幽门螺杆菌感染与胃癌组织环氧合酶2表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达 被引量：16

1

作者 肖炜明 丁岩冰 +2 位作者 施瑞华 龚卫娟 薛艳 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期668-671,共4页

目的探讨环氧合酶2（COX-2）、表皮生长因子受体（EGFR）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中的表达，三者间的相关性及其与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法采用免疫组化法检测61例胃癌组织及相应的20例癌旁组织中COX-2、EGFR和V... 目的探讨环氧合酶2（COX-2）、表皮生长因子受体（EGFR）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中的表达，三者间的相关性及其与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法采用免疫组化法检测61例胃癌组织及相应的20例癌旁组织中COX-2、EGFR和VEGF的表达；采用Westernblot方法检测10例胃癌组织及其相应癌旁组织中COX-2、EGFR和VEGF蛋白的表达；用快速尿素酶诊断法和^13C呼气试验检测47例胃癌患者Hp感染状况。结果免疫组化检测结果显示，COX-2、EGFR和VEGF在胃癌组织中的阳性表达率分别为59．02％、36．07％、60．66％，均明显高于癌旁组织（分别为25．00％、0和30．00％；均P〈0．05），三者在胃癌组织中的表达且呈正相关。COX-2和EGFR在Hp感染阳性胃癌组织中的阳性表达率分别为75．76％和45．45％，高于Hp感染阴性者（28．57％和14．29％；均P〈0．05）。Western blot检测结果表明，胃癌组织中COX-2、EGFR和VEGF的灰度值分别为51．29±23．42、35．89±12．50和48．55±10．33，均显著高于癌旁组织（均P〈0．05）。结论COX-2、EGFR和VEGF在胃癌组织中高表达，Hp感染可能上调胃癌组织中COX-2、EGFR的表达。 展开更多

关键词 胃肿瘤 COX-2 EGFR VEGF 幽门螺杆菌

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胃癌组织EGFR和COX-2的表达与幽门螺杆菌感染关系 被引量：2

2

作者 肖炜明 施瑞华 +3 位作者 丁岩冰 龚卫娟 薛艳 李强 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期449-452,共4页

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)、环氧化酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达及其相关性,并探究它们与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法:采用免疫组化EnVision两步法检测47例胃癌组织及相应的20例癌旁组织EGFR、COX-2的表达;用快速尿... 目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)、环氧化酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达及其相关性,并探究它们与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法:采用免疫组化EnVision两步法检测47例胃癌组织及相应的20例癌旁组织EGFR、COX-2的表达;用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验两种方法检测胃癌患者H.pylori感染状况。结果:胃癌组织中EGFR、COX-2的阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.01);EGFR、COX-2在胃癌中表达呈正相关(P<0.05)。有H.pylori感染的胃癌组织中EGFR、COX-2的阳性表达率较未感染的胃癌组织中高(P<0.01)。结论:EGFR、COX-2在胃癌组织中高表达且有相关性,H.pylori感染可能上调胃癌组织中EGFR、COX-2的表达。 展开更多

关键词 胃癌 EGFR COX-2 幽门螺杆菌 相关性

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人工抗原提呈细胞体外激活肝癌CD8^+T细胞 被引量：1

