3种氢氧化铝佐剂的理化性质分析 被引量：6

1

作者 艾绪露 孙晓艳 +2 位作者 陈少华 薛红刚 胡业勤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期39-42,共4页

目的分析3种氢氧化铝佐剂的理化性质。方法通过X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）、透射电镜观察、颗粒大小和吸附能力检测、沉降分析及灭菌前后p H变化检测分析本室配制的氢氧化铝佐剂（佐剂C）与两种商品化的氢氧化铝佐剂（佐剂A... 目的分析3种氢氧化铝佐剂的理化性质。方法通过X-射线衍射（X-ray diffraction,XRD）、透射电镜观察、颗粒大小和吸附能力检测、沉降分析及灭菌前后p H变化检测分析本室配制的氢氧化铝佐剂（佐剂C）与两种商品化的氢氧化铝佐剂（佐剂A和佐剂B）的理化性质。结果 3种氢氧化铝佐剂均为弱晶型勃姆石（poorly-crystalline boehmite,PCB）的晶体形态,颗粒大小主要分布在1～10μm,吸附能力均大于2 mg BSA/mg Al,沉降情况符合《欧洲药典》（7.0版）的要求,灭菌前后p H值变化均小于0.5。结论本室配制的氢氧化铝佐剂与商品化氢氧化铝佐剂多数检测参数值较接近,但吸附能力高于商品化佐剂。本研究为氢氧化铝佐剂质控标准的建立提供了参考。 展开更多

关键词 氢氧化铝 佐剂 晶体结构 颗粒大小 吸附能力

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醛化鹅红细胞的制备及其在百日咳血凝活性测定中的应用 被引量：4

2

作者 赵伟 胡业勤 +4 位作者 薛红刚 李新国 刘玉兰 朱红伟 刘胜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第11期1535-1537,共3页

目的建立鹅红细胞的醛化方法,用于百日咳疫苗生产中的血凝活性测定。方法以新鲜鹅红细胞为对照,分别采用方法一、方法二醛化鹅红细胞,比较两种处理方法制备的醛化鹅红细胞的溶血性和活性,确定最佳醛化条件。结果采用方法一制备的醛化鹅... 目的建立鹅红细胞的醛化方法,用于百日咳疫苗生产中的血凝活性测定。方法以新鲜鹅红细胞为对照,分别采用方法一、方法二醛化鹅红细胞,比较两种处理方法制备的醛化鹅红细胞的溶血性和活性,确定最佳醛化条件。结果采用方法一制备的醛化鹅红细胞的实验效果优于方法二,其测定结果与新鲜红细胞一致,在4℃保存90 d未出现溶血现象,戊二醛最佳处理浓度为1.25%,醛化时间为40 min,最佳醛化鹅红细胞工作浓度为0.8%。结论已成功建立鹅红细胞的醛化方法。 展开更多

关键词 醛化红细胞 百日咳 血凝试验

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不同方法配制的DTaP—sIPV中sIPV的免疫原性研究 被引量：1

3

作者 张中洋 宋冬梅 +5 位作者 鲁卫卫 张越 刘善茹 胡业勤 艾绪露 李秀玲 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第3期116-120,共5页

目的 对采用不同配制方式制备的，含不同剂量Sabin株脊髓灰质炎（脊灰）灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine，sIPV）的DTaP-sIPV联合疫苗中sIPV的免疫原性进行研究。 方法 按照2种不同方式配制含高、低剂量sIPV的... 目的 对采用不同配制方式制备的，含不同剂量Sabin株脊髓灰质炎（脊灰）灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine，sIPV）的DTaP-sIPV联合疫苗中sIPV的免疫原性进行研究。 方法 按照2种不同方式配制含高、低剂量sIPV的DTaP-sIPV联合疫苗。将70只大鼠按简单随机法分成7组，分别为F1H（DTaP-sIPV高剂量组，配制方式1）、F2H（DTaP-sIPV高剂量组，配制方式2）、sIPV-H（sIPV高剂量组）、F1L（DTaP-sIPV低剂量组，配制方式1）、F2L（DTaP-sIPV低剂量组，配制方式2）、sIPV-L（sIPV低剂量组）、赛诺菲巴斯德五联疫苗潘太欣组。每组10只大鼠，间隔3周双侧后腿肌内注射，0.5 ml/只，共免疫3针。于第0、3、6、9、13、17、21、25周眼眶采血、分离血清，采用微量细胞病变效应抑制法分别测定血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体滴度，并进行多样本均数方差分析。结果 每针免疫后，各组抗各型中和抗体滴度均持续上升，第9周均达到最高水平，第13周开始显著下降，至第25周仍维持在一定水平。3针免疫完成后3周，F2H组的抗Ⅰ型脊灰病毒中和抗体几何平均滴度显著高于潘太欣组（F=0.988，P=0.027）；抗Ⅱ型中和抗体，F2H组显著高于F1H组，sIPV-H组显著高于F1H和潘太欣组（F=2.391，P值均〈0.05）；抗Ⅲ型中和抗体，各组间差异均无统计学意义。3针基础免疫后各时间点F2H组抗各型中和抗体滴度均为最高，但除第9周其抗Ⅱ型中和抗体显著高于F1H组外，其他差异均无统计学意义。结论 DTaP-sIPV联合疫苗免疫大鼠后可以诱导产生抗各型中和抗体，且其滴度和持续时间均优于或等同于潘太欣组。DTaP-sIPV诱导的中和抗体滴度不低于相应剂量的sIPV。虽然配制方式2可能更佳，但2种配制方式间sIPV的免疫原性差异无统计学意义。 展开更多

