川芎嗪对实验性肺纤维化肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响 被引量：14

1

作者 刘巨源 海广范 +1 位作者 刘瑞丽 杨献军 《新乡医学院学报》 CAS 2005年第1期1-3,共3页

目的探讨川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制。方法将48只SD大鼠一次性气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)制备肺纤维化模型,随机分为模型对照组及实验组各24只,在实验的d3、d7、d14、d28分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液(BALF);另取8只... 目的探讨川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制。方法将48只SD大鼠一次性气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)制备肺纤维化模型,随机分为模型对照组及实验组各24只,在实验的d3、d7、d14、d28分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液(BALF);另取8只为空白对照组,于实验的d28一次性处死计数细胞总数及分类计数,采用ELISA法测定肺泡巨噬细胞(AM)培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果模型对照组各期BALF细胞计数及AM培养上清液TNFα含量较空白对照组明显增高(P<0.05,P<0.01),实验组较模型对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论抑制TNFα释放可能是川芎嗪防治大鼠肺纤维化的机制之一。 展开更多

关键词 肺纤维化 支气管肺泡灌洗液 肿瘤坏死因子 川芎嗪

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汉防己甲素对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞释放肿瘤坏死因子的影响 被引量：15

2

作者 刘巨源 郭萍 +1 位作者 周跃 杨献军 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第5期613-615,共3页

目的 :动态观察汉防己甲素 (Tetrandrine ,Tet)对博莱霉素A5(BLMA5)致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞总数、分类计数及肺泡巨噬细胞 (AM)释放肿瘤坏死因子α(TNF α)的影响 ,探讨Tet防治肺纤维化机制。方法 :将 48只SD大鼠... 目的 :动态观察汉防己甲素 (Tetrandrine ,Tet)对博莱霉素A5(BLMA5)致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞总数、分类计数及肺泡巨噬细胞 (AM)释放肿瘤坏死因子α(TNF α)的影响 ,探讨Tet防治肺纤维化机制。方法 :将 48只SD大鼠一次性气管内注入BLMA5制备肺纤维化模型 ,随机分为 :模型组 (n =2 4 )及Tet组(n =2 4 ) ,在实验的第 3d、7d、1 4d、2 8d分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液 ,另取 8只为正常对照组 ,于实验的第 2 8d一次性处死记数细胞总数及分类计数 ,采用ELISA法测定肺泡AM培养上清中TNF α水平。结果 :模型组各期BALF细胞计数及肺泡巨噬细胞培养上清TNF α含量较正常对照组明显增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ,Tet组较模型组明显降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 )。结论 :抑制TNF α释放可能是汉防己甲素防治鼠肺纤维化的机制之一。 展开更多

关键词 汉防己甲素 肺纤维化 支气管肺泡灌洗液 肿瘤坏死因子

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蝎毒组分Ⅲ对人头颈部鳞状细胞癌细胞生长的影响 被引量：13

3

作者 卢娜 王辉 +1 位作者 杨献军 李超 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2002年第6期515-517,共3页

目的 :观察蝎毒组分Ⅲ (SVC Ⅲ )对人头颈部鳞状细胞癌细胞株 (AGZY 973)生长的影响 ,试图找出SVCⅢ抑制鳞状细胞癌的最佳浓度。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法检测经不同浓度SVC Ⅲ作用下AGZY 973生长抑制率。结果 :SVCⅢ能抑制该细胞的生长... 目的 :观察蝎毒组分Ⅲ (SVC Ⅲ )对人头颈部鳞状细胞癌细胞株 (AGZY 973)生长的影响 ,试图找出SVCⅢ抑制鳞状细胞癌的最佳浓度。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法检测经不同浓度SVC Ⅲ作用下AGZY 973生长抑制率。结果 :SVCⅢ能抑制该细胞的生长 ,SVC Ⅲ可导致AGZY 973细胞代谢MTT的能力显著低于对照组 ,生长抑制率达 6 8.96 % (P <0 .0 1)。当SVCⅢ的浓度 <4 0mg·L- 1时 ,剂量效应关系明显 ;而SVC Ⅲ的浓度 >4 0mg·L- 1时无剂量效应关系。 5 Fu治疗组生长抑制率达 5 5 .2 7%P <0 .0 1)。结论 :SVC Ⅲ是存在于东亚钳蝎蝎毒中的一种抗肿瘤成分 ,能够抑制AGZY 973的生长 。 展开更多

