生理应激对肉仔鸡胴体品质及肌肉品质影响 被引量：5

1

作者 胡骁飞 呙于明 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期71-76,共6页

为考察生理应激对肉仔鸡胴体品质及肌肉品质的影响,选用108只1周龄肉仔鸡均分为对照组和皮质酮组,分别饲喂基础日粮和在基础日粮中添加30mg/kg日粮的皮质酮。21日龄时,测定肉仔鸡血液皮质酮含量;42日龄时,测定胴体和肌肉品质。结果表明... 为考察生理应激对肉仔鸡胴体品质及肌肉品质的影响,选用108只1周龄肉仔鸡均分为对照组和皮质酮组,分别饲喂基础日粮和在基础日粮中添加30mg/kg日粮的皮质酮。21日龄时,测定肉仔鸡血液皮质酮含量;42日龄时,测定胴体和肌肉品质。结果表明:皮质酮组肉仔鸡血液皮质酮含量显著高于对照组(P<0.05)。皮质酮组肉仔鸡胸肌率、腿肌率、胸肌纤维面积、胸肌滴水损失率及胸肌脂肪含量分别比对照组低25.74%、10.47%、14.75、24.08%和42.86%,均差异显著(P<0.05)。皮质酮组肉仔鸡腹脂率、腿肌pH及胸肌中蛋白脂肪比分别比对照组高34.75%、6.65%和58.57%,均差异显著(P<0.05)。2处理间胸肌pH及剪切力,腿肌滴水损失率及剪切力,胸肌蛋白含量均无显著差异(P>0.05)。结果提示,皮质酮应激显著降低肉仔鸡胸肌率、腿肌率、胸肌滴水损失率和胸肌中脂肪含量,显著提高了肉仔鸡的腹脂率、腿肌pH及胸肌中蛋白脂肪比。 展开更多

关键词 肉仔鸡 皮质酮 应激 胴体品质 肌肉品质

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沙棘及产品在饲料中的应用 被引量：2

2

作者 胡骁飞 陈亮 +2 位作者 魏凤仙 邓瑞广 张改平 《饲料研究》 CAS 北大核心 2009年第9期76-77,共2页

由于抗生素作为饲料添加剂使用受到限制,寻求取代抗生素的产品成为动物营养领域的研究热点。沙棘枝叶或沙棘果含有多种生物学活性物质,能改善动物生长性能,提高机体免疫功能及抗氧化能力,改善畜禽产品品质,因此是一种良好的抗生素替代品。

关键词 沙棘 生长性能 免疫功能 畜禽产品品质

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氧氟沙星单链抗体的制备及间接竞争ELISA的建立 被引量：3

3

作者 张运尚 王方雨 +1 位作者 胡曼 樊剑鸣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期116-123,159,共9页

为了制备高灵敏度、高特异性的抗氧氟沙星单链抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA),试验采用噬菌体展示技术构建免疫小鼠噬菌体库,经过筛选后将分离出的阳性抗体转入大肠杆菌BL21中进行表达,然后采用分子对接的方法进行分子识别机... 为了制备高灵敏度、高特异性的抗氧氟沙星单链抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA),试验采用噬菌体展示技术构建免疫小鼠噬菌体库,经过筛选后将分离出的阳性抗体转入大肠杆菌BL21中进行表达,然后采用分子对接的方法进行分子识别机制研究和虚拟突变,将关键氨基酸残基进行突变制备突变体,并建立间接竞争ELISA。结果表明:构建的噬菌体库经过四轮筛选后,最终库容量为2.35×10^(7) cfu/mL。从库中分离出25株单克隆阳性菌落,选择结合能力高的第22株单克隆菌落进行表达。分子对接后甲硫氨酸209(Met209)残基为单链抗体与氧氟沙星结合的关键氨基酸残基,将其突变为谷氨酰胺(Gln)后,总结合能从-5.32 kJ/mol降至-6.94 kJ/mol,表明突变体结合能力更强。建立检测方法的标准曲线方程为y=-0.192 7x+0.542 3 (R2=0.999 4),半数抑制浓度为1.66 ng/mL,相比于亲本单链抗体的21.08 ng/mL,敏感性提高了12.7倍。说明试验成功制备了高灵敏度、高特异性的抗氧氟沙星单链抗体并建立了间接竞争ELISA,为动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留检测提供基础。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 单链抗体 氟喹诺酮类药物 药物残留检测 分子识别机制 间接竞争酶联免疫吸附法

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乙型脑炎病毒感染小鼠原代神经元细胞的miRNA表达谱差异分析 被引量：2

4

作者 杜加茹 陈浩南 +2 位作者 王方雨 张运尚 樊剑鸣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2319-2323,共5页

