胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子与相关细胞因子的检测及临床意义 被引量：24

1

作者 彭素芳 王胜军 +8 位作者 陈建国 戴晓莉 石燕 李雅贞 苏兆亮 薛渊 何志强 黄新祥 许化溪 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期185-189,共5页

目的了解胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的转录因子及其相关细胞因子的表达水平，探讨其在胃癌发展进程中的作用。方法收集57例胃癌患者、31例胃部良性疾病患者和40例健康志愿者的外周血，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR... 目的了解胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的转录因子及其相关细胞因子的表达水平，探讨其在胃癌发展进程中的作用。方法收集57例胃癌患者、31例胃部良性疾病患者和40例健康志愿者的外周血，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术，检测外周血单个核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录冈子RORγt和FoxP3mRNA的表达水平；采用酶联免疫吸附试验（ELISA），检测胃癌患者血浆中IL一17、IL-23、转化生长因子β（TGF一β）和IL一10的浓度。结果胃癌组FoxP3和RORγt／tmRNA的表达水平分别为2．349±0．491和0．794±0．304，明显高于健康对照组和良性疾病组（均P〈0．05），FoxP3／RORγt比值也高于健康对照组和良性疾病组（P〈0．05），而良性疾病组与健康射照组差异无统计学意义（P〉0．05）。中晚期胃癌组的FoxP3／RORγ／t比值明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。胃癌组血浆中IL一17、IL一23、TGF一β和IL一10的水平明显高于健康对照组（P〈0．05），中晚期胃癌组TGF一β和IL一10水平明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。结论胃癌患者存在高Th17和Treg细胞水平，且随着病程的进展Treg细胞仍维持强势，FoxP3／RORγt比值明显增高。监测胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子和相关细胞因子水平，有助于对病程的判断。 展开更多

关键词 胃肿瘤 RORΓT FOXP3 Th17细胞 TREG细胞

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T-bet、GATA3及相关因子的表达与胃癌及转移的相关性研究 被引量：11

2

作者 邱谷风 王锁英 +10 位作者 王胜军 马洁 毛朝明 朱蓓 杨敏 许小朋 陈建国 胡正军 邵启祥 黄新祥 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期798-802,共5页

目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术... 目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测55例胃癌患者及45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平,应用免疫组化法检测胃癌组织中p53的表达状况。结果:55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51%(28/55)、78%(43/55)、27%(15/55)、69%(38/55)。定量PCR结果显示,病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(P<0.01),而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(P<0.01)。T-bet与IFN-γ在病人体内的mRNA表达存在正相关性(P<0.01),正常人则没有。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(P<0.01和P<0.05),且在p53阳性的患者中,T-bet的表达率较低,而GATA3的表达率较高。结论:胃癌患者有明显Th2漂移现象,且p53的表达与T-bet的表达呈负相关。 展开更多

关键词 胃癌 TH1/TH2 细胞因子 转录因子 基因表达

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子宫内膜异位症患者血清IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的变化及意义 被引量：12

3

作者 左阳花 苏兆亮 +1 位作者 王胜军 许化溪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期883-885,889,共4页

目的观察子宫内膜异位症(EM)患者血清IL-4、IFN-γ、TGF-β和IL-17的表达水平,分析Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡状态并探讨其与子宫内膜异位症发生发展的关系。方法选取确诊为子宫内膜异位症的病例42例为研究对象,并以无子宫内膜异位症... 目的观察子宫内膜异位症(EM)患者血清IL-4、IFN-γ、TGF-β和IL-17的表达水平,分析Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡状态并探讨其与子宫内膜异位症发生发展的关系。方法选取确诊为子宫内膜异位症的病例42例为研究对象,并以无子宫内膜异位症的健康女性为对照组,采集其血清用ELISA法检测并比较IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的水平,计算IL-4/IFN-γ、TGF-β/IL-17的比值。结果子宫内膜异位症患者外周血IFN-γ、IL-17的水平均显著低于对照组(P<0.01),而IL-4和TGF-β均显著高于对照组(P<0.05)。IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17的比值都显著高于对照组(P<0.01),EM组Ⅲ～Ⅳ期患者的IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期的患者。结论 EM组患者外周血中Th1细胞相关的细胞因子IFN-γ和TH17细胞相关的IL-17水平均下降,而Th2和Treg细胞因子水平上升,且IL-4/IFN-γ和TGF-β/IL-17随病程的进展而显著升高,提示在子宫内膜异位症患者可能存在着Th1/Th2和TH17/Treg细胞的平衡失衡,且与病程发展紧密相关。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 IL-4/IFN-γ TGF-β/IL-17

