目的采用茎环-逆转录实时荧光定量PCR方法,鉴定高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织中差异表达的mircoRNAs(miRNAs),即miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p,并预测分析miRNAs调控的靶基因和功能,探讨胰岛素抵抗与差异表达的miRNAs的相关...目的采用茎环-逆转录实时荧光定量PCR方法,鉴定高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织中差异表达的mircoRNAs(miRNAs),即miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p,并预测分析miRNAs调控的靶基因和功能,探讨胰岛素抵抗与差异表达的miRNAs的相关性。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和高脂饲料诱导的胰岛素抵抗模型组,设计茎环引物和实时荧光定量PCR特异引物,建立茎环-逆转录SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p的表达。统计学分析小鼠miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p表达的差异。利用生物信息学软件预测miRNAs调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和涉及到的信号转导通路及其靶基因蛋白的相互作用。结果经实时荧光定量PCR鉴定分析,与对照组相比,胰岛素抵抗组小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690、miR-7a-5p表达下调(P<0.05)。生物信息学分析结果显示,有16种靶基因被两种差异表达的miRNAs调控,其中有8个靶基因可与4种以上的蛋白质相互作用,Rac1、Rhoa、Prkcz、Tgfbr2、Itch和Ube2d3蛋白位于网络的中心节点,且它们与胰岛素信号通路相关或存在交联。结论肝脏miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过调节靶基因的表达,影响了胰岛素信号通路的正常级联反应。展开更多
目的构建微小脲原体UP3-00235基因的原核表达载体,并对其编码蛋白质进行生物信息分析。方法利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因(片段大小为483bp)。使用限制性核酸内切酶双酶切UP3-00235基因和pGEX-6p-2...目的构建微小脲原体UP3-00235基因的原核表达载体,并对其编码蛋白质进行生物信息分析。方法利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因(片段大小为483bp)。使用限制性核酸内切酶双酶切UP3-00235基因和pGEX-6p-2载体质粒,室温下用T4连接酶连接2.5h,连接后转入大肠埃希菌感受态中,IPTG诱导GST-UP3-00235蛋白的表达,并对其进行生物信息学分析。结果成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00235重组质粒,测序后与NCBI中已录入的Ureaplasma parvum strain hebnu uu3序列进行比对,同源性100%。重组质粒转染大肠埃希菌后经IPTG诱导3h,表达出GST-UP3-00235融合蛋白,与预期大致相符。经生物信息学软件分析,UP3-00235基因编码蛋白质含有160个氨基酸,分子式为C823H1339N241O251S3,相对分子质量为18.73×103,等电点(PI)为9.43。二级结构中含有α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲,分别占59.38%、17.50%和23.12%。无β-转角和跨膜区域,但含有信号肽区域。高级结构分析显示,UP3-00235基因编码蛋白分子与蛋白库中3r3t.1蛋白的B链相似性高,为36.56%;结构及功能预测显示该蛋白为UU-554,rpS6,与其相邻的蛋白分别为rpS18和rpL9。结论成功构建了GST-UP3-00235原核表达载体,并诱导表达45×103的目的蛋白,生物信息学预测该蛋白含有信号肽,属于核蛋白家族,为进一步研究微小脲原体UP3-00235基因的功能奠定了基础。展开更多
文摘目的采用茎环-逆转录实时荧光定量PCR方法,鉴定高脂饲料诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏组织中差异表达的mircoRNAs(miRNAs),即miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p,并预测分析miRNAs调控的靶基因和功能,探讨胰岛素抵抗与差异表达的miRNAs的相关性。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和高脂饲料诱导的胰岛素抵抗模型组,设计茎环引物和实时荧光定量PCR特异引物,建立茎环-逆转录SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p的表达。统计学分析小鼠miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p表达的差异。利用生物信息学软件预测miRNAs调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和涉及到的信号转导通路及其靶基因蛋白的相互作用。结果经实时荧光定量PCR鉴定分析,与对照组相比,胰岛素抵抗组小鼠肝脏组织中miR-1897-3p、miR-690、miR-7a-5p表达下调(P<0.05)。生物信息学分析结果显示,有16种靶基因被两种差异表达的miRNAs调控,其中有8个靶基因可与4种以上的蛋白质相互作用,Rac1、Rhoa、Prkcz、Tgfbr2、Itch和Ube2d3蛋白位于网络的中心节点,且它们与胰岛素信号通路相关或存在交联。结论肝脏miR-1897-3p、miR-690和miR-7a-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过调节靶基因的表达,影响了胰岛素信号通路的正常级联反应。