3

作者 夏士珊 向晓星 龚卫娟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期148-153,共6页

目的:探讨人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)K32/4-IBBL/CD86对肝癌CD8+T细胞的活化作用。方法:磁珠法分选HLA-A 2阳性肝癌患者外周血CD8+T细胞,aAPC与CD8+T细胞按不同比例(1∶1、1∶2、1∶3)混合培养,诱导CT... 目的:探讨人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)K32/4-IBBL/CD86对肝癌CD8+T细胞的活化作用。方法:磁珠法分选HLA-A 2阳性肝癌患者外周血CD8+T细胞,aAPC与CD8+T细胞按不同比例(1∶1、1∶2、1∶3)混合培养,诱导CTL。锥虫蓝拒染法测定CTL的生长曲线,MTS/PMS法检测CTL的增殖,流式细胞术检测CTL分泌IFN-γ的能力,MTT法检测CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞的杀伤作用。结果:肝癌患者外周血CD8+T细胞经aAPC作用后,增殖能力明显增强,按1∶1、1∶2、1∶3比例混合培养后第8天分别为(21.2±2.5)×105、(17.6±3.2)×105、(15.3±2.8)×105,明显高于对照组的(8.5±0.15)×105(P<0.01),混合培养后分泌IFN-γ的CTL比例分别为(26.2±1.91)%、(21.3±1.38)%、(18.6±1.20)%,明显高于对照组的(0.1±0.02)%(P<0.01)。aAPC活化的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率较对照组显著增强,按1∶3混合培养后得到的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率分别为(21.8±4.3)%和(25.6±3.6)%,明显高于对照组的(3.8±1.8)%和(3.8±2.0)%(P<0.01);效靶比为50∶1时,1∶1混合培养组CTL对BEL7402细胞的杀伤率(56.8±3.0)%和对自体肝癌细胞的杀伤率(64.8±4.2)%明显高于1∶2混合培养组的(44.3±2.6)%、(56.1±3.4)%和1∶3混合培养组的(38.9±4.7)%、(46.2±4.7)%(P<0.05)。结论:aAPC在体外可高效活化肝癌患者CD8+T细胞,诱导CTL分泌IFN-γ,且CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞具有明显的杀伤作用。 展开更多

关键词 人工抗原提呈细胞 肝癌 CD8+T细胞 CTL IFN-Γ

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胃癌组织中EGFR和COX-2表达的意义及其相关性 被引量：14

4

作者 肖炜明 施瑞华 +3 位作者 丁岩冰 龚卫娟 丁永玲 薛艳 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期123-128,共6页

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）和环氧化酶-2（COX-2）的表达与胃癌侵袭、转移因素的关系以及EGFR与COX-2在胃癌组织中表达的相关性．方法：用免疫组化的方法检测61例胃癌组织和相应的20例癌旁组织石蜡切片中EGFR、COX-2表达情况；... 目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）和环氧化酶-2（COX-2）的表达与胃癌侵袭、转移因素的关系以及EGFR与COX-2在胃癌组织中表达的相关性．方法：用免疫组化的方法检测61例胃癌组织和相应的20例癌旁组织石蜡切片中EGFR、COX-2表达情况；用Western blot方法检测10例胃癌组织和相应的癌旁组织中EGFR、COX-2蛋白的表达．结果：免疫组化检测胃癌组织中EGFR及COX-2的阳性表达率分别为36．07％、59．02％均明显高于癌旁组织的0％、25％（x^2=9．903，P〈0．01：x^2=6．972，P〈0．01）；COX-2表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和病理分化程度有关（x^2=6．333，P〈O．05；x^2=5．588，P〈0．05；x^2=8．826，P〈0．01；x^2=5．653，P〈0．05）．EGFR表达与淋巴结转移和TNM分期有关（f=10．648，P〈0．01;x^2=4．150，P〈0．05）．EGFR与COX-2表达呈明显相关（r=0．316，P〈0．05）．Western blot方法检测胃癌组织中EGFR及COX-2的蛋白表达高于癌旁组织（35．89±12．50vs15．14±2．15，P〈0．01：51．29±23．42vs27．65±7．42．P〈0．05）．结论：EGFR、COX-2在胃癌组织中高表达，EGFR、COX-2的表达与胃癌的侵袭、转移密切有关，COX-2表达与EGFR显著相关． 展开更多

关键词 胃癌 表皮生长因子受体 环氯合酶-2 相关性 侵袭 转移

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bcr-abl基因疫苗对小鼠SP2/0/bcr-abl移植瘤的影响 被引量：7

5

作者 姜扬文 钱莉 +3 位作者 蒋桂花 刘伟 龚卫娟 季明春 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期800-803,共4页

