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半乳糖基化壳聚糖肝靶向性基因转导的体内实验 被引量：4
1
作者 李剑平 窦科峰 +5 位作者 陈勇 鱼军 杨雁灵 赵青川 乔庆 毛海泉 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第7期848-851,共4页
目的:研究半乳糖基化壳聚糖(Galactosylated chitosan, GC)在狗体内的肝靶向性作用. 方法:GC与质粒pEGFP-N1混和制备成纳米微囊复合物,体外转染SMMC-7721细胞.杂种狗术前1 d静脉注射氯化钆(14 mg/kg)以清除Kupffer细胞.将含1 mg质粒的... 目的:研究半乳糖基化壳聚糖(Galactosylated chitosan, GC)在狗体内的肝靶向性作用. 方法:GC与质粒pEGFP-N1混和制备成纳米微囊复合物,体外转染SMMC-7721细胞.杂种狗术前1 d静脉注射氯化钆(14 mg/kg)以清除Kupffer细胞.将含1 mg质粒的纳米微囊经肝动脉和门静脉注射入动物体内.48 h 后取主要脏器组织做冰冻切片,在荧光显微镜下观察绿荧光蛋白表达情况.以裸质粒作为对照. 结果:7721细胞中有绿荧光蛋白的表达,体内实验GC组肝组织中有绿荧光蛋白表达,其他脏器组织中仅有微量表达. 结论:半乳糖基化壳聚糖在体外有较高的转染率,在大动物体内有肝靶向性作用,肝动脉、门静脉联合给药是基因治疗的一种有效途径. 展开更多
关键词 半乳糖基化 体内实验 壳聚糖 基因转导 肝靶向性 SMMC-7721细胞 Kupffer细胞 chitosan 靶向性作用 绿荧光蛋白 显微镜下观察 纳米微囊 动物体内 脏器组织 门静脉注射 体外转染 经肝动脉 冰冻切片 表达情况 蛋白表达 基因治疗
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构建人CD59真核表达载体并利用壳聚糖介导转染NIH3T3细胞
2
作者 乔庆 窦科峰 +4 位作者 陈勇 张静 李剑平 王映梅 毛海泉 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2006年第4期424-426,430,共4页
目的构建人CD59真核表达载体pSecTag2/HygroB-CD59,并利用壳聚糖(chitosan)组装成纳米微粒复合体,转染小鼠NI H3T3细胞。方法应用PCR方法,从CD59-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/Hy... 目的构建人CD59真核表达载体pSecTag2/HygroB-CD59,并利用壳聚糖(chitosan)组装成纳米微粒复合体,转染小鼠NI H3T3细胞。方法应用PCR方法,从CD59-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-CD59真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定。利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NI H3T3细胞,并用抗CD59抗体对转染细胞进行免疫组织化学染色。结果CD59基因大小为312bp,与Genbank中记载的人CD59cDNA序列结果完全一致。利用壳聚糖-CD59纳米微粒转染NI H3T3细胞24h后,免疫组织化学染色显示转染细胞CD59呈弥漫性胞浆阳性。结论成功构建了人CD59真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NI H3T3细胞,为进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。 展开更多
关键词 CD59 壳聚糖 纳米微粒 基因克隆 基因转染 免疫组织化学
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人补体衰变加速因子、补体膜辅助调节蛋白及CD59真核表达载体构建及序列分析
3
作者 乔庆 窦科峰 +3 位作者 陈勇 张静 李剑平 毛海泉 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2006年第6期643-645,657,共4页
目的:构建人补体衰变加速因子(Decayacceleratingfactor,DAF)、补体膜辅助调节蛋白(membranecofactorprotein,MCP)、CD59的真核表达载体pSecTag2/HygroB-DAF、pSecTag2/HygroB-MCP、pSecTag2/HygroB-CD59。方法:应用PCR方法,从DAF-pGEM-... 目的:构建人补体衰变加速因子(Decayacceleratingfactor,DAF)、补体膜辅助调节蛋白(membranecofactorprotein,MCP)、CD59的真核表达载体pSecTag2/HygroB-DAF、pSecTag2/HygroB-MCP、pSecTag2/HygroB-CD59。方法:应用PCR方法,从DAF-pGEM-TEasyVector、MCP-pGEM-TEasyVector和CD59-pGEM-TEasyVector分别克隆所需的DNA片段,经限制性内切酶BglandXhol消化后,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,分别构建人DAF、MCP、CD59真核表达质粒,并进行酶切鉴定及DNA序列测定分析。结果:DAF基因大小为1049bp,MCP基因大小为1065bp,CD59基因大小为312bp,与genbank中记载的人DAF、MCP和CD59cDNA序列结果基本相同。结论:成功构建DAF、MCP和CD59真核表达质粒,为今后进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。 展开更多
关键词 @补体衰变加速因子 @补体膜辅助调节蛋白 @CD59 基因 真核表达
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