多药耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子及插入序列遗传标记研究 被引量：113

1

作者 苏兆亮 糜祖煌 +5 位作者 孙光明 陈建国 郑东 刘嫣方 Sandoghchian Siamak 许化溪 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期3085-3087,共3页

目的探讨多耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子、插入序列等遗传原件之间的关系。方法 K-B法进行药物敏感试验,PCR进行转座子、插入序列遗传标记检测,并测序。结果临床分离的鲍氏不动杆菌对12种常见抗菌药物耐药率分别为头孢噻肟78.9%、头... 目的探讨多耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子、插入序列等遗传原件之间的关系。方法 K-B法进行药物敏感试验,PCR进行转座子、插入序列遗传标记检测,并测序。结果临床分离的鲍氏不动杆菌对12种常见抗菌药物耐药率分别为头孢噻肟78.9%、头孢他啶63.1%、头孢吡肟78.9%、头孢西丁100.0%、亚胺培南73.7%、美罗培南73.7%、氨苄西林/舒巴坦78.9%、阿莫西林/克拉维酸78.9%、阿米卡星52.6%、庆大霉素57.8%、环丙沙星78.9%、四环素78.9%;转座子tnp513和插入序列遗传标记ISaba1、IS26检出率分别为47.4%、78.9%、47.4%。结论多药耐药鲍氏不动杆菌的耐药性与转座子和插入序列遗传标记有一定的关系。 展开更多

关键词 多耐药鲍氏不动杆菌 转座子 插入序列

原文传递

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究 被引量：33

2

作者 苏兆亮 糜祖煌 +5 位作者 孙光明 陈建国 郑东 刘嫣方 Sandoghchian Siamak 许化溪 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期3449-3451,共3页

目的探讨多耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)β-内酰胺酶基因存在状况及其膜孔蛋白编码基因ompK36在其耐药中的作用。方法应用PCR检测20种β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白编码基因ompK36,并用MEGA4.1对ompK36进行分子进化分析。结果 15株MDR-KPN共... 目的探讨多耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)β-内酰胺酶基因存在状况及其膜孔蛋白编码基因ompK36在其耐药中的作用。方法应用PCR检测20种β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白编码基因ompK36,并用MEGA4.1对ompK36进行分子进化分析。结果 15株MDR-KPN共检出TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为66.7%、60.0%、6.7%、13.3%、13.3%、20.0%;而膜孔蛋白编码基因ompK36均检测到,经测序比对均存在突变。结论 15株MDR-KPN耐β-内酰胺类药物至少与产β-内酰胺酶和同时伴有膜孔蛋白ompK36突变相关。 展开更多

关键词 多药耐药肺炎克雷伯菌 Β-内酰胺酶 ompK36基因

原文传递

刍议科学文献在免疫学多媒体理论教学中的应用 被引量：9

3

作者 夏圣 邵启祥 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期945-946,954,共3页

免疫学以研究生物体免疫系统的组织结构、生理病理条件下的免疫应答规律及机制,以及应用免疫学进行诊断与防治,是医学生的重要主干课程之一。因而,学好免疫学对于临床医学生在学习后续临床课程,

关键词 免疫学 理论教学 科学文献 应用 多媒体 临床医学生 组织结构 免疫系统

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nuocytes相关因子在规律血液透析治疗2型糖尿病肾病患者中的免疫学意义 被引量：7