研究乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染后小鼠原代神经元细胞miRNA的表达谱差异,初步探讨JEV与宿主在miRNA水平的相互作用。分别提取JEV感染48 h后的小鼠原代神经元细胞和未染毒组细胞,高通量测序分析miRNA的表达谱并... 研究乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染后小鼠原代神经元细胞miRNA的表达谱差异,初步探讨JEV与宿主在miRNA水平的相互作用。分别提取JEV感染48 h后的小鼠原代神经元细胞和未染毒组细胞,高通量测序分析miRNA的表达谱并进行差异分析,选取显著差异表达的miRNA进行实时定量PCR验证。结果筛选出26个差异表达显著的miRNA,其中,18个表达上调,8个表达下调。小鼠原代脑神经元细胞中mmu-miR-21a-3p、mmu-miR-223-5p、mmu-miR-147-3p、mmu-miR-155-5p和mmu-miR-146a-5p的表达促进JEV-E基因在神经元细胞中表达,而mmu-miR-301a的表达抑制JEV-E基因的表达。神经元细胞中miRNA的表达影响JEV的复制,为进一步研究JEV致神经功能异常机制提供研究方向和理论支持。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 小鼠原代神经元细胞 MICRORNA

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沙丁胺醇ELISA方法的建立及应用 被引量：5

5

作者 张静 张改平 +5 位作者 职爱民 杨艳艳 刘宣兵 胡骁飞 邓瑞广 李梦琴 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期194-199,共6页

为建立1种快速检测沙丁胺醇的ELISA方法,以制备的抗沙丁胺醇（salbutamol,SAL）高亲和力单克隆抗体为基础,从影响ELISA检测结果的因素出发,优化间接竞争ELISA条件。通过添加标准沙丁胺醇溶液进行验证。试验结果表明：ELISA反应的最佳反... 为建立1种快速检测沙丁胺醇的ELISA方法,以制备的抗沙丁胺醇（salbutamol,SAL）高亲和力单克隆抗体为基础,从影响ELISA检测结果的因素出发,优化间接竞争ELISA条件。通过添加标准沙丁胺醇溶液进行验证。试验结果表明：ELISA反应的最佳反应条件：包被温度37℃,包被时间1 h,竞争时间0.5 h,包被质量浓度1μg/mL,抗体稀释度1∶32 000。在此条件下建立标准曲线。该方法对沙丁胺醇的检测线性范围为0.1~128μg/L,IC50为1.35μg/L,最低检测限（LOD）为0.2μg/L,添加回收率83.8%~89.7%,变异系数均小于11%。采用该方法检测喂药动物尿液中的沙丁胺醇残留,特异性高,适用于猪尿中沙丁胺醇残留的初步筛选。 展开更多

关键词 沙丁胺醇 ELISA 优化 应用

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2013年河南省猪伪狂犬野毒感染血清学调查 被引量：40

6

作者 解伟涛 乔松林 +5 位作者 王寅彪 郝慧芳 梁跃 张桂悦 郭成留 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期66-70,共5页

伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性... 伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性率31.3%,猪场阳性率83.6%。种猪群带毒率高,育肥阶段伪狂犬病毒感染情况尤其严重。但一些生产管理较好的规模化猪场通过采取强化免疫,不断补入阴性后备种猪,加强生物安全等综合措施,成功防控了伪狂犬疫情。本研究对于了解当前河南省伪狂犬疫情,制订正确的防控策略提供了依据。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 感染 血清学调查

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黄曲霉毒素的危害及检测方法研究进展 被引量：15

7

作者 王磊 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 邓瑞广 职爱民 张改平 孙亚宁 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第2期123-127,共5页

黄曲霉毒素(AFT)是迄今发现的毒性最强的一类生物毒素,有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多种形式,对人和动物有强烈的毒性,为对AFT的检测工作提供方便,特对AFT的危害及目前的检测方法进行了综述。

关键词 黄曲霉毒素 危害 检测方法

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猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化 被引量：13

8

作者 王秋霞 张美英 +5 位作者 张改平 王选年 宁长申 鲁琨 张龙现 菅复春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期59-63,共5页

研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基... 研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.2mmol/L的IPTG和200mmol/L的氨苄青霉素在32℃过夜诱导培养,pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白表达量最大,表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的33%。SDS-PAGE表明pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白大小约为33 kDa,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与猪囊尾蚴多克隆抗体起特异性反应,并获得最大产量的融合蛋白。为研究其在猪囊尾蚴病检测中的应用价值奠定了基础。 展开更多

关键词 猪囊尾蚴 排泄分泌抗原 Ts8B1蛋白 原核表达

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脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响 被引量：11

9

作者 冯丽丽 张丽萍 +4 位作者 张改平 乔松林 田晓辉 万博 王秋霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期106-109,共4页

研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，... 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。 展开更多

