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一种基于琼脂糖凝胶电泳法检测SARS-CoV-2的新方法 被引量：5
1
作者 刘军花 李学龙 +3 位作者 刘茜阳 于琳 吴珊珊 尹秀山 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期51-54,共4页
鉴于琼脂糖凝胶电泳分析方法的准确、快速、简便等特性,优化后可以做为检出COVID-19病原的新方法。在不影响结果判读的情况下,通过对扩增时间及检测样本浓度进行优化,以达到预期目的。结果表明,检测SARS-CoV-2的最优反应程序为94℃预变... 鉴于琼脂糖凝胶电泳分析方法的准确、快速、简便等特性,优化后可以做为检出COVID-19病原的新方法。在不影响结果判读的情况下,通过对扩增时间及检测样本浓度进行优化,以达到预期目的。结果表明,检测SARS-CoV-2的最优反应程序为94℃预变性3 min;94℃变性时间、56℃退火时间及72℃延伸时间均降至5 s,且进行35个循环;最后72℃孵育5 min,最优模板用量比例(初始值设为4 ng)下限调整在(1:1000)^(1:5000)范围内。阳性样本测试结果符合预期。建立了一种简便、省时,适用于检测低载量病毒样本的新方法,为临床提供诊断参考。 展开更多
关键词 COVID-19(新型冠状病毒感染的肺炎-2019) SARS-CoV-2(严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2) PCR ORF1a/b基因 同源性 琼脂糖凝胶电泳法
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黄芪提取物对人脐带间充质干细胞成骨分化的作用及机制 被引量：1
2
作者 冯静雯 李东阳 +1 位作者 周慧 尹秀山 《解剖科学进展》 CAS 2023年第1期29-32,36,共5页
目的探究黄芪提取物(AS-EX)对人脐带血间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化的作用及可能机制。方法不同浓度AS-EX处理hUCMSCs,CCK-8检测细胞增殖活性,茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)染色检测hUCMSCs细胞成骨分化,Western blot检测成骨相关蛋白R... 目的探究黄芪提取物(AS-EX)对人脐带血间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化的作用及可能机制。方法不同浓度AS-EX处理hUCMSCs,CCK-8检测细胞增殖活性,茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)染色检测hUCMSCs细胞成骨分化,Western blot检测成骨相关蛋白RUNX2、OPN和COL I及IGF-1/IGF-1R信号通路相关蛋白IGF-1和IGF-1R表达,免疫荧光检测PAPP-A2蛋白表达;将PAPP-A2 siRNA转染AS-EX处理的hUCMSCs,通过Western blot检测PAPP-A2、IGF-1、IGF-1R、RUNX2、OPN和COL I蛋白表达。结果黄芪提取物剂量依赖的促进hUCMSCs细胞增殖,增加细胞钙化结节形成和ALP染色,增加细胞PAPP-A2、IGF-1、IGF-1R、RUNX2、OPN和COL I蛋白表达;沉默PAPP-A2降低AS-IV处理的hUCMSCs细胞PAPP-A2、IGF-1、IGF-1R、RUNX2、OPN和COL I蛋白表达。结论AS-IV在体外促进hUCMSCs细胞增殖及成骨分化,这可能与其上调hUCMSCs细胞PAPP-A2表达,激活IGF-1/IGF-1R信号通路有关。 展开更多
关键词 黄芪提取物 人脐带血间充质干细胞 PAPP-A2 IGF-1/IGF-1R通路 成骨
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一种基于荧光qPCR检测新型冠状病毒核酸的优化反应体系的建立及相关测试 被引量：3
3
作者 李学龙 刘军花 +3 位作者 刘茜阳 于琳 吴珊珊 尹秀山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期732-739,共8页
为实时并快速地检出SARS-CoV-2冠状病毒RNA,对基于荧光定量聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)的反应体系进行了优化。结果表明,按照本实验提供的方法操作后,检测SARS-CoV-2冠状病毒所用的RNA样本的最小浓度稀释度可调至1/10... 为实时并快速地检出SARS-CoV-2冠状病毒RNA,对基于荧光定量聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)的反应体系进行了优化。结果表明,按照本实验提供的方法操作后,检测SARS-CoV-2冠状病毒所用的RNA样本的最小浓度稀释度可调至1/10000(初始值设为10ng/μL)。且用于检测COVID-19临床阳性样本所测得循环值(Cycle threshold,Ct)均低于35或40。其灵敏性测试结果也表明该方法的敏感性较好。同时在同等条件下,与目前市场上的COVID-19试剂盒的检测结果基本一致,并且检测循环数缩短2个单位。因此,本实验所建立的体系适用于前期临床诊断的筛查工作,为在医学上实现快速诊断提供了工具。 展开更多
关键词 新型冠状病毒感染的肺炎-2019(COVID-19) 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2) N基因 ORF1a基因 荧光实时定量PCR
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