为了研究bcr-abl融合基因疫苗对小鼠SP2/0/bcr-abl移植瘤的影响,采用pVbcr-abl、pVbcr-abl/mIL7两种质粒分别免疫BALB/c小鼠,然后用SP2/0/bcr-abl细胞攻击免疫小鼠,观察疫苗对SP2/0/bcr-abl移植瘤生长的影响,检验其是否具有免疫保护作... 为了研究bcr-abl融合基因疫苗对小鼠SP2/0/bcr-abl移植瘤的影响,采用pVbcr-abl、pVbcr-abl/mIL7两种质粒分别免疫BALB/c小鼠,然后用SP2/0/bcr-abl细胞攻击免疫小鼠,观察疫苗对SP2/0/bcr-abl移植瘤生长的影响,检验其是否具有免疫保护作用。结果表明用基因疫苗免疫的两个实验组与两个对照组(空白对照组和空载体对照组)相比,在移植肿瘤形成时间、肿瘤表面破溃时间、肿瘤体积、荷瘤生存期等指标上均存在明显差异。pVbcr-abl/mIL7免疫小鼠组的荷瘤生存时间比pVbcr-abl免疫组相对延长。常规病理学分析发现,对照组小鼠的移植瘤组织比较致密,瘤细胞体积较大,形状不规则,而两个免疫组的肿瘤组织较为疏松,肿瘤细胞体积相对较小,并有大量炎性细胞浸润。两个对照组小鼠的肝脏组织内发现有大量肿瘤转移灶,而两个免疫组小鼠则未发现。结论接受bcr-abl基因疫苗免疫的小鼠被诱导产生较强的特异性免疫保护力,对SP2/0/bcr-abl移植瘤的体内生长有一定抑制能力。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR-ABL融合基因 基因疫苗 SP2/0/bcr-abl移植瘤

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利用流式细胞仪检测人外周血NK细胞毒性方法的建立 被引量：4

6

作者 张俊 钱亚云 +2 位作者 龚卫娟 胡茂志 季明春 《实用临床医药杂志》 CAS 2006年第4期28-31,35,共5页

目的利用流式细胞仪(FACS)技术检测人外周血NK细胞的毒性。方法首先将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆化,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的K562细胞。取对数期的K562-EGFP细胞与人外周血单个核... 目的利用流式细胞仪(FACS)技术检测人外周血NK细胞的毒性。方法首先将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆化,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的K562细胞。取对数期的K562-EGFP细胞与人外周血单个核细胞分别按5∶1、10∶1、20∶1、40∶1的比例混合,分别孵育0.5、1、2、4 h后用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率。结果0.5、1、2、4 h均能得到明显的杀伤效果,而且以2h的杀伤率最高。此时杀伤率与传统乳酸脱氢酶法(LDH)具有显著相关性(γ=0.997,P=0.003),而且显示出更强的敏感性。结论利用流式细胞仪检测NK细胞毒活性的方法可作为传统51Cr释放法、LDH法的一个补充,而且具有经济、快速和敏感的特点。 展开更多

关键词 流式细胞仪 NK细胞 细胞毒性 K562-EGFP

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稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系的建立 被引量：4

7

作者 姜扬文 钱莉 +4 位作者 刘伟 龚卫娟 万兵 管俊 季明春 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期601-604,共4页

为了建立稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞系,从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进逆转录病毒载体pLXSN中。脂质体介导重组逆转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,采用G418筛选后获得稳... 为了建立稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞系,从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进逆转录病毒载体pLXSN中。脂质体介导重组逆转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,采用G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞。收集病毒感染NIH/3T3细胞,加G418筛选后进行逆转录病毒滴度的测定,计算病毒效价为2×107CFU/ml。结果表明,收集病毒上清感染SP2/0细胞(H-2d),经G418筛选获得了稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞株。经特异性PCR扩增和RT-PCR反应扩增,从基因组整合和基因表达水平证实获得了能稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系。结论:成功建立了表达bcr-abl融合基因的鼠SP2/0细胞系,这一肿瘤细胞模型可作为研究bcr-abl基因疫苗的有效实验工具,为检验bcr-abl基因疫苗激发小鼠CTL应答的研究奠定物质基础。 展开更多

关键词 慢性髓性白血病 bcr—abl融合基因 基因疫苗 实验细胞模型

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MICA基因多态性及血清可溶性MICA浓度与结肠癌的相关性研究 被引量：4

8

作者 龚卫娟 肖炜明 +2 位作者 龚春香 田芳 季明春 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期335-339,共5页