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前言——免疫衰老与老年疾病 被引量：9

4

作者 许化溪 《实用老年医学》 CAS 2010年第3期179-180,共2页

关键词 免疫衰老 老年疾病 自身免疫性疾病 吞噬细胞 应答能力 免疫系统 接种疫苗 免疫应答

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重视老年疾病的免疫指标 被引量：7

5

作者 许化溪 苏兆亮 《实用老年医学》 CAS 2010年第3期195-199,共5页

关键词 免疫指标 老年疾病 自身免疫性疾病 机体免疫力 免疫应答 抗病能力 免疫状态 免疫防御

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急性髓系白血病患者外周血CD4^＋CD25^highFOXP3^＋调节性T细胞变化及临床意义 被引量：4

6

作者 吴朝阳 吴雅荣 +9 位作者 许化溪 王胜军 王法春 陈巧云 季勇慧 钱震 杨小飞 盛晓静 张永宁 钱军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期591-595,600,共6页

目的:观察急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)患者外周血中调节性T细胞(Regulatory Tcells,Treg细胞)的变化,探讨其在AML发病中的作用及临床意义。方法:应用流式细胞术检测31例初诊AML患者(初诊组)、23例经化疗取得完全缓... 目的:观察急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)患者外周血中调节性T细胞(Regulatory Tcells,Treg细胞)的变化,探讨其在AML发病中的作用及临床意义。方法:应用流式细胞术检测31例初诊AML患者(初诊组)、23例经化疗取得完全缓解患者(CR组)及20例健康人群(对照组)外周血CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞、CD4+FOXP3+T细胞占CD4+细胞的比例,同时还分析了外周血CD4+/CD8+比值、NK细胞及血清乳酸脱清酶(LDH)水平。结果:与对照组相比较,AML患者初诊组及CR组外周血CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞和CD4+FOXP3+T细胞均升高(P<0.01)。与初诊组相比较,CR组CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞无显著降低(P>0.05),CD4+FOXP3+T细胞明显下降(P<0.01)。CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞的升降与CD4+FOXP3+T细胞呈正相关(r=0.86;P<0.01)。CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞及CD4+FOXP3+T细胞比例与CD4+/CD8+比值呈负相关(r分别为-0.54、-0.52;P<0.01)、与NK细胞比例呈负相关(r分别为-0.41、-0.43;P<0.05),而与LDH水平呈正相关(r分别为0.51、0.57;P<0.05)。结论:CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞增多可能是AML患者免疫功能受抑的重要原因之一,其变化对于AML的预后判断有一定的意义。CD4+FOXP3+T细胞的作用类似于CD4+CD25highFOXP3+Treg细胞,其在AML疗效评价方面可能更有价值。 展开更多

关键词 T淋巴细胞 调节性 白血病 非淋巴细胞 急性 流式细胞术

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SELEX技术及Aptamer在小分子中的应用进展 被引量：5

7

作者 周成林 许化溪 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2011年第4期276-279,288,共5页

指数富集配基系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)是20世纪90年代初建立的一项筛选技术。近年来,随着对其研究的不断深入和完善,此项技术逐渐成熟并应用于生物、医学等众多领域。从蛋白质... 指数富集配基系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)是20世纪90年代初建立的一项筛选技术。近年来,随着对其研究的不断深入和完善,此项技术逐渐成熟并应用于生物、医学等众多领域。从蛋白质等生物大分子到食品添加剂等生物小分子的检测,都得到充分应用。正因具有库容量大、靶分子范围广、亲和力高、特异性强等众多优势,为其在出入境检验检疫食品添加剂、生物恐怖因子等检测中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 指数富集配基系统进化技术 适配体 小分子 出入境 检验检疫

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鲍曼不动杆菌的外膜囊泡和外排泵在耐药中的作用 被引量：2

8

作者 程建军 Dinesh Kumar Kesavan +1 位作者 阴晴 许化溪 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第6期723-726,共4页

多重耐药鲍曼不动杆菌的院内感染日益增多,严重影响临床住院患者尤其是重症患者治疗的总体效果。多重耐药鲍曼不动杆菌感染目前已成为临床抗感染治疗的难题,其耐药机制复杂多样,该文拟就细菌外膜囊泡,及其与外排泵的关系做简要综述。

