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猪繁殖与呼吸综合征新型疫苗的研究进展 被引量：2
1
作者 王亚平 李鹏 +4 位作者 任鹏举 闫占鹏 张秋雨 武乐祎 王选年 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第21期49-52,共4页
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状的病毒性传染病,给全球的生猪养殖者造成了巨大的经济损失,严重危害我国养猪业的健康发展。目前接种疫苗仍是预防PRRS的最... 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状的病毒性传染病,给全球的生猪养殖者造成了巨大的经济损失,严重危害我国养猪业的健康发展。目前接种疫苗仍是预防PRRS的最重要措施之一,但由于PRRSV变异株的不断出现,PRRSV的快速进化或重组,导致其遗传多样性增加,传统的疫苗已经不能满足需求。因此,迫切需要开发更安全、可靠、高效和针对性强的PRRS疫苗。文章主要对重组亚单位疫苗、DNA疫苗、活载体疫苗、基因缺失疫苗和合成肽疫苗等新型基因工程疫苗的研究进展作一综述,以期为我国PRRS的防控提供理论参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 重组亚单位疫苗 DNA疫苗 活载体疫苗 基因缺失疫苗 合成肽疫苗
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PD-1基因的表达调控分子机制研究进展 被引量：4
2
作者 徐若楠 孙国鹏 +1 位作者 何海汛 王选年(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第20期2540-2546,共7页
程序性死亡因子-1(PD-1)作为调节或平衡机体外周和中枢免疫功能的重要分子,其在不同的抗原刺激、炎症环境、细胞种类及分化阶段的表达受复杂、多样的分子机制调控。为深入理解PD-1表达调控的分子机制,本文分别从顺式作用元件、转录调控... 程序性死亡因子-1(PD-1)作为调节或平衡机体外周和中枢免疫功能的重要分子,其在不同的抗原刺激、炎症环境、细胞种类及分化阶段的表达受复杂、多样的分子机制调控。为深入理解PD-1表达调控的分子机制,本文分别从顺式作用元件、转录调控因子及相关信号通路、表观遗传因素、转录后调控等几个方面,将已有关于PD-1表达调控分子机制的相关研究进展进行综述,以期为更精确、有效的免疫检查点疗法或治疗方案的设计提供新的信息和思路。 展开更多
关键词 PD-1 顺式作用元件 转录调控因子 表观遗传因素 转录后调控
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建 被引量：2
3
作者 朱艳平 何勇 +9 位作者 刘佳 邢瑞林 常乐凯 李润芷 岳锋 吴玉苹 李鹏 孙国鹏 张艳芳 王选年 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2860-2866,共7页
为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列... 为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP 2基因 幽门螺杆菌 铁蛋白 融合PCR
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鸡PD-1单克隆抗体的制备及生物学功能研究 被引量：2
4
作者 王玲玲 孙国鹏 +10 位作者 徐若楠 何海汛 闫占鹏 王亚平 邢瑞林 任鹏举 李鹏 张艳芳 朱艳平 岳锋 王选年 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3363-3370,共8页
试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PDL1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting... 试验旨在筛选并制备鸡PD-1单克隆抗体,对该单克隆抗体的免疫学特性、结合活性及其对鸡PD-1/PDL1信号通路激活的阻断作用进行初步研究。运用杂交瘤细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,采用ELISA方法、Ig抗体亚型鉴定试剂盒、Western blotting鉴定抗体的免疫学特性,利用间接免疫荧光技术及流式细胞术检测筛选单抗与鸡PBMCs的结合情况,应用该单抗与IBDV感染7d后的鸡PBMC细胞作用,利用实时荧光定量PCR技术检测IL-2、IL-6和IFN-γ等细胞因子的表达情况。结果显示,试验获得1株特异、稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为PD-1-D05。该单克隆抗体的亚型属于IgG1,杂交瘤细胞培养上清和腹水的效价分别为1∶211和1∶2.048×105。