姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响 被引量：11

1

作者 熊二梦 龚爱华 +2 位作者 金洁 邵根宝 彭琬昕 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第1期1-4,共4页

目的探讨姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响。方法将不同浓度的姜黄素、顺铂单独或联合处理体外培养的人肝癌细胞HepG2。24h后,MTT法检测细胞活性,免疫荧光观察细胞内自噬泡形成情况,Western blot检测自噬、凋亡... 目的探讨姜黄素联合顺铂对人肝癌细胞HepG2增殖、自噬和凋亡的影响。方法将不同浓度的姜黄素、顺铂单独或联合处理体外培养的人肝癌细胞HepG2。24h后,MTT法检测细胞活性,免疫荧光观察细胞内自噬泡形成情况,Western blot检测自噬、凋亡相关蛋白表达。结果与姜黄素或顺铂单药给药组相比,姜黄素联合顺铂更能明显抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05),促进微管相关蛋白LC3的点状分布,提高自噬相关蛋白Beclin1的表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05),降低凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比值(P<0.05),并激活半胱天冬氨酸蛋白酶3(P<0.05)。结论姜黄素联合顺铂可诱导HepG2细胞的自噬和凋亡,显著提高HepG2细胞对顺铂的敏感性。 展开更多

关键词 姜黄素 顺铂 肝细胞肝癌 细胞凋亡 细胞自噬

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外源一氧化氮对胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响 被引量：8

2

作者 桑建荣 陈永昌 +1 位作者 邵根宝 黄晓佳 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期21-25,共5页

目的:探讨外源一氧化氮(nitric oxide,NO)对胃癌细胞生长和增殖的影响。方法:应用MTT法评价NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-argininemethyleste... 目的:探讨外源一氧化氮(nitric oxide,NO)对胃癌细胞生长和增殖的影响。方法:应用MTT法评价NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-argininemethylester,L-NAME)对胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用,RT-PCR和Western印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达,FCM法检测细胞周期的变化。结果:SNP使细胞周期发生变化,与对照组比较,S期细胞减少,G0/G1期细胞增多,细胞由G0/G1期进入S期延缓;SNP抑制SGC-7901细胞的生长,PCNA mRNA、PCNA蛋白和Caspase-3蛋白表达降低。而NOS抑制剂L-NAME预处理逆转了SNP的这种作用。结论:NO可抑制胃癌细胞生长和增殖,加速细胞凋亡。 展开更多

关键词 胃肿瘤 一氧化氮供体 一氧化氮合酶 增殖细胞核抗原 细胞周期

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NO对胃癌细胞系AGS增殖的影响 被引量：4

3

作者 桑建荣 陈永昌 +1 位作者 邵根宝 黄晓佳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第2期166-170,共5页

背景与目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)参与机体内的多种生理和病理反应,它作为重要的生物介质在肿瘤发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究的热点。本实验通过研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对胃癌细胞系AGS的作用,探... 背景与目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)参与机体内的多种生理和病理反应,它作为重要的生物介质在肿瘤发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究的热点。本实验通过研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对胃癌细胞系AGS的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖的影响。方法:应用MTT法评价SNP对细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期的变化,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的mRNA基因表达,Westernblot检测PCNA和caspase-3蛋白的表达。结果:SNP可剂量依赖性地抑制AGS细胞的生长,100、500、1000、1500、2000μmol/L SNP处理24h,细胞生长抑制率分别为(2.02±2.96)%、(10.82±2.21)%、(18.95±3.35)%、(26.88±2.54)%、(42.57±1.27)%;SNP可以使细胞周期发生变化,与对照组比较100、500、1000、1500、2000μmol/LSNP处理24h,S期细胞分别减少2.29%、7.8%、11.34%、20.49%、23.6%,G0/G1期细胞分别增加3.33%、9.3%、13.46%、21.37%、24.73%(P<0.05);随着SNP剂量增加和作用时间延长,PCNAmRNA和蛋白表达逐渐降低;caspase-3mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化。结论:NO能抑制AGS细胞的生长和增殖,诱导细胞的凋亡,其作用呈显著的浓度依赖性。 展开更多