关键词 脂多糖 猪肺泡巨噬细胞 白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-Α

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胶体金免疫层析快速检测技术及其在水产养殖业中的应用前景 被引量：10

10

作者 王蔚芳 李青梅 +1 位作者 郭军庆 雷霁霖 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期113-118,共6页

建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸... 建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸,被认为是当前最快捷、高敏感的一种免疫学检测技术。该项技术真正实现了快速简易检测靶目标,并已在畜牧业中得到普及应用,成为当前畜禽病害早期防控的最有效方法之一。本文就该项技术在畜牧兽医领域的研究进展、应用现状、发展前景进行了介绍、分析和讨论,旨在为水产养殖动物病害的早期诊断提供借鉴,以期获得一种适用于水产动物病害的、专用的快速检测新技术和新产品。 展开更多

关键词 胶体金 免疫层析 病害检测 水产养殖

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6×His-tag在抗菌肽表达纯化中的应用及其对抗菌肽活性的影响 被引量：8

11

作者 牛明福 李翔 +2 位作者 邢广旭 张红梅 宫强 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第12期121-124,共4页

为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低... 为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低防御素的抑菌活性,反而有稍微的增强趋势。结果表明,6×His-tag可用于抗菌肽的融合表达且不影响其活性,为抗菌肽的表达纯化提供了一个更简便有效的方法。 展开更多

关键词 6×His—tag 抗菌肽 表达纯化 抑菌活性 热酸稳定性

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免疫层析试纸检测技术研究进展 被引量：9

12

作者 王寅彪 刘肖 +1 位作者 李青梅 郭军庆 《河南科技大学学报（医学版）》 2017年第3期236-240,共5页

目的探讨免疫层析试纸检测在即时检测中的研究现状及未来的发展方向和应用价值。方法参阅国内外发表的文献,综述免疫层析试纸在抗原、抗体、半抗原检测领域的应用及利用新纳米材料提高检测敏感度的设计策略。结果传统的免疫层析试纸主... 目的探讨免疫层析试纸检测在即时检测中的研究现状及未来的发展方向和应用价值。方法参阅国内外发表的文献,综述免疫层析试纸在抗原、抗体、半抗原检测领域的应用及利用新纳米材料提高检测敏感度的设计策略。结果传统的免疫层析试纸主要以胶体金作为示踪物利用竞争法或夹心法对半抗原、抗原和抗体等进行检测,但存在敏感度不足及定量检测受限等问题,结合不同纳米材料进行新型试纸研发将有助于克服这些缺陷,向更高敏感性、定量、多联的检测方向发展。结论免疫层析试纸是进行即时检测和现场检测的重要工具,未来可用于对大规模群体实施检测,获取大数据,建立疾病或食品安全预警评价信息平台。 展开更多

关键词 免疫色谱法 免疫层析试纸 综述

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新霉素单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定 被引量：8

13

作者 刘宣兵 滕蔓 +4 位作者 张改平 杨艳艳 邓瑞广 侯玉泽 杨继飞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期80-83,共4页

用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株... 用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株,用体内诱生腹水法制备NEOmAb;对NEOmAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,成功制备了BSA-NEO人工抗原;筛选出1E9、4E8、1G1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶2.56×103、1∶1.28×103、1∶5.12×103,腹水效价分别为1∶5.12×105、1∶2.56×105、1∶1.02×106,1G1亲和常数(Ka)为3.75×1010(L/mol);1G1株对NEO的IC50为2.57 ng/mL,NEO mAb对庆大霉素、链霉素、土霉素、环丙沙星、二氟沙星等无交叉反应。试验获得了抗NEO高价、敏感、特异的mAb,可用于NEO残留检测的免疫学试验。 展开更多

关键词 新霉素 单克隆抗体 免疫学特性

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沙拉沙星ELISA快速检测试剂盒的研制及性能鉴定 被引量：6

14

作者 刘儒彪 胡骁飞 +5 位作者 张改平 宋照军 王方雨 邓瑞广 刘璐 刘玺 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期189-194,共6页

利用已制备的高亲和力的抗沙拉沙星的单克隆抗体,研制沙拉沙星快速检测试剂盒,并对其性能进行鉴定。结果显示:研制的沙拉沙星试剂盒的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,相关线性方程为y=-0.384 8x+0.736 3,R2=0.990 1,IC50为4.11 n... 利用已制备的高亲和力的抗沙拉沙星的单克隆抗体,研制沙拉沙星快速检测试剂盒,并对其性能进行鉴定。结果显示:研制的沙拉沙星试剂盒的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,相关线性方程为y=-0.384 8x+0.736 3,R2=0.990 1,IC50为4.11 ng/m L,LOD为2.06 ng/m L。与其他药物的交叉反应率(CR%)均低于1%;鸡肝和鸡肉中添加平均回收率分别为85.3%和88.7%,且变异系数均小于15%;试剂盒在4℃条件下保存6个月后检测能力无显著变化。 展开更多