目的 观察主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因A（major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene A,MICA）全长多态性与结肠癌的发病是否关联,以及血清可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类相关抗原A（major histocomptctibil... 目的 观察主要组织相容性复合体Ⅰ类相关基因A（major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene A,MICA）全长多态性与结肠癌的发病是否关联,以及血清可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类相关抗原A（major histocomptctibility complex class Ⅰ chain-related antigen A,MICA）浓度与结肠癌发病及病程的相关性.方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物及DNA测序分型方法,分析江苏扬州地区117例结肠癌患者和113名健康个体的MICA基因全长多态性及其编码分子第129位氨基酸残基的变化.血清可溶性MICA浓度通过酶联免疫吸附试验方法测定.结果 结肠癌患者和正常群体胞外区和跨膜区MICA等位基因的分布差异均无统计学意义,MICA跨膜区等位基因在不同病期结肠癌患者的分布差异亦无统计学意义.而结肠癌患者群体内MICA第129位氨基酸残基为蛋氨酸的频率显著降低;可溶性MICA浓度在Duke＇s C和D期患者血清内显著升高.结论 MICA等位基因多态性与结肠癌的发病及进展没有关联,但血清可溶性MICA浓度的检测可作为判断结肠癌预后的指标之一. 展开更多

关键词 MICA基因 遗传多态性 结肠癌 可溶性MICA

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重组可溶性MHCI类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响 被引量：2

9

作者 龚卫娟 王海洋 +3 位作者 范敏其 龚春香 刘丹 季明春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期903-906,共4页

目的:研究体外重组可溶性MHCI类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响。方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓... 目的:研究体外重组可溶性MHCI类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响。方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况。结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响。结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能。 展开更多

关键词 MHCI类相关蛋白A NK细胞 细胞毒活性 增殖 凋亡

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基于CD_(107a)标记流式细胞仪检测NK细胞毒性方法的建立 被引量：4

10

作者 龚春香 王长荣 +2 位作者 龚卫娟 胡茂志 季明春 《实用临床医药杂志》 CAS 2010年第7期23-26,31,共5页

目的建立基于CD107a标记、利用流式细胞仪检测NK细胞毒性的方法。方法首先将外周血单个核细胞(PBM-Cs)与K562细胞以3∶1比例混合,2 h后加入莫能菌素,1.5 h后加入CD107a和CD56标记抗体,流式细胞仪分析CD107a阳性细胞的频率。其次观察CD1... 目的建立基于CD107a标记、利用流式细胞仪检测NK细胞毒性的方法。方法首先将外周血单个核细胞(PBM-Cs)与K562细胞以3∶1比例混合,2 h后加入莫能菌素,1.5 h后加入CD107a和CD56标记抗体,流式细胞仪分析CD107a阳性细胞的频率。其次观察CD107a抗体孵育时间、不同效靶比例对CD107a阳性细胞检测的影响。最后观察该方法与传统LDH释放法检测NK细胞毒活性的一致性。结果 NK细胞活化后可在其表面检测到高水平表达的CD107a分子,效靶细胞孵育结束后加入CD107a抗体可降低检测背景,低效靶比例同样具有检测敏感性。该方法与LDH释放法的检测结果一致。结论利用CD107a抗体标记检测NK细胞毒活性的方法具有快速、敏感、所需效应细胞少的优点。 展开更多

关键词 CD107a NK细胞 毒性

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TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究 被引量：2

11

作者 万兵 季明春 +1 位作者 龚卫娟 张雁云 《实用临床医药杂志》 CAS 2007年第2期32-35,共4页

目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD... 目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中,尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加,小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高,肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降,运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl-xL在肾组织中的表达水平,减少肾小管上皮细胞凋亡,有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用,阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。 展开更多

关键词 TNF-Α 叶酸 抗TNF-α抗体 肾小管上皮细胞 凋亡 Bel-xL

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HPV L1壳蛋白与p16^(INK4A)联合检测在宫颈癌前病变诊断中的应用 被引量：4

12

作者 王磊 季明春 +1 位作者 丁永玲 李家驭 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期439-441,共3页

