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不同工艺制备CTN-1V株狂犬病病毒MOI的摸索及其在生物反应器规模化培养中的应用
1
作者 王月莉 曹烨 +9 位作者 王玲 王玥 徐晓 胡文龙 陈杰杉 宋远涛 文聪 杨敏 陶涛 梁婧 《国际生物制品学杂志》 CAS 2024年第3期133-138,共6页
目的通过比较转瓶和反应器工艺制备的CTN-1V株狂犬病病毒在Vero细胞上适应性传代的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI), 评价应用反应器工艺规模化制备狂犬病病毒工作种子批的可行性。方法复苏Vero细胞后按照1∶4比例传代至... 目的通过比较转瓶和反应器工艺制备的CTN-1V株狂犬病病毒在Vero细胞上适应性传代的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI), 评价应用反应器工艺规模化制备狂犬病病毒工作种子批的可行性。方法复苏Vero细胞后按照1∶4比例传代至生产代次, 接种不同MOI的CTN-1V株狂犬病病毒并培养。转瓶工艺毒种MOI为0.005、0.010、0.050、0.100、0.500;反应器工艺毒种MOI为0.010、0.030、0.050、0.080、0.100。在培养过程中分别采用ELISA和小鼠脑内滴定法进行狂犬病病毒G蛋白抗原含量和狂犬病病毒滴度检测, 确定最佳MOI, 并将最佳MOI分别应用于300 L反应器规模化病毒培养工艺。单次病毒收获液取样进行病毒G蛋白抗原含量和病毒滴度的检测, 并进行连续3批次确认试验。结果转瓶工艺毒种工作种子批(批号20181201)与反应器工艺毒种工作种子批(批号20201001), 在T225瓶中的最佳MOI均为0.050。将2批毒种分别用于300 L反应器灌流培养48 h后, 每批病毒收获液的G蛋白抗原含量连续9 d均达到1.0国际单位/ml以上, 病毒滴度均达到6.0 lg半数致死剂量/ml以上, 符合工艺标准。结论根据MOI比较结果, 反应器工艺可以替代原有的转瓶工艺制备狂犬病病毒工作种子批, 并应用到规模化生产中。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 VERO细胞 感染复数 G蛋白抗原含量 病毒滴度
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狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测的优化及验证 被引量：1
2
作者 李榆杨 彭小欢 +2 位作者 张爽 庞德钦 梁婧 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第5期258-262,共5页
目的对狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测(direct immunofluorescence assay,DFA)进行优化及验证,使其更好地应用于规模化生产中的质量控制。方法采用不同的病毒培养温度(35、37℃)、培养时间(24、48 h)、接种细胞(Vero细胞、BSR细胞)以... 目的对狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测(direct immunofluorescence assay,DFA)进行优化及验证,使其更好地应用于规模化生产中的质量控制。方法采用不同的病毒培养温度(35、37℃)、培养时间(24、48 h)、接种细胞(Vero细胞、BSR细胞)以及稀释倍数(3、5、10倍)对狂犬病病毒滴度进行DFA,并对病毒滴度结果进行统计学分析。对优化方法进行重复性和中间精密度验证,并对多个批次样品采用小鼠颅内滴定法和DFA进行滴度检测,分析其相关性。结果优化的条件为37℃培养24 h、接种BSR细胞、5倍系列稀释病毒。DFA重复性和中间精密度变异系数均小于2%,16份样品的小鼠颅内滴定法与DFA滴度显著相关,相关系数为0.952,且P值小于0.0001。结论优化后的DFA快速、准确,且与小鼠颅内滴定法一致性较好,能够替代后者作为狂犬病疫苗规模化生产的质量控制方法。 展开更多
关键词 直接免疫荧光法 滴度 狂犬病病毒
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生物反应器外Vero细胞消化扩大培养工艺的研究
3
作者 陶涛 王玲 +6 位作者 徐晓 杨敏 宋远涛 文聪 陈杰杉 王月莉 梁婧 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第4期30-34,共5页
目的 探究使用生物反应器外消化Vero细胞的方法,实现细胞从30 L到300 L生物反应器逐级扩大培养的工艺,为生产过程中大规模培养Vero细胞提供一种可能的方法。方法 用生物反应器外消化方法对30 L反应器的Vero细胞进行消化,然后转接扩大至3... 目的 探究使用生物反应器外消化Vero细胞的方法,实现细胞从30 L到300 L生物反应器逐级扩大培养的工艺,为生产过程中大规模培养Vero细胞提供一种可能的方法。方法 用生物反应器外消化方法对30 L反应器的Vero细胞进行消化,然后转接扩大至300 L反应器,观察培养工艺中的细胞形态、细胞状态,分析生物反应器外消化Vero细胞工艺应用的关键工艺参数(细胞汇合度、细胞回收率、细胞浓度)变化;通过连续9批Vero细胞放大试验证明罐外细胞消化的有效性和稳定性。结果 Vero细胞经过30 L生物反应器培养后,细胞汇合度为97.5%,细胞浓度为9.83×10^(6)cells/mL,经过生物反应器罐外消化后,分散良好且形态正常,后续300 L生物反应器培养的Vero细胞1 h基本贴壁,92 h后细胞浓度为6.20×10^(6)cells/mL,增殖速度正常。连续共9批试验结果证明罐外细胞消化的细胞回收率均>98.0%;300 L生物反应器培养结束后细胞汇合度均>92.0%,细胞浓度均>6.00×10^(6)cells/mL。结论 使用生物反应器外Vero细胞消化的方法进行30 L到300 L生物反应器放大培养工艺可行、有效且稳定,放大后细胞状态良好且增殖速度正常,适合Vero细胞的大规模生产。 展开更多
