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伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株的制备 被引量：15
1
作者 茅凌翔 朱超望 +1 位作者 许化溪 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2007年第2期145-149,共5页
目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基... 目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基因的缺损性同源性核苷酸片段。将此片段胶回收后并导入自杀质粒pG-MB151的BamHI位点,将阳性质粒用电转化导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为phoP基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的phoP基因缺失297个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 PHOP 基因缺陷变异 同源重组
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高渗应激早期伤寒沙门菌RpoE调节因子对基因表达的影响 被引量：2
2
作者 杜鸿 倪斌 +4 位作者 王敏 罗哲 谢新民 李安平 黄新祥 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期564-566,共3页
伤寒沙门菌是一种革兰阴性肠道致病菌,常通过污染的食物进入体内,可造成严重全身性感染[1-2].作为食源性致病菌,必须遭遇人体消化道的高渗环境,但目前对其克服高渗应激的具体机制尚不清楚.RpoE调节因子由rpoE基因编码,是肠杆菌科细菌中... 伤寒沙门菌是一种革兰阴性肠道致病菌,常通过污染的食物进入体内,可造成严重全身性感染[1-2].作为食源性致病菌,必须遭遇人体消化道的高渗环境,但目前对其克服高渗应激的具体机制尚不清楚.RpoE调节因子由rpoE基因编码,是肠杆菌科细菌中一个重要的σ因子,在大肠杆菌响应高渗应激时发挥着重要的作用[3],在伤寒沙门菌中也应当十分重要. 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 高渗环境 调节因子 基因表达 应激 严重全身性感染 早期 食源性致病菌
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伤寒沙门菌fljB∶∶lacZ变异株的制备 被引量：1
3
作者 朱超望 茅凌翔 +1 位作者 徐顺高 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第2期93-96,共4页
目的:为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。方法:采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、... 目的:为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。方法:采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、下游同源性DNA片段,并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体(pSV-β-galactosidase vector)的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMB151,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果:经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763 bp被3550 bp的lacZ片段替代。结论:成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 舻基因 Β-半乳糖苷酶基因 基因融合
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伤寒沙门菌fljA样基因表达载体的构建 被引量：1
4
作者 周丽萍 邹昕 +3 位作者 张伟利 徐顺高 许化溪 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期461-464,468,共5页
目的:进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制,系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能,构建含fljA样基因的表达载体并验证其表达。方法:根据fljA样基因两端序列设计引物,以z66抗原阳性伤寒沙门菌G IFU10007基因组为模板,通过PCR获得... 目的:进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制,系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能,构建含fljA样基因的表达载体并验证其表达。方法:根据fljA样基因两端序列设计引物,以z66抗原阳性伤寒沙门菌G IFU10007基因组为模板,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后,重组体转化至大肠杆菌JM109中诱导培养,并通过RT-PCR观察fljA样基因表达情况。结果:基因克隆和序列分析结果显示伤寒沙门菌fljA样基因被成功导入载体pET22b,RT-PCR结果提示大肠杆菌JM109可利用此重组载体进行fljA样基因表达。结论:成功获得能在大肠埃希菌中表达伤寒沙门菌fljA样基因的载体。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 fljA样基因 基因表达
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高渗条件下RpoE与RpoS调节因子共同影响伤寒沙门菌生长代谢
5
作者 周惠琴 谢小芳 +2 位作者 倪斌 王敏 杜鸿 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期265-269,共5页
目的了解RpoE和RpoS调节因子在高渗应激下是否共同调节伤寒沙门菌的代谢生长。方法运用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌rpoS／rpoE双缺失突变株，用PCR观察重组现象；以吸光度值（A。值）为纵坐标，培养时间为横坐标绘制生长... 目的了解RpoE和RpoS调节因子在高渗应激下是否共同调节伤寒沙门菌的代谢生长。方法运用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌rpoS／rpoE双缺失突变株，用PCR观察重组现象；以吸光度值（A。值）为纵坐标，培养时间为横坐标绘制生长曲线，观察细菌在高渗条件下的生存能力，分析其在对数生长早期（4h）和对数生长晚期（12h）的生长差异；利用伤寒沙门菌全基因组芯片分析技术，比较伤寒沙门菌野生株和各基因缺失突变株代谢相关基因在高渗应激下的表达差异，选择部分差异表达基因利用实时定量RT—PCR进一步验证。结果成功制备伤寒沙门菌rpoS／rpoE双缺失突变株。生长曲线分析发现，rpoS缺失突变株在生长4h和12h的A600值分别为0．503±0．018和2．060±0．112，rpoE缺失突变株分别为0．293±0．053和1．933±0．115，rpoS／rpoE双缺失突变株分别为0．051±0．007和0．9634-0．111，均低于野生株的0．725±0．097和2．496±0．171，差异具有统计学意义（P〈0．05）。全基因组芯片筛选到42个受RpoE、RpoS调节的涉及代谢的基因。实时定量PCR结果发现，rpsE、rbsK、nusG、etuB在rpoS缺失突变株中的表达分别为（1．86±0．14）×10^6、（1．37±0．11）×10^6、（2．72±0．58）×10^6、（8．27±1．01）×10^6拷贝／μg，在rpoE缺失突变株中的表达分别为（2．19±0．17）×10^6、（1．51±0．12）×10^6、（2．73-4-0．57）×10^6、（9．63±1．42）×10^6拷贝／μg，与野生株中相应基因表达比较[分别为（1．94±0．10）×10^6、（1．52±0．11）×10^6、（2．39±0．52）×10^6、（10．83±1．52）×10^6拷贝／μg]，差异无统计学意义（P〉0．05）；与rpoS／rpoE双缺失突变株比较[分别为（5．64±0．59）×10^6、（4．17±0．40）×10^6、（9．44±1．22）×10^6、（2．95±0．88）×10^6拷贝／μg]，差异均有统计学意义（P〈0．05）� 展开更多
关键词 沙门菌 伤寒 代谢 基因表达调控
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