目的探讨HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及临床意义。方法选择经薄层液基细胞学(TCT)及宫颈活检检查患者226例,根据宫颈活检病理诊断分为炎症组、CIN组、鳞形细胞癌(SCC)组。TCT标本检测HPV L1壳蛋白的表... 目的探讨HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及临床意义。方法选择经薄层液基细胞学(TCT)及宫颈活检检查患者226例,根据宫颈活检病理诊断分为炎症组、CIN组、鳞形细胞癌(SCC)组。TCT标本检测HPV L1壳蛋白的表达,宫颈活检标本检测p16INK4A的表达,将检测结果行相关分析。结果病理分级与HPV L1壳蛋白阳性率呈负相关(P<0.01),与p16INK4A阳性率呈正相关(P<0.01)。与SCC组比较,CIN组HPV L1壳蛋白阳性率明显升高,而p16INK4A阳性率明显降低(P<0.01,P<0.05)。结论 HPV L1壳蛋白与p16INK4A均可作为CIN辅助诊断的生物标志物。联合检测时,HPV L1(+)/p16INK4A(-)提示宫颈病变无进展或有消退的可能。 展开更多

关键词 HPV L1 P16INK4A 宫颈癌 癌前病变

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2019年度国家自然科学基金临床肿瘤研究方向分析及思考 被引量：2

13

作者 宋永喜 冯玉宽 +7 位作者 洪雪辉 金雅琼 戴洁 陈怡文 蔺志杰 夏庆华 刘莹 吕群燕 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期202-207,共6页

随着细胞生物学等学科的不断发展和深入,肿瘤学基础研究取得了一定进展,肿瘤学科申请项目数量及质量也逐渐提高。本文总结2019年度国家自然科学基金临床肿瘤学科面上项目、青年科学基金项目以及地区科学基金项目的申请与资助情况,并从... 随着细胞生物学等学科的不断发展和深入,肿瘤学基础研究取得了一定进展,肿瘤学科申请项目数量及质量也逐渐提高。本文总结2019年度国家自然科学基金临床肿瘤学科面上项目、青年科学基金项目以及地区科学基金项目的申请与资助情况,并从不同角度深入分析面上项目的研究方向,针对临床肿瘤中非编码RNA、肿瘤免疫治疗、肿瘤微环境、肿瘤代谢等代表性研究方向,以及淋巴管新生、细胞焦亡及铁死亡、溶酶体及线粒体等研究前沿进行综述。 展开更多

关键词 国家自然科学基金 临床肿瘤 研究方向 数据分析

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Bcr-abl融合基因片段的克隆及在原核细胞中的融合表达 被引量：3

14

作者 姜扬文 季明春 钱莉 《临床血液学杂志》 CAS 2004年第1期29-31,共3页

目的 :克隆和表达Bcr abl融合基因融合位点周围的基因片段。方法 :以慢性粒细胞白血病 (CML)K5 6 2细胞株总RNA作为模板 ,采用RT PCR方法扩增包含Bcr abl(b3a2 )融合位点周围的基因片段。将RT PCR产物按正确的阅读框架 ,定向克隆进pGEX ... 目的 :克隆和表达Bcr abl融合基因融合位点周围的基因片段。方法 :以慢性粒细胞白血病 (CML)K5 6 2细胞株总RNA作为模板 ,采用RT PCR方法扩增包含Bcr abl(b3a2 )融合位点周围的基因片段。将RT PCR产物按正确的阅读框架 ,定向克隆进pGEX 6P 1载体谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)的下游 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1菌株 ,以 1.0mmol/LIPTG诱导Bcr abl融合基因片段的表达。结果 :原核细胞融合表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,证实该融合蛋白为 4 2 0 0 0大小。用该表达产物免疫ICR小鼠 ,所制备的抗血清可与K5 6 2细胞特异性结合。结论 :原核细胞表达的p4 2 Bcr abl融合蛋白具有p2 10 Bcr abl融合蛋白的特异抗原性 ,为进一步实验研究奠定了基础。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR-ABL融合基因 融合表达 特异抗原性 原核细胞 基因克隆 基因表达

