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上皮间质转化MACC1对结肠癌细胞HT-29增殖迁移和侵袭影响 被引量:3
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作者 赵为民 金博 +1 位作者 于震 王海江 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2021年第14期1072-1079,共8页
目的探讨基于上皮间质转化(EMT)研究结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结肠癌细胞HT-29增殖迁移和侵袭的作用机制。方法人结肠癌HT-29细胞株购自中国科学院上海细胞研究所。转染shRNA敲降MACC1表达,RT-PCR和蛋白质印迹法筛选最佳敲降shRNA... 目的探讨基于上皮间质转化(EMT)研究结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结肠癌细胞HT-29增殖迁移和侵袭的作用机制。方法人结肠癌HT-29细胞株购自中国科学院上海细胞研究所。转染shRNA敲降MACC1表达,RT-PCR和蛋白质印迹法筛选最佳敲降shRNA。根据随机对照法将细胞分为HT-29细胞对照组(HT-29组)、HT-29细胞转染shRNA-2组和HT-29细胞空白转染组。MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测EMT标志物(E-cadherin和Vimentin)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法标记细胞骨架中的肌动蛋白和微管蛋白表达。结果当转染shRNA-2的干扰质粒后,MACC1基因的表达水平为0.31±0.08,与HT-29组(1.02±0.06)相比差异有统计学意义,F=46.43,P<0.01。与HT-29组的(0.02±0.04)%相比,转染shRNA-2后细胞在24、36、48、60和72h时增殖率分别被抑制(11.00±1.06)%、(28.33±3.79)%、(37.00±4.17)%、(41.33±4.04)%和(43.33±5.03)%,差异有统计学意义,F=27.52,P<0.01。Transwell细胞迁移和侵袭实验表明,与HT-29组(1.05±0.05,1.02±0.06)相比,转染shRNA-2后细胞迁移和侵袭数比率分别为0.41±0.03和0.24±0.04,差异有统计学意义,F值分别为56.01和110.82,均P<0.01。敲降MACC1后,E-cadherin mRNA表达量上调为1.59±0.06,而Vimentin mRNA表达量下调为0.36±0.05,与HT-29组(0.99±0.13,0.99±0.17)相比,差异有统计学意义,F值分别为42.40和34.03,均P<0.01。蛋白质印迹结果显示,E-cadherin蛋白表达量上调为2.09±0.02,Vimentin蛋白表达量下调为0.44±0.02,与HT-29组(1.02±0.02,1.04±0.03)相比,差异有统计学意义,F值分别为945.91和374.82,均P<0.01。敲降MACC1的表达后细胞的骨架蛋白Actin染色减弱,骨架排列紊乱;但细胞的微管蛋白增强。转染shRNA-NC组的细胞各项检测指标与HT-29组均差异无统计学意义,均P>0.05。结论敲降结肠癌细胞HT-29的MACC1可上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,改变细胞骨架� 展开更多
关键词 MACC1 上皮间质转化 结肠癌细胞HT-29 细胞增殖 迁移 侵袭
原文传递
MACC1对裸鼠移植HT-29细胞所致结肠癌复发及肝转移的影响 被引量:2
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作者 赵为民 金博 +1 位作者 于震 王海江 《实用肿瘤杂志》 CAS 2020年第3期217-223,共7页
目的研究结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)对结肠癌细胞HT-29所致裸鼠结肠癌术后复发及肝转移的影响。方法采用shRNA法敲降MACC1表达。免疫荧光标记MACC1表达。噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细... 目的研究结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)对结肠癌细胞HT-29所致裸鼠结肠癌术后复发及肝转移的影响。方法采用shRNA法敲降MACC1表达。免疫荧光标记MACC1表达。噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞增殖能力。移植HT-29细胞建立裸鼠结肠癌复发和肝转移模型。结果shRNA敲降MACC1表达后,HT-29细胞中MACC1 mRNA和蛋白表达均下降,细胞增殖率降低45.2%(均P<0.05)。与移植HT-29细胞的对照组裸鼠比较,移植shRNA的细胞组裸鼠的移植瘤切除8周后复发肿瘤直径及重量分别降低55.8%和75.3%(均P<0.01)。与移植HT-29细胞对照组裸鼠比较,移植shRNA的细胞组裸鼠7周后肝转移形成的肿瘤结节数量、直径和融合面积均降低(均P<0.01)。结论敲降结肠癌细胞HT-29的MACC1可抑制HT-29结肠癌细胞的增殖,减少结肠癌模型裸鼠的复发和肝转移。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 MACC1 HT-29细胞 shRNA 结肠癌复发 肝转移
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