关键词 胃肿瘤 一氧化氮 AGS细胞 增殖

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丙烯腈对鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响 被引量：3

4

作者 端礼荣 邢光伟 王卉芳 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期331-332,共2页

目的研究丙烯腈(ACN)对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响。方法16 d的大鼠胚胎脊髓组织经取材、分离、消化后作原代细胞培养,加入不同浓度的ACN 0.01,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0,200.0μg/ml,从细胞形态学及细胞计数角度观察细胞生长... 目的研究丙烯腈(ACN)对大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响。方法16 d的大鼠胚胎脊髓组织经取材、分离、消化后作原代细胞培养,加入不同浓度的ACN 0.01,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0,200.0μg/ml,从细胞形态学及细胞计数角度观察细胞生长与分化过程,同时测定蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性并与对照组进行比较。结果各组ACN明显抑制胚胎脊髓神经细胞的增殖和分化,集落形成率明显减少,细胞体积小;其半数分化抑制剂量(ICD50)为29μg/ml,半数存活抑制剂量(ICV50)为42μg/ml,均显示剂量-效应关系。结论ACN能抑制胚胎脊髓神经细胞增殖和分化,可能与其能抑制蛋白质合成,并引起脂质过氧化有关。 展开更多

关键词 丙烯腈 胚胎脊髓神经细胞 细胞增殖 分化 脂质过氧化

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一氧化氮抑制胃癌细胞系SGC-7901增殖及C-FOS和C-JUN表达

5

作者 桑建荣 陈永昌 +1 位作者 邵根宝 黄晓佳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第10期1072-1075,共4页

目的探讨一氧化氮(NO)对胃癌细胞系SGC-7901增殖的影响及其机制。方法MTT法测定细胞的生长,RT-PCR和W estern印迹法检测C-FOS和C-JUN的mRNA和蛋白表达。结果硝普钠(SNP)抑制SGC-7901细胞的生长(P<0.05),并呈剂量和时间性降低C-FOS和C... 目的探讨一氧化氮(NO)对胃癌细胞系SGC-7901增殖的影响及其机制。方法MTT法测定细胞的生长,RT-PCR和W estern印迹法检测C-FOS和C-JUN的mRNA和蛋白表达。结果硝普钠(SNP)抑制SGC-7901细胞的生长(P<0.05),并呈剂量和时间性降低C-FOS和C-JUNmRNA及蛋白表达。结论NO可能通过下调C-FOS和C-JUN的表达而抑制胃癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 胃肿瘤 一氧化氮 SGC-7901细胞系

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Tet-off诱导表达Egr-1HEK293稳定细胞株的建立和鉴定 被引量：1

6

作者 彭琬昕 孟凡力 +1 位作者 金洁 龚爱华 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2014年第2期118-121,共4页

目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracyclin... 目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株。方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株。蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力。结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高。流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞。结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响。 展开更多

关键词 Tet-off调控系统 早期生长反应蛋白1 稳定细胞株 多西环素

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医学遗传学教学模式的改革与实践 被引量：2

7

作者 金洁 龚爱华 +1 位作者 邵根宝 程建军 《现代医药卫生》 2010年第18期2868-2869,共2页

医学遗传学是一门横跨基础医学和临床医学的桥梁课程,是医学科学领域中十分活跃的前沿学科。但由于其涵盖的范围较广泛,不仅涉及经典遗传学的基本原理、分子生物学的基本研究方法．

关键词 医学遗传学 教学模式 改革 医学科学领域 分子生物学 临床医学 基础医学

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去甲斑蝥素通过线粒体信号转导途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡 被引量：9

8

作者 李先茜 邵世和 +5 位作者 韩晓红 范忠泽 孙珏 殷佩浩 孙燕妮 高虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期611-615,共5页

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细... 目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细胞色素c、caspase-3、AIF、Bcl-2和Bax的表达。结果:NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。用AnnexinⅤ/PI双染色法检测SMMC-7721细胞,随NCTD的剂量增加,细胞凋亡率也增加,呈剂量依赖性。用流式细胞仪检测细胞膜电位,随NCTD的剂量增加,线粒体膜电位也随之下降。应用Western blot analysis方法检测,NCTD可诱导caspase-3和AIF的活化及线粒体细胞色素c释放到胞浆中。并随NCTD的剂量增加,Bax的表达量上升,而Bcl-2的表达量下降。结论:NCTD能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,并可通过内源性线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 去甲斑蝥素 肝癌 细胞凋亡 线粒体信号转导途径