4

作者 路萍 徐芸芸 +1 位作者 许化溪 苏兆亮 《检验医学与临床》 CAS 2018年第1期22-26,共5页

目的以nuocytes相关因子为切入点,探讨2型糖尿病肾病发展及并发症形成可能的免疫学机制。方法选取2013年11月至2015年1月在江苏大学附属人民医院人工肾规律血液透析治疗的糖尿病肾病患者30例(K_0组),该院同期门诊健康体检人员30例作健... 目的以nuocytes相关因子为切入点,探讨2型糖尿病肾病发展及并发症形成可能的免疫学机制。方法选取2013年11月至2015年1月在江苏大学附属人民医院人工肾规律血液透析治疗的糖尿病肾病患者30例(K_0组),该院同期门诊健康体检人员30例作健康对照组(N_0组),Ficoll-泛影葡胺密度离心法分离外周血单个核细胞;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测60例受试对象外周血单个核细胞(PBMC)中nuocytes相关的视黄酸受体相关孤核受体α(RORα)、白细胞介素-17受体B(IL-17RB)、IL-33受体T_1/ST_2、细胞因子白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)的mRNA水平;同时对Th1/Th2特征性细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4),转录因子T-bet和GATA-3mRNA表达水平进行检测。所有入选对象随访6个月。结果随访期间K_0组中9例男性患者因呼吸道感染性疾病住院,设为K_1组,未发现其他新出现的并发症,其他未出现呼吸道感染性疾病的21例设为K_2组,在N_0组中选择与其年龄、性别相比配的健康体检者作为N_1组。与N_0组比较,K0组患者PBMC中IL-5mRNA表达水平升高(P<0.05),其余因子mRNA表达水平两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。K_1组与N_1组相比,相关孤体受体α(RORα)、IL-17RB、T_1/ST_2、IL-5、IL-13、IL-4mRNA表达水平较高,T-bet mRNA表达水平较低;K_1组与K_2组相比,RORα、IL-17RB、IL-13及GATA3mRNA表达水平升高。结论规律血液透析治疗的糖尿病肾病患者体内存在慢性致敏状态;nuocytes极化状态的出现和进展可能参与了规律血液透析治疗的糖尿病肾病男性患者呼吸道感染性疾病的发生。 展开更多

关键词 nuocytes 糖尿病肾病 血液透析 感染

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糖尿病肾病患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性增强参与代谢综合征多组分聚集状态形成 被引量：7

5

作者 路萍 徐芸芸 +1 位作者 苏兆亮 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期820-825,共6页

目的探讨终末期2型糖尿病肾病(DN)患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性及其与代谢综合征(MS)多组分聚集状态的关系。方法募集维持性血透治疗超过3个月病情稳定的DN患者30例、单纯2型糖尿病(T2D)患者30例和健康对照30例。Ficoll-泛影葡胺密... 目的探讨终末期2型糖尿病肾病(DN)患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性及其与代谢综合征(MS)多组分聚集状态的关系。方法募集维持性血透治疗超过3个月病情稳定的DN患者30例、单纯2型糖尿病(T2D)患者30例和健康对照30例。Ficoll-泛影葡胺密度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测ILC2相关的视黄酸受体相关孤核受体α(RORα)、白细胞介素17受体B(IL17RB)、IL-33受体T1/ST2、IL-5、IL-13的mRNA水平;流式细胞术检测PBMC中ILC2的百分比;ELISA检测血浆IL-5、IL-13水平;计算3组受试对象MS发生率、组分个数;Pearson法分析各组分与ILC2相关因子的相关性。结果单纯T2D和DN患者的腰围、空腹血糖、收缩压、舒张压、甘油三酯及MS组分数均升高,MS发生率分别为46.67%和86.67%。DN患者ILC2的比例增加,ILC2相关转录因子RORα及膜受体T1/ST2的mRNA表达水平均升高,且与IL-5和IL-13的表达水平呈正相关。此外,DN患者PBMC的IL-13 mRNA水平与收缩压、血浆总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平呈正相关,ILC2膜受体T1/ST2与低密度脂蛋白-胆固醇水平也呈正相关。结论维持性血透治疗的DN患者比单纯T2D患者存在更明显的MS多组分聚集现象,ILC2活性增强可能通过对血压及脂质代谢的影响参与糖尿病肾病患者MS状态的形成。 展开更多

关键词 Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2) 糖尿病肾病 血液透析 代谢综合征

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医学本科留学生医学免疫学全英文教学的探索与实践 被引量：7

6

作者 夏圣 邵启祥 许化溪 《基础医学教育》 2014年第3期224-226,共3页

医学本科留学生教育的开展对于国内的医学教育体系带来了冲击与挑战,也对医学免疫学的全英文教学提出了较高的要求。从自我培养与外聘教授相结合的师资队伍的组织与建设、渐进式参与教学和听课、评课制度的建立以及授课内容和教学法的... 医学本科留学生教育的开展对于国内的医学教育体系带来了冲击与挑战,也对医学免疫学的全英文教学提出了较高的要求。从自我培养与外聘教授相结合的师资队伍的组织与建设、渐进式参与教学和听课、评课制度的建立以及授课内容和教学法的准备等方面介绍了江苏大学在医学免疫学全英文教学中的一些探索,并对授课过程中所面临的问题与困境做了简要的讨论。 展开更多

