目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Fibulin-5基因表达后,探讨其对IgG4相关眼眶病(IgG4-related orbital disease,IgG4-ROD)泪腺成纤维细胞增殖的影响。方法:通过质粒载体介导的方式将Fibulin-5基因的小干扰RNA转染IgG4相关眼眶病泪腺成纤...目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Fibulin-5基因表达后,探讨其对IgG4相关眼眶病(IgG4-related orbital disease,IgG4-ROD)泪腺成纤维细胞增殖的影响。方法:通过质粒载体介导的方式将Fibulin-5基因的小干扰RNA转染IgG4相关眼眶病泪腺成纤维细胞,RT-PCR检测转染后细胞Fibulin-5基因的mRNA变化,有效果最好的小干扰RNA再去转染细胞并用CCK-8检测不同浓度干扰RNA染后细胞的增殖情况。结果:人体IgG4-ROD泪腺组织经过组织块法可以培养出原代细胞,经免疫荧光鉴定证实为成纤维细胞;对Fibulin-5的小干扰RNA筛选发现Fibulin5-siRNA-1的干扰效果最好;CCK-8法检测细胞的吸光度值,经统计学比较后发现,6例细胞在转染后的48h及72h细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05),组间对比发现随着小干扰RNA的浓度升高,对成纤维细胞的抑制作用越强。通过对转染时间的研究发现,72h的抑制率明显高于48h。结论:应用RNAi技术靶向沉默Fibulin-5基因后,能够有效抑制泪腺成纤维细胞的增殖。展开更多
文摘目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Fibulin-5基因表达后,探讨其对IgG4相关眼眶病(IgG4-related orbital disease,IgG4-ROD)泪腺成纤维细胞增殖的影响。方法:通过质粒载体介导的方式将Fibulin-5基因的小干扰RNA转染IgG4相关眼眶病泪腺成纤维细胞,RT-PCR检测转染后细胞Fibulin-5基因的mRNA变化,有效果最好的小干扰RNA再去转染细胞并用CCK-8检测不同浓度干扰RNA染后细胞的增殖情况。结果:人体IgG4-ROD泪腺组织经过组织块法可以培养出原代细胞,经免疫荧光鉴定证实为成纤维细胞;对Fibulin-5的小干扰RNA筛选发现Fibulin5-siRNA-1的干扰效果最好;CCK-8法检测细胞的吸光度值,经统计学比较后发现,6例细胞在转染后的48h及72h细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05),组间对比发现随着小干扰RNA的浓度升高,对成纤维细胞的抑制作用越强。通过对转染时间的研究发现,72h的抑制率明显高于48h。结论:应用RNAi技术靶向沉默Fibulin-5基因后,能够有效抑制泪腺成纤维细胞的增殖。