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病原生物学课程建设与教学改革的探索 被引量：8

9

作者 邵世和 张文 +3 位作者 申红星 王晓春 王华 徐惠娟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第4期317-318,共2页

病原生物学是一门以病原生物为研究对象的医学基础课程,也是知识更新和发展最为迅速的课程之一。在总结多年教学经验的基础上,根据各专业学生的培养目标和培养要求,结合本校实际情况,对不同专业学生的病原生物学课程的授课内容、教学模... 病原生物学是一门以病原生物为研究对象的医学基础课程,也是知识更新和发展最为迅速的课程之一。在总结多年教学经验的基础上,根据各专业学生的培养目标和培养要求,结合本校实际情况,对不同专业学生的病原生物学课程的授课内容、教学模式、教学方法及教学手段进行了综合改革,并取得了一定的成效。 展开更多

关键词 病原生物学 精品课程 探索

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血吸虫感染不同阶段吡喹酮治疗对宿主肝纤维化的影响 被引量：6

10

作者 徐会娟 朱阳泉 +3 位作者 帅连云 徐长根 李浩 梅舜瑜 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第8期599-601,共3页

目的探讨日本血吸虫感染宿主不同阶段吡喹酮治疗对肝纤维化影响,为临床选择适宜的治疗时机提供依据。方法建立日本血吸虫感染家兔模型,在感染的急性期、慢性期和晚期用吡喹酮治疗,采用ELISA法检测针对可溶性虫卵抗原(soluble egg antige... 目的探讨日本血吸虫感染宿主不同阶段吡喹酮治疗对肝纤维化影响,为临床选择适宜的治疗时机提供依据。方法建立日本血吸虫感染家兔模型,在感染的急性期、慢性期和晚期用吡喹酮治疗,采用ELISA法检测针对可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)产生的IgG抗体;放免法检测血清中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)含量;ELISA法检测血清TGF-β1水平;RT-PCR检测肝组织中的TGF-β1mRNA水平;制作肝组织病理切片,观察肝脏的病理改变。结果与慢性期和晚期比较,在感染急性期经吡喹酮治疗后,宿主血清抗SEA IgG、HA、TGF-β1水平以及肝组织TGF-β1mRNA表达水平显著降低,肝脏纤维化程度降低及肝组织结构明显改善。结论吡喹酮在血吸虫感染急性期的疗效优于慢性期和晚期,且有预防肝纤维化形成的作用。 展开更多

关键词 血吸虫 日本 纤维化 吡喹酮 透明质酸

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定量PCR检测类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch基因表达 被引量：3

11

作者 焦志军 王文红 +3 位作者 陈蕾 尤海燕 汪毅 李晶 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2007年第6期534-536,544,共4页

目的:探讨4种Notch受体基因在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核中的表达及其意义。方法:采用免疫磁珠分离纯化RA患者外周血T,B及单核细胞,定量PCR检测4种Notch受体mRNA表达水平,并与正常人进行比较。结果:与正常人相比,RA患者T细胞No... 目的:探讨4种Notch受体基因在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核中的表达及其意义。方法:采用免疫磁珠分离纯化RA患者外周血T,B及单核细胞,定量PCR检测4种Notch受体mRNA表达水平,并与正常人进行比较。结果:与正常人相比,RA患者T细胞Notch 2,Notch 3及Notch 4表达量增加(P<0.01),其中Notch 3主要表达于活化的T细胞,而Notch 1水平在两者间未见明显差异。B细胞及单核细胞4种Notch受体表达均较低,且两者间亦未见显著差异。结论:RA患者存在Notch基因表达的改变,一群高表达Notch 3基因的活化T细胞可能在RA疾病机制中具有重要的意义。 展开更多