关键词 医学免疫学 教学方法 留学生

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临床免疫学和免疫检验的实验课程改革 被引量：7

7

作者 王胜军 仝佳 +3 位作者 苏兆亮 李良菊 邵启祥 许化溪 《检验医学与临床》 CAS 2007年第10期1004-1005,共2页

临床免疫学和免疫检验是医学检验专业的重要课程,实验教学作为课程教学的重要组成部分,在培养医学检验专业学生的实践能力和创新能力方面起着重要作用。近年来,对临床免疫学检验的实验教学内容进行了重新调整,在强化基础实验教学的同时... 临床免疫学和免疫检验是医学检验专业的重要课程,实验教学作为课程教学的重要组成部分,在培养医学检验专业学生的实践能力和创新能力方面起着重要作用。近年来,对临床免疫学检验的实验教学内容进行了重新调整,在强化基础实验教学的同时,提高综合实验的比例和质量;同时相应改进了实验教学方法和教学手段,充分利用现代化实验教学设备,穿插课堂讨论形式,收到了良好的教学效果。通过临床免疫学和免疫检验实验课程的改革,提高了学生的学习兴趣和学习能力。 展开更多

关键词 免疫学检验 实验教学 教学改革

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皮肌炎患者外周血CD4^+ T细胞中TGF-β1 mRNA表达及意义 被引量：4

8

作者 吴蔚 王胜军 +2 位作者 李遇梅 李雅贞 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第3期255-257,共3页

目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期... 目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4+T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果:活动期皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170?P<0.05?。CD4+T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关?r=0.67,P<0.05?。结论:活动性皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。 展开更多

关键词 皮肌炎 CD4^+T细胞 TGF-Β1

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人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：4

9

作者 秦伟 毛朝明 +4 位作者 王胜军 吴蔚 牟笑 许化溪 包丹霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期520-523,共4页

目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确... 目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在。用镍柱对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法和免疫组化染色对所得多克隆抗体的生物学特性进行鉴定。结果:成功表达及纯化了人ULBP3(aa30-171)重组蛋白。结果显示该多克隆抗体能够识别大肠癌细胞株COLO205表面表达的天然构象ULBP3分子,而且能与结直肠癌组织细胞的ULBP3分子结合。结论:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP3(aa30-171),并获得高纯度的人pQE30-ULBP3(aa30-171)重组蛋白;成功制备了兔抗人ULBP3分子的多克隆抗体。 展开更多

关键词 ULBP3 NKG2D 多克隆抗体

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皮肌炎患者外周血CD4^+ T细胞中TGF-β_1、IL-10 mRNA的表达及临床意义 被引量：4

10

作者 吴蔚 王胜军 +1 位作者 李遇梅 李雅贞 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第7期806-808,共3页

目的:检测活动期皮肌炎(DM)患者外周血CD4+T细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的表达以及血清肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1、IL-10在DM发病机制中的作用。方法:收集15例活动期DM患者和15例健康对照者外周血... 目的:检测活动期皮肌炎(DM)患者外周血CD4+T细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的表达以及血清肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1、IL-10在DM发病机制中的作用。方法:收集15例活动期DM患者和15例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4+T细胞,通过逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测出各组TGF-β1、IL-10表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1、IL-10表达与血清CK含量的相关性。结果:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10表达量显著高于健康对照,血清CK含量与CD4+T细胞TGF-β1表达量呈中度正相关。结论:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10 mRNA表达显著升高,可能与DM疾病发生有关。 展开更多

关键词 皮肌炎/免疫学 @CD4+T细胞 转化生长因子β/分析 白细胞介素10/分析 肌酸激酶/血液

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Graves病患者外周血单个核细胞GITR mRNA表达水平的变化和意义 被引量：3

11

作者 王海生 王胜军 +6 位作者 崔大伟 陈建国 柳迎昭 杨先知 史烨 仝佳 许化溪 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期276-279,共4页

目的探讨Graves病(GD)患者糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达水平的变化及意义。方法用实时荧光定量PCR法检测22例GD未治疗组、23例GD临床缓解组及18例健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)GITR mR-NA相对表达水平;用化学发... 目的探讨Graves病(GD)患者糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达水平的变化及意义。方法用实时荧光定量PCR法检测22例GD未治疗组、23例GD临床缓解组及18例健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)GITR mR-NA相对表达水平;用化学发光法测定各组血浆中甲状腺激素水平,并评价GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平与甲状腺激素水平的相关性。结果GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平明显低于临床缓解组和健康对照组(χ2=18.48,P<0.01;χ2=18.26,P<0.01),而GD临床缓解组与健康对照组差异无统计学意义(χ2=0.12,P>0.05)。GD未治疗组GITRmRNA相对表达水平与FT3、FT4水平均呈负相关(r=-0.509、r=-0.483,P均<0.05),而与TSH呈正相关(r=0.458,P<0.05)。结论GD的发生可能与GD患者体内GITR基因表达下调有关。 展开更多

