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经血源性子宫内膜间充质干细胞的分离、培养与鉴定 被引量：14
1
作者 周云帆 杨波 +8 位作者 胡祥 焦洪亮 周长辉 田毅 雷宁静 谷晨熙 许予明 戴建武 关方霞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第32期5952-5956,共5页
背景:目前用于干细胞研究的主要来源为胚胎干细胞和骨髓干细胞,但这两种来源都存在着部分局限性,因此需要寻找一种新型的干细胞以克服肿瘤形成的潜在性、标本来源的缺乏及伦理学的争议等弊端。目的:分离培养经血源性子宫内膜间充质干细... 背景:目前用于干细胞研究的主要来源为胚胎干细胞和骨髓干细胞,但这两种来源都存在着部分局限性,因此需要寻找一种新型的干细胞以克服肿瘤形成的潜在性、标本来源的缺乏及伦理学的争议等弊端。目的:分离培养经血源性子宫内膜间充质干细胞并进行鉴定。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离出人经血源性子宫内膜间充质干细胞,对细胞的形态及生长特性进行观察;采用流式细胞仪对细胞表面抗原CD29、CD44、CD34、CD45、HLA-ABC及HLA-DR进行表型鉴定;免疫细胞化学法测定经血源性子宫内膜间充质干细胞中nestin阳性细胞表达。结果与结论:应用Ficoll密度梯度离心法可以从女性月经血中分离培养出干细胞,约2周原代细胞达到80%～90%融合,细胞呈漩涡状、网状、辐射状。传代后能稳定生长,可见纤维样细胞形态为主导。流式检测结果显示,经血源性子宫内膜间充质干细胞表现出CD29强阳性,CD44阳性,CD34、CD45、HLA-DR阴性,低表达HLA-ABC。染色显示nestin抗原在经血源性子宫内膜间充质干细胞中有表达,约占经血源性子宫内膜间充质干细胞的(10.35±0.51)%。结果表明经血源性子宫内膜间充质干细胞表达间充质干细胞的标记物,具低免疫源性;经血源性子宫内膜间充质干细胞表达nestin抗原,为经血源性子宫内膜间充质干细胞在神经系统应用提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 经血 子宫内膜 间充质干细胞 表型鉴定 巢蛋白
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人脂肪间充质干细胞静脉移植修复脊髓损伤:相关因子及行为学评价 被引量：4
2
作者 乔晓俊 杨波 +10 位作者 关方霞 胡祥 杜英 张天祥 田毅 巴云涛 段小兵 邓晓辉 谷晨熙 雷宁静 王晓薇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第40期7458-7461,共4页
背景:研究证实脂肪间充质干细胞在体外经丹参等诱导剂诱导后可分化为神经元样细胞,因此有可能成为治疗脊髓损伤新的种子细胞。目的:探讨脂肪间充质干细胞尾静脉移植后,对急性闭合性脊髓损伤大鼠行为学及损伤脊髓组织中各因子表达的影响... 背景:研究证实脂肪间充质干细胞在体外经丹参等诱导剂诱导后可分化为神经元样细胞,因此有可能成为治疗脊髓损伤新的种子细胞。目的:探讨脂肪间充质干细胞尾静脉移植后,对急性闭合性脊髓损伤大鼠行为学及损伤脊髓组织中各因子表达的影响。方法:无菌条件下体外分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第4代,将细胞收集并制成浓度为1×109L-1细胞悬液。盐水对照组、细胞移植组大鼠建立脊髓损伤模型,造模成功后1周,细胞移植组经尾静脉注射1mL干细胞悬液,盐水对照组同法注射等体积的生理盐水,模型对照组不做任何处理。结果与结论:与模型对照组和盐水对照组比较,细胞移植组大鼠后肢运动功能明显恢复,BBB评分明显升高(P<0.05);胶质纤维酸性蛋白阳性表达明显减少(P<0.05),神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白的阳性表达均明显升高(P<0.05)。移植后3d及1周,在损伤区及临近的脊髓节段可见经荧光染料标记的脂肪间充质干细胞,主要聚集在受损伤脊髓节段1cm范围内,呈不均匀分布。提示急性闭合性脊髓损伤大鼠经尾静脉移植人脂肪间充质干细胞后,其行为学得到改善,受损脊髓节段局部神经元细胞分化明显增多,修复速度加快。 展开更多
关键词 尾静脉移植 BBB评分 胶质纤维酸性蛋白 神经元特异性烯醇化酶 巢蛋白 脊髓损伤 脂肪间充质干细胞
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静脉移植人脂肪间充质干细胞治疗大鼠颅脑损伤 被引量：4
3