关键词 定量PCR Notch受体 类风湿性关节炎

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去甲斑蝥素通过c—Jun氨基末端激酶通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡 被引量：4

12

作者 李先茜 邵世和 +5 位作者 韩晓红 范忠泽 孙珏 殷佩浩 高虹 孙燕妮 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期146-147,共2页

斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分，曾试用于治疗原发性肝癌，能够缓解患者病情。但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用。近年来陆续合成了不良反应少的同类药物，如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺... 斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分，曾试用于治疗原发性肝癌，能够缓解患者病情。但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用。近年来陆续合成了不良反应少的同类药物，如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺及甲基斑蝥胺等。去甲斑蝥素（NCTD）构型与斑蝥素相似，仅1、2位无甲基.去除斑蝥素的2个甲基后，泌尿系统刺激基本消失，大量的体内外研究结果表明， 展开更多

关键词 斑蝥素 癌 肝细胞 细胞凋亡 信号转导通路

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胶原诱导的关节炎小鼠脾脏髓样抑制细胞检测 被引量：2

13

作者 段唐海 王文红 +5 位作者 刘美红 王瑞 张莹莹 陈艳 熊御云 焦志军 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期94-98,共5页

研究髓样抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)在II型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠发病过程中的动态变化。使用牛II型胶原建立DBA/1J小鼠CIA模型并进行关节炎指数评分。在CIA诱导的第21d、28d、35d... 研究髓样抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)在II型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠发病过程中的动态变化。使用牛II型胶原建立DBA/1J小鼠CIA模型并进行关节炎指数评分。在CIA诱导的第21d、28d、35d、40d和45d,采用流式细胞术检测CIA小鼠及正常对照小鼠脾脏中CD11b+Gr-1+的MDSC比例动态变化。采用流式细胞术检测第35dCIA小鼠和正常小鼠脾脏MDSC表面CD80、CD86和MHCⅡ分子的表达水平。结果发现,CIA造模小鼠脾脏中MDSC比例在第二次免疫时(第21d)即明显增高,至第28d达最高峰(P均<0.05)。CIA诱导第35天脾脏中MDSC比例和绝对细胞数较正常对照组明显升高(P<0.05)。CIA小鼠脾脏MDSC CD80和CD86的表达水平高于正常对照组(P<0.05),但MHCⅡ的表达水平在模型组与正常对照组间无显著差别(P>0.05)。MDSC在CIA小鼠造模和发病过程中呈现规律性的变化,提示MDSC可能参与了类风湿关节炎发展的免疫病理过程。 展开更多

关键词 胶原诱导的关节炎 髓样抑制细胞 CD80 CD86 MHCⅡ

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小鼠Th17细胞体外诱导扩增的实验研究 被引量：2

14

作者 王文红 邵世和 +4 位作者 焦志军 陈艳 尤海燕 陈蕾 汪毅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期245-246,共2页

近年来的研究发现Th17细胞在多种自身免疫性疾病、炎症及肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用。由于此类细胞以分泌的胞内细胞因子为标记，所以目前尚没有较好的分离纯化方法。本实验探讨了体外扩增Th17细胞的实验方法及影响因素，以期为... 近年来的研究发现Th17细胞在多种自身免疫性疾病、炎症及肿瘤的发生与发展中发挥重要的作用。由于此类细胞以分泌的胞内细胞因子为标记，所以目前尚没有较好的分离纯化方法。本实验探讨了体外扩增Th17细胞的实验方法及影响因素，以期为进一步研究其表型与功能奠定基础。 展开更多

关键词 TH17细胞 实验研究 体外诱导扩增 自身免疫性疾病 小鼠 胞内细胞因子 分离纯化方法 影响因素

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幽门螺杆菌OipA、HopX、HopW基因的检测及序列分析 被引量：2

