动脉内皮细胞(HAEC)与人冠状动脉内皮细胞(HCA)的表达,探讨冠状动脉易发粥样硬化的分子机制。方法培养HAEC及HCA,提取RNA,用常规RT-PCR检测VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1、ICAM2在HAEC及HCA中... 目的检测VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1、ICAM2在人主动脉内皮细胞(HAEC)与人冠状动脉内皮细胞(HCA)的表达,探讨冠状动脉易发粥样硬化的分子机制。方法培养HAEC及HCA,提取RNA,用常规RT-PCR检测VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1、ICAM2在HAEC及HCA中的表达。结果VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1在HAEC表达均强于HCA表达,而ICAM2的表达低于HCA。结论主动脉内皮细胞VEGF、COX-2、eNOS、ZO-1的表达,可能有助于抗动脉粥样硬化。 展开更多

关键词 主动脉 冠状动脉 内皮细胞 基因 动脉粥样硬化

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绒毛中TRAIL及其受体的表达与不明原因反复自然流产的相关性的探讨

7

作者 白慧玲 李秀敏 +2 位作者 赵粤萍 徐志喜 马远方 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期53-55,共3页

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达及二者的相关性。方法选择实验组妊娠45～60 d的URSA患者15例,对照组健康人工流产15例。两组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TR... 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达及二者的相关性。方法选择实验组妊娠45～60 d的URSA患者15例,对照组健康人工流产15例。两组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达,进行方差分析和t检验比较两组绒毛组织中TRAIL及其受体蛋白表达水平的差异。结果实验组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强,而诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照相比表达较少,P值均小于0.05。结论TRAIL及其受体可能是造成自然流产的机制之一。 展开更多

关键词 TRAIL DR4 DR5 反复流产 绒毛

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交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究 被引量：6

8

作者 白慧玲 杜耀武 +4 位作者 王雪垠 李淑莲 王靖 刘广超 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期789-792,797,共5页

目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MT... 目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。 展开更多

关键词 交联 JURKAT细胞 抗DR5抗体 凋亡 流式细胞术 免疫印迹

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正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异分析 被引量：3

9

作者 王艳鸽 李燕杰 +1 位作者 都景芳 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期797-800,809,共5页

目的:探讨正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异。方法:采用ELISA间接法检测正常人群与肿瘤患者血清中死亡受体5的天然自身抗体,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群中血清DR5天然自身抗体OD值平均... 目的:探讨正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异。方法:采用ELISA间接法检测正常人群与肿瘤患者血清中死亡受体5的天然自身抗体,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群中血清DR5天然自身抗体OD值平均值为0.39,在人群中呈近正态分布。正常人群血清DR5自身抗体OD值在不同年龄组之间存在显著性差异(P<0.05),随年龄增大而增高。相同年龄组之间,正常人群与肿瘤患者的血清中DR5天然自身抗体的OD值存在差异,肿瘤患者的OD值(0.17±0.014)小于正常人群的OD值(0.39±0.011),P<0.01。结论:我们发现人群中存在DR5的天然自身抗体,但平均滴度较低,符合生理性天然自身抗体的特点。正常人群血清中DR5的NAA水平随着年龄增加而增高,而肿瘤患者血清中DR5的NAA水平低于正常人群。提示在衰老的过程中,血清中DR5天然自身抗体的提高可能有助于清除恶变的细胞,施行肿瘤监视功能,阻止恶变细胞进展为肿瘤。 展开更多

关键词 死亡受体5 天然自身抗体 间接ELISA

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耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其生物学特性 被引量：2