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调节性B细胞在肿瘤中的研究进展 被引量：3

15

作者 陈煜璐(综述) 钱莉(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1023-1028,共6页

调节性B细胞(Breg)是近年来新发现的B细胞功能型亚群,其通过分泌白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-35(IL-35)和转化生长因子-β(TGF-β)等负向调节因子抑制机体免疫应答,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,影响肿瘤的发展、侵袭和转移。在... 调节性B细胞(Breg)是近年来新发现的B细胞功能型亚群,其通过分泌白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-35(IL-35)和转化生长因子-β(TGF-β)等负向调节因子抑制机体免疫应答,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,影响肿瘤的发展、侵袭和转移。在肝癌、胃癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌等多种常见癌中均发现存在具有促癌效应的Breg。Breg和肿瘤的临床分期、治疗、预后存在一定的相关性。靶向Breg可能成为未来肿瘤免疫治疗的一个新方向。 展开更多

关键词 调节性B细胞 肿瘤治疗 免疫抑制 癌症 白细胞介素-10 白细胞介素-35 转化生长因子-Β

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小鼠CD86基因启动子的构建及活性分析 被引量：1

16

作者 范敏其 龚卫娟 +3 位作者 龚春香 肖炜明 丁岩冰 季明春 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期359-363,共5页

为构建小鼠CD86启动子,并对其特异性调控能力进行鉴定。首先自C57BL/6J小鼠基因组中采用高保真PCR扩增小鼠CD86基因的启动子,经测序鉴定后,插入pCDNA3.1-EGFP重组质粒。然后分别转染小鼠来源细胞株:RAW264.7、NIH/3T3、P815、SP2/0、EL... 为构建小鼠CD86启动子,并对其特异性调控能力进行鉴定。首先自C57BL/6J小鼠基因组中采用高保真PCR扩增小鼠CD86基因的启动子,经测序鉴定后,插入pCDNA3.1-EGFP重组质粒。然后分别转染小鼠来源细胞株:RAW264.7、NIH/3T3、P815、SP2/0、EL4细胞,观察各细胞内绿色荧光蛋白的表达。结果显示,小鼠CD86基因启动子的序列与GenBank报道一致;双酶切鉴定证实小鼠CD86启动子序列已经克隆入重组载体;小鼠CD86启动子能调控EGFP在巨噬细胞系RAW264.7细胞中表达,不能调控EGFP在NIH/3T3、P815、SP2/0和EL4非抗原提呈细胞内表达。说明成功构建小鼠CD86基因启动子,且该启动子具有特异性调控目的基因表达的活性。 展开更多

关键词 构建 小鼠CD86启动子 分子克隆 表达

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bcr-abl融合基因真核表达载体诱导小鼠特异性免疫应答 被引量：2

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作者 姜扬文 钱莉 +3 位作者 龚卫娟 刘伟 蒋桂花 季明春 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期111-115,共5页

目的在小鼠体内外研究bcr-abl融合基因真核表达载体诱导的特异性免疫应答,探索肿瘤免疫治疗的新途径。方法构建表达bcr-abl融合基因cDNA片段的真核细胞质粒pVbcr-abl,将 pVbcr-abl质粒用纳米颗粒聚乙烯亚胺包裹后给BALB／c小鼠肌内注射... 目的在小鼠体内外研究bcr-abl融合基因真核表达载体诱导的特异性免疫应答,探索肿瘤免疫治疗的新途径。方法构建表达bcr-abl融合基因cDNA片段的真核细胞质粒pVbcr-abl,将 pVbcr-abl质粒用纳米颗粒聚乙烯亚胺包裹后给BALB／c小鼠肌内注射,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。小鼠免疫后20 d皮下接种具有相同遗传背景的SP2／0／ber-abl细胞(H-2~d),观察小鼠生存情况、移植肿瘤的生长情况和肿瘤细胞浸润情况。利用免疫组织化学方法观察肿瘤组织中T淋巴细胞浸润情况;流式细胞术分析免疫小鼠脾脏T细胞亚群的变化;LDH释放法检测脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果成功构建真核表达载体pVbcr-abl,bcr-abl融合基因cDNA片段在真核细胞中可得到高效表达。pVbcr-abl免疫BALB／c小鼠能激活机体免疫系统,诱导产生特异性抗体和特异性CTL活性,并形成特异性免疫保护力。免疫小鼠的移植肿瘤形成时间、表面出现破溃时间、生长速度明显降低,荷瘤生存时间明显延长。免疫小鼠移植肿瘤组织中有大量CD3^+T细胞浸润。免疫小鼠的脾细胞杀伤SP2／0／bcr-abl细胞的细胞毒活性明显升高。小鼠脾脏T细胞亚群发生改变,CIM^+／ CD8^+细胞比值升高到1．54±0．29。结论pVbcr-abl真核表达载体除能在小鼠体内诱导产生特异性抗体以外,还能诱导高水平特异性CTL活性,直接杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的生长速度。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 融合蛋白质类 bcr/abl 遗传载体 免疫疗法 主动