作者 张天祥 杨波 +9 位作者 关方霞 胡祥 杜英 乔晓俊 田毅 巴云涛 段小兵 邓晓辉 谷晨熙 郑文迪 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期2551-2556,共6页
背景:动物实验及临床研究证实间充质干细胞对创伤性脑损伤具有一定的治疗作用。目的:观察脂肪间充质干细胞移植治疗急性创伤性脑损伤大鼠行为学及损伤脑组织中胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白的表达。方法:以自由落体... 背景:动物实验及临床研究证实间充质干细胞对创伤性脑损伤具有一定的治疗作用。目的:观察脂肪间充质干细胞移植治疗急性创伤性脑损伤大鼠行为学及损伤脑组织中胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白的表达。方法:以自由落体硬膜外撞击法制作SD大鼠脑损伤模型后随机分为3组:移植组于脑损伤48h时经尾静脉注射Brdu标记的成人脂肪间充质干细胞;对照组不作处理;生理盐水组于脑损伤48h时经尾静脉注射生理盐水。采用NSS评分法评价大鼠神经功能恢复情况;倒置显微镜观察脂肪间充质干细胞在损伤脑组织内的迁移情况;免疫组织化学法检测大鼠受损脑组织中胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白表达。结果与结论:移植组NSS评分明显低于对照组与生理盐水组(P<0.05)。在受损伤脑组织周围可发现经Brdu标记的脂肪间充质干细胞。移植组大鼠受损脑组织中胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶阳性表达率明显低于对照组与生理盐水组(P<0.05),且下降速度较快;巢蛋白表达明显高于对照组与生理盐水组(P<0.05)。证实脂肪间充质干细胞通过血脑屏障进入受损大鼠脑组织后,以上调巢蛋白基因的表达来发挥保护神经元、促进神经发育与再生的功能。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 创伤性脑损伤 尾静脉 细胞移植 NSS评分 胶质纤维酸性蛋白 神经元特异性烯醇化酶 巢蛋白
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人脐带Wharton’s jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用 被引量：3
4
作者 巴云涛 关方霞 +9 位作者 胡祥 杨波 杜英 张天祥 田毅 乔晓俊 王成春 谷晨熙 雷宁静 王晓薇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期3513-3517,共5页
背景：培养脐带源间充质干细胞过程中,细胞形态常易变得宽大不规则,传代不易贴壁,死亡率高,找到一个维持细胞稳定的方法是有必要的。目的：拟采用组织块培养法从人脐带Wharton’s jelly中分离培养间充质干细胞,观察碱性成纤维细胞生长... 背景：培养脐带源间充质干细胞过程中,细胞形态常易变得宽大不规则,传代不易贴壁,死亡率高,找到一个维持细胞稳定的方法是有必要的。目的：拟采用组织块培养法从人脐带Wharton’s jelly中分离培养间充质干细胞,观察碱性成纤维细胞生长因子对其生物学特性的影响。方法：采用组织块法分离培养和扩增脐带组织间充质干细胞,对照组用DMEM/F12培养基＋体积分数为10%胎牛血清培养,实验组用DMEM/F12培养基＋体积分数为10%胎牛血清＋20μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养。观察组织块游出细胞的时间和细胞形态,每隔3d或4d更换培养液,待细胞达到80%~90%融合时,用0.25%胰酶消化后,按1：2或1：3的比例传代。结果与结论：倒置显微镜下观察对照组中从8~10d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,实验组中从6~8d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,1周后可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,围绕组织块成旋涡状,前3代细胞形态及传代间隔时间两组基本相同;3代以后实验组细胞较对照组易于贴壁,传代死亡率低,生长曲线提示增殖能力强。流式细胞术分析两组细胞周期显示第3,6代70%以上的细胞处于G0/G1期,且第3,6代细胞均阳性表达CD29,CD44,弱表达HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR。结果提示采用组织块培养法可从人脐带Wharton’s jelly中分离出具有间充质干细胞特性的细胞,且碱性成纤维细胞生长因子能使细胞从组织块游出时间提前和有助于促使细胞贴壁,一定程度上维持细胞形态稳定性,提高增殖能力,并且不改变细胞的表面标志物表达。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 间充质干细胞 人脐带 Wharton’s JELLY 干细胞
