目的探索微量注射法以不同转基因载体转基因至损伤肌腱的转基因效率、分布和组织反应。方法用微量注射器将10μl携带增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因的pCMV—EGFP、pCAGGS—EGFP、AAV2-EGFP和AdS...目的探索微量注射法以不同转基因载体转基因至损伤肌腱的转基因效率、分布和组织反应。方法用微量注射器将10μl携带增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因的pCMV—EGFP、pCAGGS—EGFP、AAV2-EGFP和AdS-EGFP载体直接注射入鸡的损伤并缝合的趾深屈肌腱。在术后第3，7，14，21天分别取肌腱，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察肌腱内的EGFP表达量及分布，并将肌腱切片作HE染色后观察各不同载体在肌腱中引起的炎症反应。结果荧光显微镜下观测发现，注射4种转基因载体的肌腱，转染3d后即可见肌腱内有增强绿色荧光蛋白表达；在第7天时表达最明显；第14天时，各组表达增强绿色荧光蛋白表达量下降；21d时很少有表达增强绿色荧光蛋白的细胞。用微量注射器在腱段两点注射能保证近损伤肌腱内转染细胞均匀分布。注射AAV2-EGFP和AdS-EGFP的肌腱的增强绿色荧光蛋白明显多于质粒载体的增强绿色荧光蛋白，而AAV2-EGFP和Ad5-EGFP两组间无明显差异。HE染色发现质粒载体和AdS—EGFP对肌腱的组织反应较重，可见较多炎症细胞浸润，以淋巴细胞和中性粒细胞为主。注射AAV2-EGFP的肌腱炎症反应较轻。结论用微量注射器在腱段两点注射转基因载体能转染近损伤处的整个肌腱段的细胞。在研究的4种基因治疗方法中，AAV2和AdS在损伤肌腱中的转基因效率最强，在转基因后第7天表达最明显，而且AAV2引起的肌腱组织反应最轻。提示AAV2载体比AdS和质粒载体更有利于作为转基因治疗肌腱损伤的载体，微量注射载体是转基因至损伤肌腱的合适方法。展开更多
文摘目的探索微量注射法以不同转基因载体转基因至损伤肌腱的转基因效率、分布和组织反应。方法用微量注射器将10μl携带增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因的pCMV—EGFP、pCAGGS—EGFP、AAV2-EGFP和AdS-EGFP载体直接注射入鸡的损伤并缝合的趾深屈肌腱。在术后第3，7，14，21天分别取肌腱，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察肌腱内的EGFP表达量及分布，并将肌腱切片作HE染色后观察各不同载体在肌腱中引起的炎症反应。结果荧光显微镜下观测发现，注射4种转基因载体的肌腱，转染3d后即可见肌腱内有增强绿色荧光蛋白表达；在第7天时表达最明显；第14天时，各组表达增强绿色荧光蛋白表达量下降；21d时很少有表达增强绿色荧光蛋白的细胞。用微量注射器在腱段两点注射能保证近损伤肌腱内转染细胞均匀分布。注射AAV2-EGFP和AdS-EGFP的肌腱的增强绿色荧光蛋白明显多于质粒载体的增强绿色荧光蛋白，而AAV2-EGFP和Ad5-EGFP两组间无明显差异。HE染色发现质粒载体和AdS—EGFP对肌腱的组织反应较重，可见较多炎症细胞浸润，以淋巴细胞和中性粒细胞为主。注射AAV2-EGFP的肌腱炎症反应较轻。结论用微量注射器在腱段两点注射转基因载体能转染近损伤处的整个肌腱段的细胞。在研究的4种基因治疗方法中，AAV2和AdS在损伤肌腱中的转基因效率最强，在转基因后第7天表达最明显，而且AAV2引起的肌腱组织反应最轻。提示AAV2载体比AdS和质粒载体更有利于作为转基因治疗肌腱损伤的载体，微量注射载体是转基因至损伤肌腱的合适方法。
