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ts—SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析 被引量:6
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作者 涂悦 刘晓智 张赛 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第6期557-561,共5页
目的 研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法 用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞(UCMSCs),PCR方法 ... 目的 研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法 用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞(UCMSCs),PCR方法 检测外源基因的整合效率,将其分别置于亚低温(33℃)和正常体温(37℃)下培养,细胞免疫荧光方法 检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测细胞周期调控蛋白--周期素D1(Cyclin D1)、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶-2(CDK2)、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法 检测巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 PCR结果 显示ts-SV40LT抗原的基因片段被成功整合入干细胞,该细胞株在33℃条件下增殖生长旺盛,端粒酶活性高,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6均高表达,P16和P21低表达,同时高表达nestin,不表达NSE和GFAP;在37℃条件下细胞增殖缓慢甚至停滞,端粒酶活性低,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6的表达强度明显低于33℃条件,P16和P21则相反,与此同时nestin表达强度明显下降,NSE和GFAP表达水平上升.结论 通过ts-SV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控,为在亚低温条件下实现干细胞移植救治颅脑创伤患者提供了实验支持. 展开更多
关键词 干细胞 颅脑创伤 低温疗法 分化
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肢体缺血后处理通过激活MAPK途径保护大鼠海马区缺血性神经元 被引量:4
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作者 姜红升 涂悦 +3 位作者 程世翔 王毅 令狐海瑞 张赛 《解剖科学进展》 CAS 2011年第1期4-7,共4页
目的探讨肢体缺血后处理对缺血性神经元损伤的作用,观察大鼠海马CA1区ERK1/2的磷酸化及其蛋白表达的变化情况。方法健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham)、全脑缺血再灌组(四动脉闭塞全脑缺血模型ischemia/reperfusion,I/R)、肢... 目的探讨肢体缺血后处理对缺血性神经元损伤的作用,观察大鼠海马CA1区ERK1/2的磷酸化及其蛋白表达的变化情况。方法健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham)、全脑缺血再灌组(四动脉闭塞全脑缺血模型ischemia/reperfusion,I/R)、肢体缺血后处理组(limb ischemia postconditioning,Lpost)、肢体缺血后处理+ERK1/2抑制剂组(Lpost+PD98059)。光镜下焦油紫染色法观察各组大鼠海马CA1区神经元存活情况;Western blot法检测海马CA1区ERK1、2磷酸化及蛋白表达情况。结果 Western blot结果显示脑缺血再灌注各时间点Lpost组p-ERK1/2水平均较I/R组高,且于再灌注后10min、1d出现两个高峰,给予ERK1/2上游激酶抑制剂PD98059后能够抑制再灌注后1dp-ERK1/2水平的升高;而各时间点各组ERK1/2水平之间无明显差异。焦油紫染色结果显示再灌注1d后,I/R组与sham组相比,海马CA1区存活神经元数量明显减少;Lpost组较I/R组海马CA1区存活神经元数量明显增加;而给予ERK1/2上游激酶抑制剂PD98059后(Lpost+PD98059)神经元生存数量较Lpost组大幅下降。结论肢体缺血后处理具有抗大鼠海马CA1区缺血性神经元损伤的作用,激活ERK1/2通路可能是其发挥保护作用机制之一。 展开更多
关键词 缺血再灌注损伤 肢体缺血后处理 ERK1/2 SD大鼠
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SNCG真核表达载体构建及其在胶质瘤细胞中的稳定表达和影响 被引量:2
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作者 梁博 程世翔 +2 位作者 涂悦 徐忠伟 张赛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期412-414,共3页