关键词 蝎素 细胞株 鳞状细胞癌 细胞毒性 抗肿瘤

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大鼠缺血再灌注心肌细胞中Caspase-3和Bcl-2基因的表达 被引量：5

4

作者 张艳芳 范文艳 +1 位作者 杨瑞 杨廷桐 《新乡医学院学报》 CAS 2009年第5期441-444,共4页

目的探讨缺血再灌注(IR)心肌细胞中Caspase-3和Bcl-2基因的动态表达。方法健康Wistar成年大鼠70只随机分为对照组10只,实验组60只,实验组再分为IR 2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h共6个亚组,每亚组10只。建立大鼠心肌IR模型,采用原位... 目的探讨缺血再灌注(IR)心肌细胞中Caspase-3和Bcl-2基因的动态表达。方法健康Wistar成年大鼠70只随机分为对照组10只,实验组60只,实验组再分为IR 2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h共6个亚组,每亚组10只。建立大鼠心肌IR模型,采用原位杂交、原位末端标记染色等技术检测IR后Caspase-3 mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达。结果凋亡细胞主要位于IR交界区,于IR12 h达高峰;坏死细胞主要位于IR梗死区。实验组IR交界区与梗死区Caspase-3 mRNA均于IR 2 h开始升高,且高于对照组(P<0.01),交界区于IR 12 h到24 h达峰值,与细胞凋亡发生的时间基本一致,梗死区于IR 8 h达峰值。实验组IR交界区和梗死区Bcl-2 mRNA自IR 2 h始呈持续低水平升高,在IR24 h后Caspase-3 mRNA开始下降时其表达仍持续升高;相同时相点IR交界区Bcl-2 mRNA的阳性率高于梗死区(P<0.05)。Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA和凋亡细胞的表达在交界区均比在梗死区活跃(P<0.05)。结论细胞凋亡是IR损伤发生的主要标志;Caspase-3和Bcl-2二者之间形成抗衡的网络调控构象,负责凋亡的促进和凋亡的抑制。 展开更多

关键词 缺血再灌注损伤 心肌细胞凋亡 CASPASE-3 BCL-2

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p53 mRNA和Caspase-3 mRNA在幼年大鼠心肌缺血再灌注损伤中的动态表达及药物干预作用 被引量：5

5

作者 张艳芳 李秀敏 杨瑞 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1006-1007,共2页

目的探讨p53mRNA、Caspase-3 mRNA在幼年大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)不同时间的动态表达与心肌细胞凋亡的关系,观察药物干预的影响。方法将70只幼年大鼠随机分为3组:对照组10只,模型组和治疗组各30只,制备MIRI模型。对照组和模型组大... 目的探讨p53mRNA、Caspase-3 mRNA在幼年大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)不同时间的动态表达与心肌细胞凋亡的关系,观察药物干预的影响。方法将70只幼年大鼠随机分为3组:对照组10只,模型组和治疗组各30只,制备MIRI模型。对照组和模型组大鼠右股静脉注入9g/L盐水,治疗组注入甲泼尼龙针,原位杂交检测p53、Caspase-3 mRNA。原位末端标记染色(TUNEL)检测凋亡细胞在各组不同时间的动态变化。结果模型组与治疗组p53 mRNA表达峰值出现在缺血再灌注(IR)8h,Caspase-3 mRNA峰值在IR12h;模型组凋亡细胞在IR12h达高峰,治疗组延迟至IR24h;相同时间点治疗组与模型组比较,p53 mRNA和Caspase-3 mRNA表达均显著减弱(Pa<0.05),凋亡细胞数显著减少(P<0.05)。结论p53和Caspase-3通过诱发心肌细胞凋亡在MIRI的病程中发挥重要作用,甲泼尼龙干预对MIRI具有一定的积极作用。 展开更多

关键词 心肌缺血再灌注损伤 凋亡 P53 CASPASE-3 大鼠

原文传递

基因重组Taq DNA聚合酶的制备 被引量：7

6

作者 王天云 秦川 +1 位作者 杨瑞 杨献军 《新乡医学院学报》 CAS 2007年第6期551-553,共3页

目的制备重组Taq DNA聚合酶,为PCR提供试剂。方法用Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导12 h表达Taq DNA聚合酶,溶菌酶、NP40裂解细菌,硫酸铵沉淀、4℃透析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-... 目的制备重组Taq DNA聚合酶,为PCR提供试剂。方法用Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导12 h表达Taq DNA聚合酶,溶菌酶、NP40裂解细菌,硫酸铵沉淀、4℃透析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和PCR扩增分析其纯度和活性。结果分离纯化制备的Taq酶,纯度、活性都可与同类产品相比,能有效扩增DNA片段。结论该方法制备可用于PCR的Taq酶具有快速简便的优点。 展开更多