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人脐带沃顿胶间充质干细胞对人外周血T淋巴细胞的免疫调节作用 被引量：2
5
作者 周长辉 田毅 +7 位作者 杨波 胡祥 焦红亮 周云帆 王成春 谷晨熙 雷宁静 关方霞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期2485-2491,共7页
背景:骨髓源性间充质干细胞具有低免疫原性和免疫调节作用,但有关人脐带沃顿胶间充质干细胞的免疫调节作用及其机制研究较少。目的:观察脐带沃顿胶间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞的免疫调节作用及机制。方法:从人脐带沃顿胶组织块... 背景:骨髓源性间充质干细胞具有低免疫原性和免疫调节作用,但有关人脐带沃顿胶间充质干细胞的免疫调节作用及其机制研究较少。目的:观察脐带沃顿胶间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞的免疫调节作用及机制。方法:从人脐带沃顿胶组织块培养中分离出间充质干细胞。将脐带沃顿胶间充质干细胞及脐带沃顿胶间充质干细胞培养上清分别与植物凝集素刺激下的人外周血T淋巴细胞共培养,多功能酶标仪测量脐带沃顿胶间充质干细胞及脐带沃顿胶间充质干细胞培养上清与植物凝集素刺激下的人外周血T淋巴细胞共培养72h后A值;ELISA试剂盒检测培养上清中转化生长因子β1、γ-干扰素的表达。结果与结论:沃顿胶间充质干细胞对植物凝集素刺激下的T淋巴细胞增殖有抑制作用,增殖抑制率为56%(P<0.01),沃顿胶间充质干细胞培养上清对植物凝集素刺激下的T淋巴细胞增殖也具有抑制作用,且这种抑制呈剂量依赖性。含50%沃顿胶间充质干细胞培养上清组和100%培养上清组的增殖抑制率分别为8.3%、27%(P<0.05);沃顿胶间充质干细胞能显著降低T淋巴细胞分泌的γ-干扰素(P<0.05);可分泌转化生长因子β1,沃顿胶间充质干细胞与T淋巴细胞共培养组的转化生长因子β1分泌量低于沃顿胶间充质干细胞单独培养组(P<0.05)。提示沃顿胶间充质干细胞及沃顿胶间充质干细胞培养上清对植物凝集素刺激下的T淋巴细胞增殖均有抑制作用,其作用机制可能与细胞间的接触及抑制T淋巴细胞分泌的γ-干扰素有关。 展开更多
关键词 沃顿胶间充质干细胞 T淋巴细胞 免疫调节 Γ-干扰素 转化生长因子Β1
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人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗转基因APP^+小鼠的机制 被引量：3
6
作者 王成春 杨波 +6 位作者 关方霞 李国栋 周长辉 周云帆 胡祥 谷晨熙 雷宁静 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期3471-3476,共6页
背景:研究发现APP基因与阿尔茨海默病发病密切相关。课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可以促进阿尔茨海默病APP+转基因小鼠的学习,记忆能力改善。目的:探讨人羊膜间充质干细胞尾静脉移植后,能否归巢到小鼠脑组织中,并分化... 背景:研究发现APP基因与阿尔茨海默病发病密切相关。课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可以促进阿尔茨海默病APP+转基因小鼠的学习,记忆能力改善。目的:探讨人羊膜间充质干细胞尾静脉移植后,能否归巢到小鼠脑组织中,并分化为相关的中枢神经细胞,治疗阿尔茨海默病。方法:无菌条件下体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代将细胞浓度调整为1×109L-1,经尾静脉注入0.5mL至细胞移植组转APP+基因小鼠体内;对照组经尾静脉注入同体积的生理盐水;正常组转APP-基因小鼠不给予任何干预措施。采用免疫组化方法检测、测定Brdu标记的人第3代羊膜间充质干细胞在小鼠脑组织中的表达,各组小鼠脑组织中GFAP、Nestin和NSE的表达。结果与结论:光镜下观察可见,移植组小鼠脑组织中大部分细胞核被染成蓝色,但有一些细胞核被染成棕色或褐色,Brdu呈阳性。与对照组相比,移植组小鼠脑组织中的GFAP增加了近4倍,表达显著增加,甚至超过正常组的表达(P<0.05);Nestin的表达则显著升高,增加了近10%,但是还比正常组低了近20%(P<0.05)。NSE的表达降低了近1/3,但仍高于正常组(P<0.05)。表明人羊膜间充质干细胞尾静脉移植治疗阿尔茨海默病可能是通过羊膜间充质干细胞归巢到转基因APP+小鼠脑组织中,并分化成中枢神经细胞的途径实现的。 展开更多