关键词 鲍曼不动杆菌 耐药 外排泵 微囊泡

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Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响 被引量：3

9

作者 杨恒 何志强 +7 位作者 赵银霞 王楷文 郑东 苏兆亮 仝佳 马洁 王胜军 许化溪 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期643-648,共6页

目的观察Toll样受体8（TLR8）在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达，探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法，检测13种肿瘤细胞系中TLR8mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2（COX-2... 目的观察Toll样受体8（TLR8）在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达，探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法，检测13种肿瘤细胞系中TLR8mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2（COX-2）、Bcl-2和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平；采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察；采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HeLa细胞的增殖状态。结果与其他肿瘤细胞株相比，HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高，达703．7±20．6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0．1、0．5和1．0μg／ml的CL075分别作用于HeLa细胞48h后，G2／M＋s期细胞所占的比例逐渐增高，其中1．0μg／mlCL075作用组G2／M＋S期细胞所占的比例最高，达（57．67±1．73）％，明显高于空白对照组[（39．02±2．33）％，P〈0．01]。经不同浓度的CL075处理后，HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比，无明显改变（P〉0．05）；但经顺铂处理后，凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。MTT法检测结果显示，与空白对照组比较，CL075作用于HeLa细胞48和72h后，HeLa细胞的增殖能力明显增强（P〈0．01）。CIA）75作用于宫颈癌HeLa细胞24和48h后，COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高（P〈0．05）。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号，可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 Toll样受体8 宫颈肿瘤 HELA细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1RORγ／t和白细胞介素-17表达水平的检测及临床意义 被引量：3

10

作者 石燕 王胜军 +10 位作者 陈建国 薛渊 何志强 周成林 郑东 杨恒 李雅贞 仝佳 苏兆亮 邵启祥 许化溪 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期147-150,共4页

目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血高迁移率族蛋白1（HMGB1）及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平，同时分析其与C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）和类风湿因子（RF）的关系，初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及... 目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血高迁移率族蛋白1（HMGB1）及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平，同时分析其与C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）和类风湿因子（RF）的关系，初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及其与Th17的关系。方法收集80例RA患者外周血标本，其中静止期32例、活动期48例，健康志愿者50名。采用实时荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中HMGB1、RORγt和白细胞介素（IL）-17的mRNA水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆HMGB1、IL-17、IL-23的蛋白浓度，采用单因素方差分析和Spearillan相关分析进行统计学处理。结果RA患者PBMC中HMGB1、RORγt和IL一17mRNA的表达水平均高于健康对照组（P〈0．05），且活动期[HMGB1（0．424±0．262）pg／ml，RORγt（0．34±0．25）pg／ml，IL-17（1．42±0．38）pg／ml]明显高于静止期（R0．01）。血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白水平也显示类似的结果，RA组明显高于健康对照组（P〈0．05），且与CRP、ESR、RF呈正相关（P〈0．05）。结论检测RA患者外周血HMGB1和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子水平，有助于探讨HMGB1和IL-17在RA发病过程中的病理生理作用，也为寻找RA的治疗靶点提供了新的思路。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 高迁移率族蛋白类 白细胞介素17

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人外周血CD8^+T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达 被引量：2

11

作者 李雅贞 王胜军 +5 位作者 石燕 戴晓莉 彭素芳 苏兆亮 邵启祥 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-110,共4页

目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;... 目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG30℃诱导4h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定。结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1248bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白。 展开更多

关键词 RUNX3基因 CDNA克隆 RT—PCR 原核表达

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DNA疫苗佐剂的研究进展 被引量：1

12

作者 陈建国 许化溪 《中华疾病控制杂志》 CAS 2009年第1期87-90,共4页

近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷。DNA疫苗作为第3代新型疫苗越来越受到人们的关注,DNA疫苗的佐剂也随之引起研究者们的广泛兴趣。本文就几种有效的增强DNA疫苗效力的策略和机制作了简要综述,并对DNA疫苗针对性佐剂的研究前... 近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷。DNA疫苗作为第3代新型疫苗越来越受到人们的关注,DNA疫苗的佐剂也随之引起研究者们的广泛兴趣。本文就几种有效的增强DNA疫苗效力的策略和机制作了简要综述,并对DNA疫苗针对性佐剂的研究前景进行了展望。 展开更多

关键词 疫苗 DNA 佐剂 免疫

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转染T-bet基因的人胃癌SGC-7901细胞分泌IFN-γ的作用 被引量：2