关键词 TAQ DNA聚合酶 基因工程 分离纯化

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转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用 被引量：4

7

作者 张俊河 张艳芳 +2 位作者 王芳 杨献军 王天云 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第18期8359-8361,共3页

[目的]探讨转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用。[方法]将PCR扩增得到的人β-珠蛋白MAR插入到真核表达载体pCATG的下游,构建转基因表达盒3′端含MAR的表达载体。酶切鉴定正确后,转染CHO细胞,G418筛选出稳定转化的... [目的]探讨转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用。[方法]将PCR扩增得到的人β-珠蛋白MAR插入到真核表达载体pCATG的下游,构建转基因表达盒3′端含MAR的表达载体。酶切鉴定正确后,转染CHO细胞,G418筛选出稳定转化的细胞株,ELISA分析转基因的表达水平,半定量PCR分析转基因相对拷贝数。[结果]结果表明,表达盒3′端含MAR序列能使转基因表达水平降低,其基因拷贝数则有一定程度的增加。转基因下游β-珠蛋白MAR在一定程度上能抑制外源基因的表达水平;外源基因表达量与基因拷贝数不成正比,未呈现出"拷贝数依赖性"。[结论]该研究结果为进一步研究MAR的调控机制奠定基础。 展开更多

关键词 核基质结合区 CHO细胞 转基因 报告基因

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人生长激素真核细胞瞬时表达及活性鉴定 被引量：1

8

作者 宋向凤 田中伟 +2 位作者 王辉 石太新 杨现军 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期210-211,共2页

目的　研究人生长激素真核细胞表达质粒在COS 1细胞的瞬时表达及活性鉴定。方法　将重组pcDNA3 GHcDNA用脂质体转染COS 1细胞 ,用免疫组织化学和ELISA法分别检测细胞和培养上清中生长激素(GH)的表达情况 ,用Jurkat细胞增殖法测定其生... 目的　研究人生长激素真核细胞表达质粒在COS 1细胞的瞬时表达及活性鉴定。方法　将重组pcDNA3 GHcDNA用脂质体转染COS 1细胞 ,用免疫组织化学和ELISA法分别检测细胞和培养上清中生长激素(GH)的表达情况 ,用Jurkat细胞增殖法测定其生物活性。结果　重组真核细胞表达质粒pcDNA3 GHcDNA转染的COS 1细胞分泌高浓度GH ,且具有明显的促进Jurkat细胞增殖能力。结论　pcDNA3 GHcDNA能够高效表达有活性的GH 。 展开更多

关键词 人生长激素 真核细胞表达 活性鉴定 免疫功能 基因治疗 Jurkat细胞增殖法

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2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较 被引量：2

9

作者 秦川 杨献军 +1 位作者 杨瑞 王天云 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第5期469-471,共3页

目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫... 目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。 展开更多

关键词 TAQ DNA聚合酶 表达 纯化

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PCR对弓形虫感染家兔血液中虫体DNA的动态检测 被引量：1

10

作者 秦川 刘世国 +1 位作者 姚志军 杨献军 《新乡医学院学报》 CAS 2006年第6期559-560,共2页

目的了解弓形虫感染家兔血液中是否有虫体存在，探明虫体在血液中动态变化情况。方法用不同剂量的RH株弓形虫速殖子经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集血液，抗凝处理后，-40℃冻存备用，用普通PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形... 目的了解弓形虫感染家兔血液中是否有虫体存在，探明虫体在血液中动态变化情况。方法用不同剂量的RH株弓形虫速殖子经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集血液，抗凝处理后，-40℃冻存备用，用普通PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA。结果5只家兔在感染后的6～14d死亡，仅1只家兔在感染后的6-72d，用PCR检测手段在血液中均可检测到弓形虫DNA。结论弓形虫感染雄兔血液中有虫体存在。 展开更多

关键词 弓形虫 血液 聚合酶链反应 家兔

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PCR法检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫基因片段 被引量：1