ELISA和Western blotting检测结果表明,PD-1-D05单抗能与免疫原发生特异性反应,与pET-28a(+)、Rosetta菌株蛋白提取液上清及无关蛋白无交叉反应。间接免疫荧光及流式细胞术检测结果显示,PD-1-D05单克隆抗体能与鸡PBMC特异性结合,且IBDV感染7d后的PBMC经单抗处理后,IL-2表达量显著升高(P<0.05),IFN-γ转录水平显著下降(P<0.05),IL-6表达水平较IBDV攻毒组细胞虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05)。结果表明,试验成功筛选并制备了能够稳定分泌鸡PD-1单克隆抗体的细胞株,所获得的PD-1单克隆抗体具有良好的免疫学特性,该单抗能够特异性识别鸡PD-1分子并与鸡PBMC细胞特异结合,并在一定程度上恢复由于IBDV感染导致的PD-1/PD-L1信号通路激活引发的免疫调节相关细胞因子IL-2、IFN-γ的异常表达。 展开更多
关键词 鸡 PD-1 单克隆抗体 生物学功能
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PD-1/PD-Ls通路的特性及在动物疾病中的研究进展 被引量：1
5
作者 岳锋 周娟娟 +1 位作者 章金刚 王选年 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1241-1247,1252,共8页
程序性死亡因子1(programmed cell death-1,PD-1)是非常重要的免疫抑制性受体分子之一,其配体为PD-L1和PD-L2(PD-Ls)。PD-1/PD-Ls通路传递负免疫信号,导致机体免疫功能衰竭或免疫抑制,是慢性或持续性病毒感染、肿瘤性疾病和自身性免疫... 程序性死亡因子1(programmed cell death-1,PD-1)是非常重要的免疫抑制性受体分子之一,其配体为PD-L1和PD-L2(PD-Ls)。PD-1/PD-Ls通路传递负免疫信号,导致机体免疫功能衰竭或免疫抑制,是慢性或持续性病毒感染、肿瘤性疾病和自身性免疫疾病的重要致病机制之一,阻断PD-1/PD-Ls通路可以逆转或恢复衰竭淋巴细胞的免疫功能。因此,开展PD-1/PD-Ls通路在相关疾病中的致病机制研究,对其防控和治疗均具有重要的意义。现综述PD-1/PD-Ls通路的特性及其在猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪瘟、牛白血病和牛边缘无浆体病、鸡马立克病、鸡疱疹病毒Ⅱ型和鸡传染性法氏囊病、犬利什曼原虫病和犬肿瘤性疾病等相关疾病中的研究进展与效应机制,以期为相关疾病的治疗和防控提供新的治疗靶点和策略。 展开更多
关键词 PD-1 免疫抑制性受体 PD-L1 PD-L2 猪 牛 禽 犬
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抗猪PD-1单克隆抗体的制备与其生物学特性鉴定
6
作者 岳锋 杨健 +5 位作者 周娟娟 朱艳平 李鹏 孙国鹏 张艳芳 王选年 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期31-33,共3页
制备猪程序性死亡因子-1(PD-1)单克隆抗体,鉴定其生物学特性。以表达纯化的猪程序性死亡因子-1(Programmed death-1,PD-1)胞外区重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,用细胞杂交瘤技术将免疫BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS0细胞融合,经多次... 制备猪程序性死亡因子-1(PD-1)单克隆抗体,鉴定其生物学特性。以表达纯化的猪程序性死亡因子-1(Programmed death-1,PD-1)胞外区重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,用细胞杂交瘤技术将免疫BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS0细胞融合,经多次克隆化培养,筛选分泌特异性抗猪PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果:获得1株可稳定分泌抗猪PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B5,Ig亚型为Ig G1,细胞上清和腹水效价分别为1∶1×212和1∶2.048×105,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和Western-Blot结果表明,该株单抗能特异性识别重组猪PD-1胞外区蛋白,流式细胞术结果表明,该单抗可以结合猪外周血单核细胞上PD-1蛋白。结论:成功制备了1株分泌抗猪PD-1单抗的杂交瘤细胞株2B5,为研究猪PD-1/PD-L1通路在猪传染性疾病中的致病机制提供了有力的检测工具。 展开更多
关键词 PD-1 胞外区 单克隆抗体 效价
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新型猪瘟疫苗的研究进展 被引量：12
7