关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 ELISA试剂盒 快速检测

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植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：6

15

作者 胡骁飞 魏凤仙 +5 位作者 李青梅 职爱民 王方雨 孙亚宁 柴书军 付晓鹤 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期44-48,共5页

通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.0... 通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 015.86,3 593.19,3 610.40ng/mL,交叉反应率分别为2.38%,2.49%,2.78%,2.77%。说明成功筛选了杂交瘤细胞株,该细胞株能分泌抗植酸酶mAb,该植酸酶mAb对植酸酶亲和力高、特异性强、灵敏度好,为植酸酶ELISA检测试剂盒及试纸条研制奠定了基础。 展开更多

关键词 植酸酶 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA

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O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及功能鉴定 被引量：5

16

作者 杨苏珍 张改平 +5 位作者 鲍登克 乔松林 万博 樊剑鸣 职爱民 李学伍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期11-14,共4页

为获得具有免疫原性的FMDV VP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的... 为获得具有免疫原性的FMDV VP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果显示,在分子量约为45 ku处有1条明显的蛋白条带,且能被口蹄疫阳性血清识别,表达产物通过包涵体纯化后用透析法复性;ELISA检测结果显示,所复性的蛋白具有较高的活性。结果表明,FMDV VP1蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为开发诊断制剂和疫苗的研制打下基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 原核表达 蛋白复性

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禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白在水稻胚乳中的稳定、高效表达及活性鉴定 被引量：4

17

作者 赵翔玥 张二芹 +9 位作者 许倩茹 马凡舒 王雅楠 牛香香 李雪洋 张申立 张同旭 邓瑞广 张以芳 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期230-238,共9页

为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载... 为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA1300上;再通过电极法将pCAMBIA1300-HA导入到根癌农杆菌EHA105中;然后用农杆菌侵染TP309水稻愈伤组织;最后经潮霉素筛选、分化、生根、移栽至田间种植。利用CTAB法提取叶片基因组DNA,PCR鉴定T0阳性植株;利用Dot Blot和Western Blot检测HA蛋白在水稻胚乳中的表达;提取阳性的T1叶片DNA,通过荧光定量PCR方法筛选纯合植株;利用温汤杀雄剪颖授粉法,将含有HA蛋白的TP309与低谷蛋白水稻杂交;利用Western Blot检测杂交后的T3植株蛋白表达量;利用双抗夹心ELISA方法比较水稻源和昆虫表达HA蛋白的活性。结果显示,成功构建了中间载体pMP3-HA和植物表达载体pCAMBIA1300-HA,且pCAMBIA1300-HA成功导入到根癌农杆菌EHA105中;PCR检测到有66株植株的HA基因成功整合到水稻基因组;Dot Blot和Western Blot检测结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达;利用荧光定量PCR方法,107株T1中筛选到31株纯合植株;Western Blot检测结果表明,杂交后的HA蛋白表达量大幅度提高;双抗夹心ELISA结果证实,水稻胚乳表达的HA蛋白的活性高于杆状病毒-昆虫细胞。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2 HA蛋白 纯合子 水稻胚乳 活性鉴定

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恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性 被引量：5

18

作者 赵银丽 滕蔓 +3 位作者 邓瑞广 柴书军 刘庆堂 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第10期121-124,共4页

将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对... 将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。 展开更多

关键词 恩诺沙星 杂交瘤 单克隆抗体 免疫学特性

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猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展 被引量：3

19

作者 冯丽丽 张改平 +1 位作者 乔松林 张丽萍 《江西农业学报》 CAS 2009年第1期112-114,共3页

综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产... 综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产生缓慢。在PRRSV的免疫应答中,体液免疫和细胞免疫反应都很特别。 展开更多

关键词 PRRSV 细胞免疫 体液免疫 免疫调节 毒力变异 疫苗研究

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猪乙脑病毒分离株BSF．ZZ-1和BSF．ZZ-3在BHK-21细胞上的传代培养及E基因序列稳定性分析 被引量：3

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作者 胡博 滕蔓 +5 位作者 禹乐乐 罗俊 迟佳琪 宿靖伟 柴书军 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期71-76,共6页

为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V... 为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V)、E200(T→A)、E244(G→E)、E279(M→K)和E426(G→D),以及BSF.ZZ-3毒株的E244(G→E)、E255(F→L)、E285(M→L)、E368(L→S)和E497(N→S)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与疫苗株SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如BSF.ZZ-3的E279(M→K→M)出现反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。 展开更多

关键词 乙脑病毒 BSF.ZZ-1 BSF.ZZ-3 BHK-21细胞系 传代培养 E基因 序列分析

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