目的:利用神经突触核蛋白-γ(SNCG)真核表达载体,构建人胶质瘤细胞株U373稳定过表达SNCG模型,初步探讨过表达SNCG对U373细胞的影响。方法:应用RT-PCR法扩增SNCG基因,将PCR产物插入至真核表达载体pIRES2-EGFP中。通过EcoR I、BamH I双酶... 目的:利用神经突触核蛋白-γ(SNCG)真核表达载体,构建人胶质瘤细胞株U373稳定过表达SNCG模型,初步探讨过表达SNCG对U373细胞的影响。方法:应用RT-PCR法扩增SNCG基因,将PCR产物插入至真核表达载体pIRES2-EGFP中。通过EcoR I、BamH I双酶切及测序鉴定后转染至人神经胶质瘤细胞U373,G418筛选建立SNCG稳定转染的U373细胞系。运用实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测转染后SNCG表达,流式细胞术(FCM)检测SNCG对细胞周期的影响。结果:构建pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体,建立稳定转染SNCG的U373细胞系。与U373/neo细胞相比,U373/SNCG细胞SNCG mRNA表达上调17倍;经紫杉醇(PTX)处理后,U373/SNCG细胞G2/M比例(49±3.6)%较U373/neo细胞(66±1.7)%下降17%(P<0.05)。结论:成功构建人SNCG真核表达载体,并在U373细胞中稳定表达,初步证实过表达SNCG可降低抗微管药物诱导的U373细胞有丝分裂期阻滞,为进一步体外研究SNCG在神经胶质瘤中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 神经突触核蛋白-γ 真核表达载体 神经胶质瘤细胞U373 稳定转染
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骨髓间质干细胞向神经细胞分化潜能的研究进展 被引量:1
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作者 石鹏程 程世翔 张赛 《武警医学院学报》 CAS 2010年第2期160-161,165,共3页
骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)又称骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),是目前备受关注的一类具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞。大量研究表明,MSCs在一定诱导条件下不仅可分化为成骨细胞、成软... 骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)又称骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),是目前备受关注的一类具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞。大量研究表明,MSCs在一定诱导条件下不仅可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 神经细胞 细胞分化 研究进展
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脑脊液蛋白质组学技术在颅脑创伤研究中的应用
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作者 李亚东 张赛 《武警医学院学报》 CAS 2011年第7期577-581,共5页
颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)是最常见的机械性损伤,在暴力性死亡中TBI的死亡率居首位。尽管对TBI治疗方法的研究不断深入,各种综合治疗措施的应用,但其预后仍然较差。基于质谱(mass spectrometry,MS)技术和生物信息... 颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)是最常见的机械性损伤,在暴力性死亡中TBI的死亡率居首位。尽管对TBI治疗方法的研究不断深入,各种综合治疗措施的应用,但其预后仍然较差。基于质谱(mass spectrometry,MS)技术和生物信息学的蛋白组学是后基因组时代兴起的新型学科, 展开更多
关键词 脑脊液 蛋白质组学 颅脑创伤
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脑源性神经营养因子对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响 被引量:7
6
作者 张赛 刘晓智 +2 位作者 孙洪涛 涂悦 程世翔 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期68-71,共4页
目的 研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法 脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD... 目的 研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法 脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD大鼠液压脑创伤模型,分为A组(干细胞移植组)和B组(干细胞移植+BDNF组),两组同时给予亚低温治疗(33℃)5 d.对第4天和第8大(复温后第3天)脑组织标本行增殖细胞核抗原(PCNA)、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学及原位细胞凋亡检测,实验动物予以神经功能缺陷评分.结果 ELISA结果显示细胞转染48~60 h后BDNF持续高表达.亚低温处理第4天两组PCNA、巢蛋白均高表达,NSE及GFAP无或极低表达,细胞凋亡少见,但B组较A组更少(P<0.05).复温后第3天两组PCNA、巢蛋白均表达下降,NSE及GFAP表达升高,但B组较A组NSE阳性率更高,细胞凋亡更少(P<0.05).B组获得最佳动物神经功能评分.结论 BDNF可增加低温环境下的干细胞存活率,并诱导干细胞向神经元分化. 展开更多
关键词 颅脑损伤 干细胞 脑源性神经营养因子 亚低温
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