作者 任鹏举 李鹏 +3 位作者 张秋雨 王亚平 武乐祎 王选年 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期1958-1964,共7页
猪瘟是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前,传统疫苗接种仍是预防猪瘟的主要手段,虽然传统疫苗(如C株)在防控猪瘟方面发挥着巨大的作用,但也存在一些缺陷,如无法区... 猪瘟是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前,传统疫苗接种仍是预防猪瘟的主要手段,虽然传统疫苗(如C株)在防控猪瘟方面发挥着巨大的作用,但也存在一些缺陷,如无法区分野毒感染和疫苗免疫动物,猪瘟免疫失败时有发生等。因此,研制新型猪瘟疫苗具有重要意义。随着分子生物学技术与重组DNA技术的不断发展及基因工程疫苗研究的不断深入,亚单位疫苗、核酸疫苗、活载体重组疫苗、基因缺失疫苗、全长感染性cDNA标记疫苗和合成肽疫苗6种新型猪瘟疫苗被相继开发。与传统疫苗相比,新型疫苗拥有廉价、安全、高效、易于运输与保存、能区分野毒感染和疫苗免疫等优点。作者对6种新型猪瘟疫苗的研究进展作一综述,以期为猪瘟的防控提供参考。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 新型疫苗
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紫外诱变选育米曲霉氨肽酶高产菌株 被引量：8
8
作者 李鹏 张艳芳 +2 位作者 王军 韩玉婷 王选年 《中国调味品》 CAS 北大核心 2017年第1期61-64,共4页
以米曲霉CICC2066菌株为出发菌株进行紫外诱变,经过多次筛选后得到3株氨肽酶活力显著提高且遗传性较稳定的诱变株UY-15,UY-17和UY-20。将3株诱变株与出发菌株进行发酵实验性能比较,结果表明:米曲霉UY-15,UY-17和UY-20培养42h后制曲中氨... 以米曲霉CICC2066菌株为出发菌株进行紫外诱变,经过多次筛选后得到3株氨肽酶活力显著提高且遗传性较稳定的诱变株UY-15,UY-17和UY-20。将3株诱变株与出发菌株进行发酵实验性能比较,结果表明:米曲霉UY-15,UY-17和UY-20培养42h后制曲中氨肽酶活力分别是出发菌株的1.24,1.38,1.54倍,且UY-20中性蛋白酶活力较出发菌株提高了7%。3株诱变株的孢子量较出发菌株具有优势。 展开更多
关键词 米曲霉 紫外诱变 氨肽酶
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稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析 被引量：2
9
作者 武乐祎 吴素芳 +4 位作者 车影 张强 李鹏 卞广林 王选年 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1056-1063,共8页
建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到... 建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL^(-1),细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L^(-1);利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。 展开更多
关键词 CHO-K1 PCV2-Cap 稳转细胞系 免疫原性
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口腔中幽门螺杆菌PCR检测方法的建立 被引量：1
10
作者 朱艳平 何勇 +13 位作者 邢瑞林 岳锋 李鹏 徐涛 明会婷 诸雪晶 王珂 孙梦研 张艳芳 孙国鹏 徐文慧 高冉 孟萌 王选年 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期220-225,共6页
全世界大约有50%的人口感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp),Hp感染容易造成慢性胃炎、消化性溃疡、低度恶性胃MALT淋巴瘤及胃癌,对人类造成严重的危害。为寻求一种简便、准确、非创伤性的方法用于口腔中Hp的检测,本研究建立了口... 全世界大约有50%的人口感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp),Hp感染容易造成慢性胃炎、消化性溃疡、低度恶性胃MALT淋巴瘤及胃癌,对人类造成严重的危害。为寻求一种简便、准确、非创伤性的方法用于口腔中Hp的检测,本研究建立了口腔中幽门螺杆菌的PCR检测方法,并对建立的PCR方法的敏感性、特异性进行分析,并应用于检测唾液样品和牙菌斑共50份。结果显示,50份样品中,阳性率为82%。结果表明,本研究建立的口腔中Hp的PCR检测方法特异性强、敏感性高,可以用于临床上Hp诊断的重要参考。 展开更多
关键词 口腔 幽门螺杆菌 PCR
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