10

作者 牛保华 王建军 席艳 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第1期41-44,共4页

目的:诱导并建立耐阿霉素(Adriamycin,ADM)的人骨肉瘤细胞株,观察耐药细胞系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4)的生物学特性.方法:以ADM为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株,建立不同药物浓度耐药系(Sao... 目的:诱导并建立耐阿霉素(Adriamycin,ADM)的人骨肉瘤细胞株,观察耐药细胞系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4)的生物学特性.方法:以ADM为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株,建立不同药物浓度耐药系(Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4);MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(Cispla-tin,DDP)、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、异环磷酰胺(Ifos-famide,IFO)、表柔比星(Epirubicine,EPI)、比柔比星(Pirarubi-cin,THP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)药物敏感性;光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化;细胞生长曲线检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期比例.结果:经167d的诱导,建立了Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株,其对ADM的耐药指数(Resistant drug index,RI)分别为原代细胞株49.8和74.6倍;耐药细胞株对MTX,EPI,THP,PTX亦产生不同程度的交叉耐药,对DDP仍然敏感;光镜观察Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株细胞体积增大,多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加;透射电镜显示Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多;细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降,S期细胞所占比例减少.结论:建立了耐ADM人骨肉细胞株Saos-2/ADM1,Saos-2/ADM4并观察了耐药细胞株的生物学特性. 展开更多

关键词 骨肉瘤 肿瘤细胞 阿霉素 耐药

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抗人DR5单链抗体噬菌体展示文库的建立和筛选 被引量：3

11

作者 刘瑞敏 季泽俊 +4 位作者 孙颖川 张爱红 朱诗白 白慧玲 马远方 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期945-948,共4页

目的应用噬菌体展示技术构建抗人DR5(death receptor 5,DR5)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗DR5 scFv。方法利用重组人DR5抗原免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ位点定... 目的应用噬菌体展示技术构建抗人DR5(death receptor 5,DR5)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗DR5 scFv。方法利用重组人DR5抗原免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ位点定向插入PAK100噬菌粒载体,转化E.coli XL1-Blue,构建了库容为1×106的抗DR5单链抗体库。对抗体库进行5轮富集筛选后,phage-ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析。结果抗DR5 scFv基因序列长747 bp,编码249个氨基酸,具有和DR5结合的特异性。结论本文利用噬菌体抗体库筛选到了抗DR5 scFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 死亡受体5 单链抗体

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可溶性死亡受体5在化疗前后肺癌患者外周血中的检测 被引量：1

12

作者 朱诗白 杨永杰 +3 位作者 刘瑞敏 张爱红 孙颍川 白慧玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1028-1031,共4页

目的:探讨正常人群外周血清中sDR5及与肺癌患者的差异。方法:采用ELISA夹心法检测106例正常人群、79例肺癌患者与肺癌化疗以后血清中死亡受体5的含量,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群外周血清中sDR5平均值为(6.25&... 目的:探讨正常人群外周血清中sDR5及与肺癌患者的差异。方法:采用ELISA夹心法检测106例正常人群、79例肺癌患者与肺癌化疗以后血清中死亡受体5的含量,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群外周血清中sDR5平均值为(6.25±3.09)μg/L,肺癌患者的sDR5含量为(53.91±13.42)μg/ml明显高于正常人群,P<0.001。肺癌病人化疗后外周血sDR5水平为(23.99±14.23)μg/ml较治疗前明显下降,P<0.001。结论:外周血中sDR5的消退水平有可能与肿瘤病人发病、发展及预后密切相关。 展开更多

关键词 死亡受体5 夹心ELISA 肺癌

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mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞的杀伤效应

13

作者 刘英杰 马远方 +4 位作者 张军 赵粤萍 李淑莲 刘广超 白慧玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期522-525,共4页

目的:探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法:常规培养Jurkat细胞,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞... 目的:探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法:常规培养Jurkat细胞,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:①Jurkat细胞表面DR5的表达率为84.83%。②mDRA-6与尼美舒利均能杀伤Jurkat细胞,存在浓度依赖性。400μmol/L的尼美舒利作用细胞10小时,细胞凋亡率为11.51%;0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为3.67%和6.3%;③二者联合具有较好的协同促凋亡作用,400μmol/L的尼美舒利联合0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为50.38%和63.79%。结论:mDRA-6与尼美舒利均有杀伤Jurkat细胞的作用,二者具有较强的协同作用,杀伤作用是通过诱导凋亡实现的。 展开更多

关键词 抗人DR5单克隆抗体 MDRA-6 尼美舒利 凋亡 JURKAT细胞

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