关键词 脊髓灰质炎病毒疫苗 灭活 白喉-破伤风-脱细胞百日咳菌苗 抗体 中和 免疫原性

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苯酚提取法对A群脑膜炎球菌多糖中细菌内毒素含量的影响 被引量：1

4

作者 胡菁 瞿明霞 +5 位作者 胡业勤 陈龙 陈有喜 张翌 郭蓉 唐旻瑶 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第3期105-108,共4页

目的 研究苯酚提取法对A群脑膜炎球菌粗制多糖原液中细菌内毒素含量的影响.方法 用苯酚对A群脑膜炎球菌多糖原液进行提取,比较粗制多糖的不同溶解倍数、苯酚提取过程中的不同搅拌转数、提取次数、提取温度等因素对多糖细菌内毒素含量的... 目的 研究苯酚提取法对A群脑膜炎球菌粗制多糖原液中细菌内毒素含量的影响.方法 用苯酚对A群脑膜炎球菌多糖原液进行提取,比较粗制多糖的不同溶解倍数、苯酚提取过程中的不同搅拌转数、提取次数、提取温度等因素对多糖细菌内毒素含量的影响.结果 粗制多糖采用4.5% 醋酸钠溶液以1:100质量体积比溶解后进行苯酚提取的多糖细菌内毒素含量最低.同时,综合考虑多糖原液中蛋白含量与多糖回收率的检定结果,确定苯酚提取的最佳条件为搅拌转数400 r/min,提取次数3次,温度13~15℃,可有效降低多糖原液中细菌内毒素的含量.结论 苯酚提取法可明显降低A群脑膜炎球菌粗制多糖原液中的细菌内毒素含量. 展开更多

关键词 奈瑟球菌 脑膜炎 多糖类 细菌 内毒素

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无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶毒素液质联用定量检测方法的建立和应用

5

作者 卫辰 吴燕 +3 位作者 蔡心怡 晁哲 王丽婵 马霄 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第1期22-29,共8页

目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria, tetanus and acellular Pertussis combined vaccine, DTaP)中腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, ACT)的液质联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,... 目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria, tetanus and acellular Pertussis combined vaccine, DTaP)中腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, ACT)的液质联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)定量检测方法。方法 对百日咳疫苗精制液、原液、DTaP成品和ACT参考品进行酶解前处理,采用BioC18 (2.1 mm×150 mm, 3μm)为固定相,0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)对特定离子对进行检测。以ACT参考品建立标准曲线,对样品中的ACT准确定量,并对方法进行验证及初步应用。结果 肽段ITGDAQANVLR特异性良好,在1.25~31.25μg/mL范围内线性良好(R^(2)>0.99),残差平方和为2.55,不同基质稀释标准曲线的残差平方和分别为3.08和1.32,基质效应较弱。DTaP成品回收率为80%~109%、原液回收率为93%~121%、精制液回收率为112%~120%;进样精密度为2.32%;中间精密度<20%,具备较好的准确性、精密度,且不同型号仪器的系统适用性研究结果一致。将该方法用于检测4个厂家的无细胞百白破联合疫苗多个工序段含有百日咳疫苗的样品,其中2个厂家的样品均有ACT检出,且ACT在共纯化阶段不断富集达100~250倍,另2个厂家产品仅在发酵液和盐析液中检出。结论 建立的LC-MS/MS检测方法准确性和精密度都比较好,基质效应弱,可用于DTaP中ACT的定量检测和工艺过程监测。 展开更多

关键词 无细胞百白破联合疫苗 腺苷酸环化酶毒素 质量控制 液相色谱串联质谱

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1株甲基杆菌的鉴定

6

作者 曹璟 黄思佳 +4 位作者 郭蓉 刘鹏 金文平 胡业勤 薛红刚 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第1期12-14,共3页