13

作者 邱谷风 王锁英 +8 位作者 王胜军 邵启祥 马洁 杨敏 许小朋 毛朝明 苏兆亮 黄新祥 许化溪 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期606-609,619,共5页

采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重... 采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重组腺相关病毒（rAAV—eGFP-T—bet）；（2）用rAAV-eGFP—T-bet感染SGC-7901细胞后，约30％～40％的细胞出现绿色荧光。对被感染细胞进行RT—PCR，扩增出1670bp的T-bet，并经Westernblot证实；（3）转染后的细胞测得388bp的IFN-γ目的条带和IFN-γ蛋白的表达。由此表明，人T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV—eGFP—T-bet，可成功转染SGC-7901，并致使转染细胞分泌IFN-γ。为进一步开展T-bet基因干预治疗肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 T-BET基因 基因克隆 重组质粒 腺相关病毒载体 IFN-Γ

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CpG-ODN对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞T-bet表达的影响 被引量：2

14

作者 王锁英 许化溪 +8 位作者 杨敏 许小朋 邱谷风 李国民 张贇健 马洁 眭建 姜旭淦 胡嘉波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1035-1039,共5页

目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,... 目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,分别应用RT-PCR和Western blot检测CpG-ODN刺激前后患儿PBMC的T-bet mRNA和蛋白表达情况,以ELISA检测PBMC培养上清IFN-γ的变化,同时设立26例健康婴儿对照组。结果:与正常对照组比较,喘支患儿PBMC表达T-bet mRNA及蛋白明显减少(P<0.05),应用CpG-ODN刺激后,两组小儿PBMC表达T-bet均显著上调,但产生IFN-γ无明显增多,对照序列ODN对T-bet表达及IFN-γ的分泌无明显影响。相关分析表明,喘支患儿T-bet mRNA与IFN-γ分泌呈正相关(r=0.57,P<0.01),CpG-ODN刺激后,二者相关性明显下降(r=0.19,P>0.05)。结论:T-bet在喘支患儿PB-MC中表达减少,提示T-bet表达缺陷参与了喘支的免疫病理,B型CpG-ODN作为一种免疫调节剂,可有效上调T-bet的表达,但不能诱导IFN-γ的产生。 展开更多

关键词 CPG-ODN 喘息 支气管炎 T-BET

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鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)的表达与纯化 被引量：1

15

作者 王慧璇 蔡伟 +2 位作者 程建军 王胜军 许化溪 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第8期887-890,896,共5页

目的利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)。方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET-28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/O... 目的利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)。方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET-28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导蛋白表达,对包涵体表达的蛋白进行变性复性处理,用镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果PCR扩增获得大小约862bp的目的片段,构建的重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,经双酶切鉴定成功插入目的基因片段,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导成功表达Omp33-36aa20-299 6His重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白分子质量单位约为31.5ku,经镍亲和纯化得到高纯度的重组Omp33-36。结论成功重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa),为进一步研究其对免疫系统的影响奠定了实验基础。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白Omp33-36 蛋白纯化

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耐热AKP在高GC含量细菌染色体杂交方法中的应用

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作者 黄新祥 许化溪 +7 位作者 王卉放 王胜军 王锁英 喻杰 夏圣 马洁 许文荣 江崎孝行 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2004年第416期465-469,共5页

目的应用耐热碱性磷酸酶(AKP)于微孔板DNADNA杂交技术,建立高G+C含量细菌染色体DNA同源性测定的特异性方法,为此类细菌的分类与鉴定奠定基础。方法细菌染色体DNA经分离纯化并变性后,直接非共价结合于固相微孔板中,与标有光标生物素的DN... 目的应用耐热碱性磷酸酶(AKP)于微孔板DNADNA杂交技术,建立高G+C含量细菌染色体DNA同源性测定的特异性方法,为此类细菌的分类与鉴定奠定基础。方法细菌染色体DNA经分离纯化并变性后,直接非共价结合于固相微孔板中,与标有光标生物素的DNA探针进行杂交。借助抗生物素蛋白与生物素的特异性结合,通过与板上带有生物素的杂交体作用,使得链霉亲和素连接的耐热AKP固定于板上,根据底物加入后的酶促反应强度,定量判读杂交结果。结果微孔板中1μg/孔DNA的包被浓度与25～50ng/孔的生物素探针呈现较为理想的杂交结果,pH95TrisHcl缓冲液系耐热AKP的最佳作用条件。应用该法于高G+C含量的分枝杆菌种间染色体同源性分析表明,方法具有敏感、特异、简便等优点。结论耐热AKP应用于微孔板定量杂交,可不受较高杂交和测定温度的影响,适用于高G+C含量的结核杆菌等分枝杆菌属以及假单胞菌属的定性检测和同源性的定量分析。 展开更多