关键词 VERO细胞 扩大培养 微载体 生物反应器外细胞消化
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生物制品残留DNA分析技术的研究进展 被引量：2
4
作者 吴浩飞(综述) 黄仕和(审校) 孟胜利(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第1期30-34,共5页
生物制品中残留DNA可能具有感染性和致癌性，因此生物制品的纯化过程需要验证，尽可能将产品中残留DNA的水平降到最低。厂家有必：要显示DNA去除过程，并有适当定量分析方法检测残留DNA的含量。当前DNA定量分析所采用的最普遍方法是定量... 生物制品中残留DNA可能具有感染性和致癌性，因此生物制品的纯化过程需要验证，尽可能将产品中残留DNA的水平降到最低。厂家有必：要显示DNA去除过程，并有适当定量分析方法检测残留DNA的含量。当前DNA定量分析所采用的最普遍方法是定量PCR（quantitative real time polymerase chain reaction，Q-PCR）。此文就残留DNA的感染性、致癌性、免疫原性等潜在风险以及残留DNA分析技术的最新进展做一综述。 展开更多
关键词 生物制品 残留DNA 聚合酶链反应
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新型登革热疫苗临床前研发 被引量：1
5
作者 吴浩飞(综述) 孟胜利(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第3期123-127,共5页
登革热已经成为全球重要的公共卫生问题，由于目前尚无有效的治疗方法，因此，研发登革热疫苗已成为控制该病研究的热点。如今，几个候选登革热疫苗正处于临床试验阶段。一些临床前候选疫苗可能成为高质量的新一代疫苗。此文介绍了登革... 登革热已经成为全球重要的公共卫生问题，由于目前尚无有效的治疗方法，因此，研发登革热疫苗已成为控制该病研究的热点。如今，几个候选登革热疫苗正处于临床试验阶段。一些临床前候选疫苗可能成为高质量的新一代疫苗。此文介绍了登革热疫苗研发的各种技术，着重阐述了临床前疫苗的研发现状。 展开更多
关键词 登革热病毒 EDⅢ蛋白 登革热疫苗
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CpGDNA佐剂研究进展 被引量：1
6
作者 孙燕(综述) 孟胜利(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第4期186-191,共6页
CpGDNA是含有非甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸，通过Toll样受体9（TLR9）激活树突状细胞（DC）和B细胞产生免疫应答。CpGDNA可以促进专职抗原呈递细胞有效地呈递抗原，从而增强疫苗的特异性免疫应答。目前使用CpGDNA佐剂的疫苗免疫后能... CpGDNA是含有非甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸，通过Toll样受体9（TLR9）激活树突状细胞（DC）和B细胞产生免疫应答。CpGDNA可以促进专职抗原呈递细胞有效地呈递抗原，从而增强疫苗的特异性免疫应答。目前使用CpGDNA佐剂的疫苗免疫后能维持长期免疫，具有明显的全身和黏膜免疫效果。临床前和临床试验表明，CpGDNA佐剂安全有效，能够提高传染病和肿瘤疫苗的效能，增强疫苗的免疫原性。 展开更多
关键词 佐剂 免疫 CPG DNA TOLL样受体 疫苗
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多联、多价疫苗发展现状及趋势 被引量：1
7
作者 孟胜利 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第2期57-63,共7页
过去30年，中国经济增速平均达到9．8％，综合国力由弱到强，人民生活逐步实现小康，国家和人民对健康保障需求日益增强，而2002年SARS的暴发是疫苗产业进入高速发展的催化剂。一类疫苗品种增多、利润下降，二类疫苗迅速崛起，多联、多... 过去30年，中国经济增速平均达到9．8％，综合国力由弱到强，人民生活逐步实现小康，国家和人民对健康保障需求日益增强，而2002年SARS的暴发是疫苗产业进入高速发展的催化剂。一类疫苗品种增多、利润下降，二类疫苗迅速崛起，多联、多价疫苗和新型疫苗点燃新的希望。 展开更多
关键词 多价疫苗 中国经济 综合国力 健康保障 SARS 疫苗品种 二类疫苗 催化剂
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预防性人乳头瘤病毒疫苗研究进展
8
作者 吴浩飞 周红星 +1 位作者 孟胜利 杨晓明 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第4期194-197,共4页
部分高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）经性接触传播,可导致宫颈及肛门等部位的恶性肿瘤.默克公司的Gardasil四价疫苗和葛兰素史克公司的Cervarix二价疫苗已被美国FDA批准上市,在世界范围内广泛应用,但尚未在中国上市.目... 部分高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）经性接触传播,可导致宫颈及肛门等部位的恶性肿瘤.默克公司的Gardasil四价疫苗和葛兰素史克公司的Cervarix二价疫苗已被美国FDA批准上市,在世界范围内广泛应用,但尚未在中国上市.目前研究者正致力于开发保护覆盖面广、价格低廉的第二代疫苗.此文重点介绍国内外第二代预防性疫苗的研究进展. 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 病毒样颗粒 宫颈肿瘤
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