关键词 人羊膜间充质干细胞 转基因APP+小鼠 尾静脉移植 胶质纤维蛋白 巢蛋白 神经元特异性烯醇化酶
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人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞的共培养 被引量：2
7
作者 田毅 关方霞 +7 位作者 胡祥 杨波 杜英 周长辉 巴云涛 谷晨熙 雷宁静 王晓薇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1721-1728,共8页
背景:人脐带沃顿胶间充质干细胞满足了国际细胞治疗协会规定的间充质干细胞的特点,能够向骨、软骨、脂肪、肌肉、神经细胞诱导分化并支持其他干细胞的扩增,对免疫系统有良好的耐受性,对肿瘤有定向迁徙性。目的:观察人脐带沃顿胶间充质... 背景:人脐带沃顿胶间充质干细胞满足了国际细胞治疗协会规定的间充质干细胞的特点,能够向骨、软骨、脂肪、肌肉、神经细胞诱导分化并支持其他干细胞的扩增,对免疫系统有良好的耐受性,对肿瘤有定向迁徙性。目的:观察人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后,脑肿瘤干细胞的生物学变化。方法:以原位法培养人脐带沃顿胶间充质干细胞,以酶消化法培养人脑肿瘤组织脑肿瘤干细胞,以细胞传代法获取第3代细胞。应用不添加任何生长因子的无血清培养基将两种细胞在24孔板中进行直接共培养。第3,7天应用流式细胞术检测细胞CD133表达;应用免疫荧光法检测贴壁细胞巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达;将第3天离心所得的共培养上清液重悬第3代脑肿瘤干细胞并与正常培养悬浮的第3代脑肿瘤干细胞置入96孔板中,应用酶标仪检测两组细胞生长曲线的差异。结果与结论:两种细胞共培养后在倒置显微镜下可见脑肿瘤干细胞球随着培养时间的增加出现分解、贴壁、分化现象;贴壁的脑肿瘤干细胞免疫荧光染色胶质纤维酸性蛋白和巢蛋白均阳性。恶性程度高的脑肿瘤组织培养的脑肿瘤干细胞表达CD133量越高,而与沃顿胶间充质干细胞共培养后随着时间的变化均出现CD133表达量降低。共培养3d的上清液培养的脑肿瘤干细胞与正常培养基培养的脑肿瘤干细胞相比,增殖明显受到抑制。结果显示沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后可限制脑肿瘤干细胞表面标记物CD133的阳性率以及细胞增殖能力并促使其分化。 展开更多
关键词 共培养 脑肿瘤干细胞 CD133 沃顿胶间充质干细胞 人脐带
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改良法培养人牙髓间充质干细胞及其向神经样细胞的分化 被引量：1
8
作者 李远 关方霞 +6 位作者 李季 杨波 胡祥 杜英 谷晨熙 雷宁静 王晓薇 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第49期9239-9243,共5页
背景:应用改良组织原位培养法后,牙髓间充质干细胞的提取成功率显著提高,但鲜有文献报道其与酶消化法提取干细胞生物学特性的异同。目的:观察改良组织原位培养法与传统酶消化法所获得的牙髓间充质干细胞向神经样细胞分化上的差异。方法... 背景:应用改良组织原位培养法后,牙髓间充质干细胞的提取成功率显著提高,但鲜有文献报道其与酶消化法提取干细胞生物学特性的异同。目的:观察改良组织原位培养法与传统酶消化法所获得的牙髓间充质干细胞向神经样细胞分化上的差异。方法:将同一组织来源的标本随机分成两组,分别用改良的组织原位培养法及常规的酶消化法提取人牙髓间充质干细胞,通过免疫组化、流式细胞检测及RT-PCR等比较观察其生长情况、抗原表达及向神经样细胞分化能力。结果与结论:改良法原位培养组分离牙髓间充质干细胞与常规分离培养组分离的干细胞在形态学表现,抗原表达及神经向分化能力上无明显区别,但简化了操作流程,且所得细胞数量大。 展开更多
关键词 改良法 原位培养 干细胞 牙髓 神经分化
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