关键词 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体 GRAVES病 实时定量PCR

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IL-17^+ γδT细胞 被引量：2

12

作者 汤新逸 王胜军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期817-819,共3页

IL-17是一种重要的炎症介质,最近研究显示,除了Th17细胞,γδT细胞也能够产生IL-17,并且比αβT细胞产生得更为迅速。与Th17细胞一样,γδT细胞产生IL-17的能力受多种因素影响,并和某些与IL-17相关的疾病有着密切联系,这对相关疾病的致... IL-17是一种重要的炎症介质,最近研究显示,除了Th17细胞,γδT细胞也能够产生IL-17,并且比αβT细胞产生得更为迅速。与Th17细胞一样,γδT细胞产生IL-17的能力受多种因素影响,并和某些与IL-17相关的疾病有着密切联系,这对相关疾病的致病机制有了新认识,也为这些疾病的治疗提供了新思路。现就近年来对γδT细胞产生IL-17能力的研究,以及这群细胞和疾病的关系进行简要综述。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 IL-17 感染 自身免疫性疾病 肿瘤

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胃癌患者外周血nuocytes相关因子的检测及其免疫病理意义 被引量：3

13

作者 别庆丽 吴玉敏 +7 位作者 杨慧健 应欣宇 汪汀 张盼 纪晓昀 苏兆亮 王胜军 许化溪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期41-44,共4页

目的检测转录因子维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)、细胞表面受体T1/ST2和IL-17RB以及IL-5和IL-13等细胞因子的表达水平;了解胃癌患者外周血中nuocytes细胞的极化状态,探讨其与胃癌发生... 目的检测转录因子维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)、细胞表面受体T1/ST2和IL-17RB以及IL-5和IL-13等细胞因子的表达水平;了解胃癌患者外周血中nuocytes细胞的极化状态,探讨其与胃癌发生发展的关系。方法常规Ficoll-泛影葡胺密度梯度离心法分离外周血单个核细胞;实时荧光定量PCR检测30例胃癌患者PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA表达水平。结果胃癌患者外周血PBMC中RORα、IL-17RB、T1/ST2、IL-5 mRNA表达水平明显高于健康对照组,而IL-13的表达水平则明显低于健康对照组。相关性分析结果表明,胃癌患者RORαmRNA水平与IL-17RB、T1/ST2、IL-5、IL-13 mRNA水平呈正相关。结论胃癌患者机体存在着nuocytes极化状态,可能是构成胃癌患者Th1/Th2细胞平衡失调的基础,也与MDSC、M2巨噬细胞参与的免疫抑制微环境有着密切的关系。 展开更多

关键词 RORα IL-17RB T1 ST2 Nuocytes 胃癌

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mGITRL真核表达质粒的构建及其在Lewis细胞中的表达 被引量：3

14

作者 胡正军 王胜军 +6 位作者 朱燕萍 鲍俊峰 仝佳 马洁 成军 孙长贵 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第2期107-110,共4页

目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定... 目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定表达细胞株。结果:构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,基因测序与GenBank中发表的序列完全一致,体外转染Lewis细胞,经G418筛选,体外传代30代以上,RT-PCR及流式细胞仪检测该细胞株稳定表达mGITRL。结论:成功构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,并在小鼠Lewis细胞中稳定表达,为进一步研究GITRL的生物学功能提供研究基础。 展开更多

关键词 GITRL 细胞转染 肿瘤

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人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：1

15

作者 王海生 王胜军 +7 位作者 崔大伟 陈建国 柳迎昭 杨先知 史烨 田洁 仝佳 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2009年第5期405-408,共4页

目的:建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat)mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素... 目的:建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat)mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性。应用该方法检测Graves病(Graves′disease,GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达。结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%。初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72,P<0.01)。结论:建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础。 展开更多

关键词 RORΓT 实时定量PCR SYBR GreenⅠ

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人GITR_(aa27-165)蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：2

16

作者 仝佳 王胜军 +6 位作者 陈君 毛朝明 杨云良 杨敏 胡正军 只棣媛 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期243-246,共4页