目的鉴定1株在生物制品生产车间采集的菌株wh01的种属。方法观察该菌株的形态，并用细菌鉴定仪进行检定。采用PCR法扩增菌株的16SrDNA和甲醇脱氢酶大亚基的mxaF基因，用生物信息学软件进行分析。结果该菌株经细菌鉴定仪检定为沙门菌属... 目的鉴定1株在生物制品生产车间采集的菌株wh01的种属。方法观察该菌株的形态，并用细菌鉴定仪进行检定。采用PCR法扩增菌株的16SrDNA和甲醇脱氢酶大亚基的mxaF基因，用生物信息学软件进行分析。结果该菌株经细菌鉴定仪检定为沙门菌属，但其形态与沙门菌有很大差别，其16SrDNA和mxaF基因序列与甲基杆菌属序列的相似性高达99％。结论该菌株属于甲基杆菌属。 展开更多

关键词 甲基杆菌 DNA 核糖体 mxaF基因 环境污染

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氢氧化铝佐剂对百日咳菌毛抗原的吸附特性分析 被引量：2

7

作者 杨柏峰 朱德武 +7 位作者 陈雯 周以斯 王丽 龚贝哲 方习静 霍梦颖 胡源 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期260-265,271,共7页

目的探索氢氧化铝[Al(OH)_(3)]佐剂对百日咳菌毛(fimbriae,Fim)抗原的吸附特性及在组分百日咳疫苗制备中的应用。方法通过Zeta电位确定Fim抗原和Al(OH)_(3)佐剂的等电点(pI);朗格缪尔(Langmuir)吸附方程计算不同氯化钠(NaCl)浓度下,Fim... 目的探索氢氧化铝[Al(OH)_(3)]佐剂对百日咳菌毛(fimbriae,Fim)抗原的吸附特性及在组分百日咳疫苗制备中的应用。方法通过Zeta电位确定Fim抗原和Al(OH)_(3)佐剂的等电点(pI);朗格缪尔(Langmuir)吸附方程计算不同氯化钠(NaCl)浓度下,Fim抗原在Al(OH)_(3)佐剂表面的最大吸附量,根据最大吸附量随NaCl浓度的变化趋势判断吸附作用力种类,分析不同浓度磷酸盐和pH对Fim抗原吸附率的影响。采用间接ELISA法检测不同磷酸盐浓度下配制的Fim-Al(OH)_(3)复合物免疫小鼠后的血清抗体效价。结果 Fim抗原的pI为5.5,其最大吸附量随离子强度(NaCl)增加而基本保持不变,吸附率随磷酸盐浓度增加而缓慢降低,但仍保持在90%以上。先加磷酸盐后吸附的复合物免疫小鼠后血清抗体滴度高于其他组。结论 Fim抗原与Al(OH)_(3)佐剂的吸附作用除了静电吸引外,还存在配基交换方式,不同配制方式获得的Fim-佐剂复合物免疫小鼠产生的血清抗体滴度不同,为百日咳疫苗配制中加入Fim抗原提供了数据支持。 展开更多

关键词 百日咳菌毛蛋白 Al(OH)_(3) 佐剂 吸附能力

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百日咳菌毛抗原检测方法的建立及初步应用 被引量：2

8

作者 杨柏峰 陈雯 +5 位作者 雷念潮 朱德武 沈德鹏 周以斯 吴杰 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第4期21-29,共9页

目的建立百日咳菌毛(fimbriae, Fim)抗原组分纯化过程中含量监测的双抗体夹心ELISA方法。方法 Fim抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,经辛酸-硫酸铵法纯化并用辣根过氧化物酶标记,采用棋盘滴定法确定最佳包被抗体浓度和酶标抗体最适稀释倍数... 目的建立百日咳菌毛(fimbriae, Fim)抗原组分纯化过程中含量监测的双抗体夹心ELISA方法。方法 Fim抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,经辛酸-硫酸铵法纯化并用辣根过氧化物酶标记,采用棋盘滴定法确定最佳包被抗体浓度和酶标抗体最适稀释倍数,建立双抗体夹心ELISA检测法,并对其进行全面验证。结果棋盘滴定法确定包被抗体浓度为2μg/mL,最适酶标记抗体稀释倍数为2 000倍。验证双抗体夹心ELISA线性检测范围为15.625~250.000 ng/mL(相关系数r>0.99)。该方法与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒抗原、白喉类毒素(diphtheria toxin, DT)、破伤风类毒素(tetanus toxin, TT)、b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(Hib)、百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin, FHA)和百日咳黏着素(pertactin, PRN)抗原均无明显交叉反应,重复性好,专属性强,其他均符合常规质控要求。结论建立了Fim双抗体夹心ELISA检测法,为百日咳菌毛蛋白生产过程和以组分百日咳疫苗为基础的联合疫苗中Fim含量的质量控制提供有效技术手段。 展开更多