15

作者 王华 邵世和 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第35期3710-3714,共5页

目的:检测幽门螺杆菌(H pylori)标准菌株NCTC11637及临床菌株外膜蛋白的三种基因(OipA、HopX、HopW及比较NCTC11637中三种基因与国际标准菌株(26695和J99)的同源性,为Hpylori疫苗的筛选提供实验依据.方法:运用PCR方法检测标准菌株NCTC 1... 目的:检测幽门螺杆菌(H pylori)标准菌株NCTC11637及临床菌株外膜蛋白的三种基因(OipA、HopX、HopW及比较NCTC11637中三种基因与国际标准菌株(26695和J99)的同源性,为Hpylori疫苗的筛选提供实验依据.方法:运用PCR方法检测标准菌株NCTC 11637及27例临床菌株中的三种基因,并对其进行测序.运用GenBank比较与国际标准菌株(26695和J99)的同源性.结果:在标准菌株NCTC11637中检测到三种基因.在27例临床菌株中,有10例检测到OipA基因.在23例中检测到HopX基因,在27例中均检测到HopW基因.NCTC11637中OipA基因与26695和J99的核苷酸序列同源性分别为95.38%、94.60%,均低于两株国际标准菌株的同源性95.50%.HopX基因的同源性分别为94.90%和95.15%,同样低于两株国际标准菌株的同源性96.49%.HopW基因与26695和J99的同源性分别为97.38%、94.90%,两株标准菌株的同源性为95.20%.结论:在标准菌株NCTC11637和临床菌株中检测到三种基因.H pylori HopW基因核苷酸序列具有一定的保守性. 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白 OipA基因 HopX基因 HopW基因 聚合酶链式反应

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小鼠骨髓及脾脏髓源抑制细胞Notch分子表达分析 被引量：1

16

作者 刘美红 段唐海 +5 位作者 王文红 张莹莹 王瑞 刘强 熊御云 焦志军 《现代免疫学》 CSCD 北大核心 2014年第4期285-289,共5页

为研究Notch信号途径相关分子在小鼠髓源抑制细胞(MDSC)中表达水平,以CD11b+和Gr-1+为表面标记,采用流式细胞术分选出小鼠骨髓与脾脏MDSC,进而采用定量RT-PCR技术检测Notch 4种受体、5种配体及其下游靶基因Hes-1的mRNA表达水平。结果发... 为研究Notch信号途径相关分子在小鼠髓源抑制细胞(MDSC)中表达水平,以CD11b+和Gr-1+为表面标记,采用流式细胞术分选出小鼠骨髓与脾脏MDSC,进而采用定量RT-PCR技术检测Notch 4种受体、5种配体及其下游靶基因Hes-1的mRNA表达水平。结果发现,骨髓中CD11b+Gr-1+细胞(MDSC)比例远高于脾脏,达总细胞的46%,而脾脏MDSC仅占总细胞的4.4%左右。骨髓与脾脏MDSC表达Notch四种受体分子,四种受体分子在两种MDSC中表达水平未见明显差异(P>0.05)。骨髓MDSC Dll4表达水平明显高于脾脏MDSC(P<0.001),而Jagged1、Jagged2和Dll1三种配体分子在来源于两种淋巴器官的MDSC中表达水平未见明显差异(P>0.05),二者均不表达Dll3。与骨髓MDSC相比,脾脏MDSC Hes-1mRNA表达明显增高(P<0.01)。结果提示Notch信号途径可能在MDSC成熟与迁移中发挥一定的作用。 展开更多

关键词 Notch受体 NOTCH配体 NOTCH信号 髓源抑制细胞

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无需抽提RNA直接定量血浆microRNAs的实时荧光定量PCR方法的建立与评价 被引量：1

17

作者 张莹莹 焦志军 +5 位作者 段唐海 刘美红 王文红 陈艳 刘强 熊御云 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期119-122,共4页