目的:表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白,制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法:利用PCR从pGEMT-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165... 目的:表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白,制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法:利用PCR从pGEMT-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过Profinity IMACNi-Charged Resin亲和层析柱进行纯化;纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果:构建了pQE30-hGITRaa27-165原核表达载体,原核蛋白hGI-TRaa27-165蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hGITRaa27-165蛋白,蛋白浓度为400mg/L,制备的抗hGITRaa27-165多抗效价高达1∶1.6×105,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论:获得高纯度hGITRaa27-165蛋白,并制备特异性pAb,将为进一步研究hGITR的生物学功能提供实验基础。 展开更多

关键词 hGITR 原核表达 多克隆抗体

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实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用 被引量：1

17

作者 杨先知 史烨 +11 位作者 柳迎昭 陈建国 田洁 刘艳 刘青玲 苏兆亮 仝佳 马斌 马洁 邵启祥 许化溪 王胜军 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第4期292-295,共4页

目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9，IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR，qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils，PB—MC），... 目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9，IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR，qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils，PB—MC），经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT—PCR方法检测IL-9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性，应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA表达水平。结果：建立了人IL-9的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r^2为0．995～0．998，熔解随线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）。结论：建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好，为进一步临床应用提供了实验基础。 展开更多

关键词 白细胞介素-9 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅠ

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小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定 被引量：2

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作者 王胜军 马洁 +5 位作者 马斌 毛朝明 仝佳 杨敏 邵启祥 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期731-733,736,共4页

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷... 目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。 展开更多

关键词 FOXP3 腺相关病毒 免疫调节

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老年支气管哮喘患者血浆中IL-9检测及临床意义 被引量：1

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作者 徐庆雷 王洪建 +3 位作者 胡礼仪 马斌 仝佳 陈建国 《现代检验医学杂志》 CAS 2010年第5期93-94,共2页

目的 检测老年支气管哮喘患者血浆中IL-9的水平,探讨IL-9在支气管哮喘发生发展中的意义.方法 收集老年支气管哮喘患者和健康对照外周血标本.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中IL-9和总IgE浓度.结果 老年支气管哮喘急性发作期患... 目的 检测老年支气管哮喘患者血浆中IL-9的水平,探讨IL-9在支气管哮喘发生发展中的意义.方法 收集老年支气管哮喘患者和健康对照外周血标本.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中IL-9和总IgE浓度.结果 老年支气管哮喘急性发作期患者血浆IL-9水平显著高于健康对照组（P〈0.05）,而临床缓解组与健康对照组差异无统计学显著性意义（P〉0.05）.老年支气管哮喘急性发作期患者血浆IL-9水平与总IgE浓度呈正相关.结论 老年支气管哮喘患者血浆中IL-9水平升高,与疾病的发生发展关系密切. 展开更多

关键词 支气管哮喘 白介素-9 酶联免疫吸附试验

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活动性皮肌炎CD4^＋CD25^＋CD127^10/-调节性T细胞的检测 被引量：1

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作者 吴蔚 王胜军 +3 位作者 李遇梅 尤海燕 毛朝明 许化溪 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期55-56,共2页

皮肌炎（DM）是一种自身免疫性结缔组织病。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）是存在于人胸腺和外周血中的一类具有免疫抑制作用的T细胞亚群，该细胞数量减少或者功能异常均可导致自身免疫性疾病的发生。转录因子Foxp3是Treg细胞的特征... 皮肌炎（DM）是一种自身免疫性结缔组织病。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）是存在于人胸腺和外周血中的一类具有免疫抑制作用的T细胞亚群，该细胞数量减少或者功能异常均可导致自身免疫性疾病的发生。转录因子Foxp3是Treg细胞的特征性检测分子。研究发现，表面标志CD127（IL-7αR）的表达与Foxp3呈负相关，可以代替Foxp3作为Treg细胞的检测标志。为研究Treg细胞在活动性DM患者发病机制中的作用，我们分别对17例活动性DM患者和正常人对照外周血中的CD4^＋CD25^＋CD127^10/-T细胞的百分比进行检测，同时与患者血清肌酸激酶（CK）含量进行相关性分析。并对其中7例住院患者给予糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗, 展开更多

关键词 CD4^+CD25^+调节性T细胞 活动性 皮肌炎 检测 自身免疫性结缔组织病 Treg细胞 Foxp3 自身免疫性疾病

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