关键词 耐热AKP 定量杂交 细菌

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去甲雄三烯醇酮的化学修饰及其免疫原性的构建

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作者 周成林 苏兆亮 +3 位作者 朱卫华 王胜军 李平 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第3期234-238,共5页

目的:制备去甲雄三烯醇酮(又称群勃龙,trenbolone,TR)抗体以建立TR特异性检测方法。方法:TR与琥珀酸酐反应生成TR-半琥珀酸酯(TR-HS),采用混合酸酐法和对乙基-N,N-二甲基丙基碳二亚胺(EDC)法将TR-HS与牛血清蛋白(BSA)偶联制备其偶联物;... 目的:制备去甲雄三烯醇酮(又称群勃龙,trenbolone,TR)抗体以建立TR特异性检测方法。方法:TR与琥珀酸酐反应生成TR-半琥珀酸酯(TR-HS),采用混合酸酐法和对乙基-N,N-二甲基丙基碳二亚胺(EDC)法将TR-HS与牛血清蛋白(BSA)偶联制备其偶联物;质谱、核磁共振分析偶联结果;免疫家兔并用双向免疫扩散和ELISA检测抗血清效价,判断偶联物的免疫原性。结果:经质谱鉴定显示,所获得的修饰物TR-HS相对分子质量为370;核磁共振分析表明,各吸收峰与理论相符;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱分析表明,TR-BSA相对分子质量明显增加、紫外最大吸收峰漂移;TR与BSA混合酸酐法和EDC法偶联比分别为1∶18和1∶12;混合酸酐法偶联物免疫家兔获得的抗血清效价ELISA测得TR特异性抗体效价为1∶320 000;双向免疫扩散测得的抗血清效价为1∶16。结论:成功制备了具有明显免疫原性的TR-BSA偶联物,为TR单克隆抗体的制备和建立TR残留量的快速检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 去甲雄三烯醇酮 半抗原修饰 偶联 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定

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作者 何志强 薛渊 +8 位作者 石燕 杨恒 赵银霞 王楷文 周成林 王胜军 邵启祥 焦志军 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期17-20,共4页

目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模... 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。 展开更多

关键词 远红荧光蛋白HcRed 树突状细胞系2.4 原核表达

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肿瘤特异性单克隆抗体与酵母β-葡聚糖联合用于抗瘤免疫治疗的研究进展 被引量：1

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作者 刘晶晶 Lacey Gunn +2 位作者 Richard Hansen 严俊 沈培 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第4期365-368,共4页

关键词 β-葡聚糖 肿瘤特异性 单克隆抗体 免疫治疗 抗瘤作用 酵母 联合用 receptor

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转录因子Hlx修饰树突状细胞系DC2.4的功能研究

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作者 周成林 苏兆亮 +4 位作者 朱金连 何志强 王胜军 李平 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期274-277,共4页

目的:在鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时表达Th1特异的核转录Hlx,探讨该转录因子对树突状细胞系DC2.4的功能的影响。方法:含有Hlx基因全部编码序列的真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx通过脂质体转染的方法转入DC细胞,转染效率应用FACS鉴定;Hlx基... 目的:在鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时表达Th1特异的核转录Hlx,探讨该转录因子对树突状细胞系DC2.4的功能的影响。方法:含有Hlx基因全部编码序列的真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx通过脂质体转染的方法转入DC细胞,转染效率应用FACS鉴定;Hlx基因在DC中表达情况应用RT-PCR和Real-time PCR检测。转染48 h后,分别从细胞因子,表面分子,吞噬功能,单向混合淋巴细胞反应方面对DC功能进行探讨。结果:真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx成功转入DC细胞,转染率可高达60%;在树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可以有效的增进成熟标志CD80,CD86,MHCII分子的表达,减弱DC的吞噬功能,IL-12表达量增加,但同时却高表达IL-10,TGF-β并表现为可抑制淋巴细胞增殖。结论:在小鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可有效地促进DC2.4的成熟,但是在功能方面多表现为调节性DC的功能。 展开更多

关键词 IL-10 Hlx 树突状细胞 调节性DC

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