目的建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs（miRNAs）作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA—K，抗凝静脉血并分离血浆，取7．5μl血浆用等量含2．5％（体积比）Tween20的缓冲液处理后进行逆转... 目的建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs（miRNAs）作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA—K，抗凝静脉血并分离血浆，取7．5μl血浆用等量含2．5％（体积比）Tween20的缓冲液处理后进行逆转录及PCR，建立血浆miRNAs直接检测法。用该方法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR--4634表达水平，评估其扩增的特异性和扩增效率。同时与传统的抽提RNA定量PCR检测法的阈值循环数（cq）值进行比较并作相关性分析。另外，应用建立的血浆直接检测法，比较了混合引物和单个引物逆转录法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR-4634结果的一致性。结果血浆直接检测法融解曲线显示健康人血浆标本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634扩增产物分别在8l、83、84．2℃时出现单一峰，无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆直接检测法检测miR．24—1—5p扩增效率为1．1，同一份样本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634这3种基因的扩增曲线平行，说明扩增斜率一致。直接检测法检测miR-4634的cq值为30．98±0．17，高于RNA抽提法的29．22±0．21，差异有统计学意义（t=8．475，P〈0．01），而2种方法检测u6（直接检测法32．43±0．08，RNA抽提法32．57±0．06；t=1．354，P〉0．05）、miR-24—1-5p（直接检测法20．73±0．14，RNA抽提法21．064-0．21；t=1．749，P〉0．05）结果差异均无统计学意义。2种方法检测U6（r=0．8605，P〈0．01）、miR．24—1—5p（r=0．7289，P〈0．05）和miR-4634（r=0．7485，P〈0．01）结果具有较好的相关性。混合引物和单个引物逆转录后PCR的cq值之间无明显差异。结论建立的血浆直接检测法只需对血浆标本进行简单的预处理，并可使用混合引物进行逆转录定量PCR，具有操作简便、检测成本低等优点，值得进一步推广应用。（中华 展开更多

关键词 微RNAS 实时聚合酶链反应 血浆

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幼年特发性关节炎患儿CD4^+ CD_(25)^(high)调节性T细胞检测的意义 被引量：1

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作者 王文红 焦志军 +1 位作者 王华 王晓春 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期661-662,共2页

目的探讨CD4+ CD25high调节性T细胞在幼年特发性关节炎(JIA)发病机制中的作用。方法利用流式细胞术检测JIA患儿外周血和关节液中T细胞表面CD4和CD25表达,并利用胞内染色技术检测细胞内转录因子FoxP3。同时检测年龄和性别相匹配的7例健... 目的探讨CD4+ CD25high调节性T细胞在幼年特发性关节炎(JIA)发病机制中的作用。方法利用流式细胞术检测JIA患儿外周血和关节液中T细胞表面CD4和CD25表达,并利用胞内染色技术检测细胞内转录因子FoxP3。同时检测年龄和性别相匹配的7例健康体检儿童外周血作为正常对照。结果JIA患儿关节液中高表达CD25的CD4+ T细胞(CD4+CD25high)明显多于JIA和正常人外周血,而JIA外周血中数量又少于正常人外周血。CD4+ CD25highT细胞表达高水平的FoxP3。结论JIA患儿关节局部天然调节性T细胞增多,可能与其发病机制有关。 展开更多

关键词 FoxP3 关节炎 幼年特发性 天然调节性T细胞

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幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统HP0527-C基因的克隆表达及其生物学功能的初步研究 被引量：1

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作者 母润红 邵世和 +5 位作者 马方 王华 崔蕾蕾 钟桥 鞠小丽 董苏荣 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期82-88,共7页

为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 hp0527-c基因,探讨其生物学功能。设计引物扩增,T-A克隆,测序正确后构建表达载体pET-28a-hp0527-c,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后以Ni2+-NTA柱获得纯度为98%重组蛋... 为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 hp0527-c基因,探讨其生物学功能。设计引物扩增,T-A克隆,测序正确后构建表达载体pET-28a-hp0527-c,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后以Ni2+-NTA柱获得纯度为98%重组蛋白。经Western blot鉴定正确后,免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体;将重组蛋白作用于BGC-823细胞,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达增高;同时用MTT法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响,结果表明其活性呈现一定量的时间和剂量依赖性。已成功克隆了HP0527-C的重组蛋白,初步探讨了其与细胞之间的相互作用,为进一步阐明H.pylori致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 克隆表达 细胞因子 细胞增殖

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C-MYC蛋白在EB病毒阳性的胃癌组织中表达增强

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作者 章广玲 周天戟 朱丽华 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第10期1175-1176,共2页

关键词 C-MYC蛋白 胃癌组织 表达增强 EB病毒 DNA肿瘤病毒 EBV感染 C-MYC基因 癌基因激活

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