关键词 百日咳杆菌 菌毛抗原 酶联免疫吸附试验 联合疫苗 质量控制

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百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化方法的建立及免疫原性的初步评价 被引量：1

9

作者 杨柏峰 田聪 +6 位作者 朱德武 潘聪 胡太平 施斌 王丽 周昉 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第2期35-42,共8页

目的建立一种适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白(fimbriae, Fim)纯化新工艺,并对其免疫原性进行初步评价。方法百日咳黏附素(pertactin, PRN)流穿液经一步盐析和一步复合型阴离子Capto Adhere疏水层析流穿法进行纯化,以纯度和回收率... 目的建立一种适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白(fimbriae, Fim)纯化新工艺,并对其免疫原性进行初步评价。方法百日咳黏附素(pertactin, PRN)流穿液经一步盐析和一步复合型阴离子Capto Adhere疏水层析流穿法进行纯化,以纯度和回收率为检测指标,对硫酸铵盐析质量体积比和疏水离子层析条件进行优化,进行连续3批生产验证工艺稳定性。检验精纯Fim蛋白毒性,将合格Fim蛋白与百日咳其他组分配伍成五组分无细胞百日咳疫苗(acellular component pertussis vaccine, acPV),免疫小鼠,评价免疫原性。结果成功建立了从PRN流穿液中纯化Fim蛋白的方法。该工艺制备的3批Fim蛋白纯度(>95%)高,回收率均在60%以上,具有良好的重复性,且Fim蛋白符合特异性毒性试验要求。5μg Fim蛋白免疫小鼠后在7、28、35和42 d血清中的抗Fim抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)分别为10.6、97.7、102.9、192.6 IU/mL,与生理盐水组相比具有统计学差异(P<0.05)。结论利用QbD理念建立了适合生产放大的百日咳鲍特菌菌毛蛋白纯化新工艺,且蛋白具有良好的免疫原性,未来有望作为组分百日咳疫苗的候选抗原。 展开更多

关键词 百日咳 百日咳黏附素 菌毛蛋白 盐析 疏水层析 抗Fim抗体

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CD4组织驻留记忆性T细胞及其应用于疫苗设计的研究进展

10

作者 杨柏峰(综述) 杨晓明(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2021年第4期224-228,共5页

机体自然感染病原体后诱导的记忆性T细胞和B细胞介导了针对病原体的适应性免疫应答,其中一小部分记忆性T细胞会驻留在宿主特定组织,成为非循环的淋巴细胞,被称为组织驻留记忆性T细胞(tissue-resident memory T cell,TRM)。TRM主要有CD4... 机体自然感染病原体后诱导的记忆性T细胞和B细胞介导了针对病原体的适应性免疫应答,其中一小部分记忆性T细胞会驻留在宿主特定组织,成为非循环的淋巴细胞,被称为组织驻留记忆性T细胞(tissue-resident memory T cell,TRM)。TRM主要有CD4和CD8两种,在免疫应答过程中可产生细胞因子和/或具有杀伤功能,当再次遇到相同病原体后,TRM快速反应启动全身性免疫应答,为宿主提供长期保护。此文就不同病原体感染所诱导的CD4 TRM及其功能的研究进展进行综述,从疫苗类型、佐剂和免疫途径等方面讨论CD4 TRM用于设计新型疫苗的新思路。 展开更多

关键词 组织驻留记忆性T细胞 疫苗 病毒 免疫

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高效阴离子交换色谱-脉冲安培法对A群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的检测

11

作者 郭蓉 卢佳丽 +2 位作者 薛红刚 胡菁 杨燕珠 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第6期276-280,共5页

目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group A meningococcal polysaccharide-tet... 目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT）中的游离多糖含量.方法 采用1％脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1％DOC处理的样品的PS回收率为90％～104％,TT沉淀率为99％以上,说明1％DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7％和6.4％.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测. 展开更多

关键词 色谱法 离子交换 奈瑟球菌 脑膜炎 血清A群 疫苗 结合 多糖类 细菌

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第1代百日咳毒素国家参考品的标定 被引量：4

12

作者 卫辰 晁哲 +10 位作者 王丽婵 吴燕 张霖阳 潘殊男 方习静 张立志 刘翠 王魁 程之铭 骆鹏 马霄 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期853-857,共5页

目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞... 目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。 展开更多

关键词 百日咳毒素 CHO簇集试验 参考品

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