11

作者 秦川 王洪兴 《中国实用医刊》 2009年第22期13-14,共2页

目的用PCR法检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫基因片段。方法弓形虫RH株速殖子感染雄性家兔16只，在感染前后耳缘静脉采集血液标本，-40℃保存。用普通PCR检测血液标本中虫体DNA基因片段。结果普通PCR检测感染家兔总阳性率为45％。感染后... 目的用PCR法检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫基因片段。方法弓形虫RH株速殖子感染雄性家兔16只，在感染前后耳缘静脉采集血液标本，-40℃保存。用普通PCR检测血液标本中虫体DNA基因片段。结果普通PCR检测感染家兔总阳性率为45％。感染后第1周检出率仅22％，高峰期维持在感染后2～4周，检出率约为60％左右。其后检出率下降为25％左右并一直维持。结论采用血液作为样品进行弓形虫PCR检测时其最佳检测时间为感染后1～4周，其后检出率逐渐下降。 展开更多

关键词 家兔 血液 弓形虫 检测 聚合酶链反应

原文传递

三种测序DNA模板制备方法的比较

12

作者 秦川 张俊河 +1 位作者 Robert A. Mcknight 刘世国 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第15期2820-2822,共3页

背景:DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。目的:为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。方法:分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方... 背景:DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。目的:为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。方法:分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方法制备DNA测序模板进行测序。结果与结论:实验所采用的3种方法对于基因组DNA测序效果无差异(P>0.05)。对于甲基化DNA测序效果,96管集合板法优于其他2种方法(P<0.05)。说明3种方法均适用于基因组DNA的测序,而96管集合板法更适用于甲基化DNA的测序。 展开更多

关键词 基因组DNA 甲基化DNA 模板 DNA测序

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PCR-SSP方法在精神疾病分子研究水平中的应用

13

作者 杨瑞 宋晓荣 +1 位作者 秦川 杨献军 《新乡医学院学报》 CAS 2006年第3期223-225,共3页

目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,以推广其在精神疾病分子研究水平中的应用。方法应用PCR-SSP的方法分析TNFα-308A/G和-238G/A变异I、L-6-174G/C变异、CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异、COM... 目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,以推广其在精神疾病分子研究水平中的应用。方法应用PCR-SSP的方法分析TNFα-308A/G和-238G/A变异I、L-6-174G/C变异、CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异、COMT基因的第472位编码序列的G/A变异、MAOA基因位于第8外显子CDNA顺序的第941位点的G/T变异等基因的多态性。结果应用同一个PCR扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的多态性进行分析,基因型清晰,而且基因分型快速、准确。结论PCR-SSP适合对大样本、多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,快速、准确,值得在精神病分子水平的研究中推广。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 序列特异性引物 基因多态性 精神疾病

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聚合酶链反应-序列特异性引物方法检测儿科疾病基因多态性

14

作者 杨瑞 杨献军 +1 位作者 秦川 刘峻 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期687-688,共2页

目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,以推广其在儿科疾病分子水平研究中的应用。方法应用PCR-SSP的方法分析以下基因的多态性,TNF-α-308A/G和-238G/A变异,IL-6-174G/C变异。结果应用同一个PCR扩... 目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,以推广其在儿科疾病分子水平研究中的应用。方法应用PCR-SSP的方法分析以下基因的多态性,TNF-α-308A/G和-238G/A变异,IL-6-174G/C变异。结果应用同一个PCR扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的多态性进行分析,基因型清晰,且基因分型快速、准确。结论PCR-SSP适合对大样本、多基因的多态性进行分析,成本低、快速、准确,在儿科疾病分子水平研究中前景良好。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 序列特异性引物 多态性 单核苷酸

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人肿瘤浸润淋巴细胞用TNF－a基因作逆转录病毒的转导

15

作者 刘应现 朱洪波 蔡访勤 《河南医学研究》 CAS 1994年第4期289-294,共6页

通过逆转录病毒将肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）基因转导到取自卵巢癌和胰腺癌病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）。我们发现ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ（ＴＮＦ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平比新霉素磷酸转移酶基因转导的ＴＩＬ（ｎｅｏ－ＴＩＬ）... 通过逆转录病毒将肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）基因转导到取自卵巢癌和胰腺癌病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）。我们发现ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ（ＴＮＦ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平比新霉素磷酸转移酶基因转导的ＴＩＬ（ｎｅｏ－ＴＩＬ）产生的ＴＮＦ水平更高。尤其重要的是ＴＮＦ－ＴＩＬ对某些建株的肿瘤细胞株和自身肿瘤细胞的细胞毒性作用也比ｎｅｏ－ＴＩＬ更强。ＴＮＦ基因转导的ＴＩＬ有希望在临床上用于癌症的过继免疫治疗。 展开更多

关键词 基因转导 肿瘤 浸润淋巴细胞 细胞毒性 过继免疫

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