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结肠癌患者单核或树突状细胞MICA的表达及其与NK细胞活性的关联 被引量：1

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作者 龚卫娟 龚春香 +3 位作者 肖炜明 杨悌 钱莉 季明春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期256-260,共5页

目的:观察结肠癌患者单核或树突状细胞是否表达MHCⅠ类相关抗原A(MICA),并分析MICA+单核细胞的频率是否与患者体内NK细胞的活性相关联。方法:首先利用流式细胞仪检测MICA在外周血单核细胞和由单核细胞诱导而来树突状细胞(DCs)上的表达;... 目的:观察结肠癌患者单核或树突状细胞是否表达MHCⅠ类相关抗原A(MICA),并分析MICA+单核细胞的频率是否与患者体内NK细胞的活性相关联。方法:首先利用流式细胞仪检测MICA在外周血单核细胞和由单核细胞诱导而来树突状细胞(DCs)上的表达;并用IL-15和IFNα-刺激树突状细胞,观察MICA表达的变化;然后检测患者外周血NKG2D+、CD16+、CD69+NK细胞的频率及NK细胞的杀伤活性;最后分析MICA+单核细胞的频率是否与NK细胞表达NKG2D及其杀伤活性关联。结果:与健康个体相比,结肠癌患者MICA+单核细胞的频率无显著变化。未成熟DCs表达MICA,但受IL-15和IFNα-刺激后,结肠癌来源的DCs表面MICA的表达无显著上调。结肠癌患者外周血NKG2D+、CD69+NK细胞的频率显著降低,NK细胞的杀伤活性显著降低,而CD16+NK细胞的频率无明显变化。结肠癌患者MICA+单核细胞的频率与NK细胞表达NKG2D无明显关联,但与NK细胞杀伤靶细胞时CD107a的表达正相关。结论:结肠癌患者体内单核细胞表达MICA与NK细胞表达NKG2D无关,但高频率MICA阳性的单核细胞与NK细胞的抗肿瘤活性正相关。 展开更多

关键词 MICA 树突状细胞 NK细胞 结肠癌

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RANTES拮抗剂的研究进展 被引量：2

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作者 姚玲 龚卫娟 季明春（审校） 《国际免疫学杂志》 CAS 2006年第3期149-152,共4页

RANTES具有多种生物学活性,不仅对多种细胞有趋化作用,还能增强细胞毒作用。人们试图采用RANTES类似物开发RANTES拮抗剂,RANTES拮抗剂对治疗慢性炎症、减轻移植排斥反应、抑制HIV感染等方面有重要意义。以下就RANTES拮抗剂的研究进展作... RANTES具有多种生物学活性,不仅对多种细胞有趋化作用,还能增强细胞毒作用。人们试图采用RANTES类似物开发RANTES拮抗剂,RANTES拮抗剂对治疗慢性炎症、减轻移植排斥反应、抑制HIV感染等方面有重要意义。以下就RANTES拮抗剂的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 RANTES 拮抗剂

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p210^(bcr-abl)抗原的T细胞表位鉴定及其特异性CTL细胞检测 被引量：1

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作者 张俊 王丽珩 +3 位作者 龚卫娟 钱亚云 姜扬文 季明春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1161-1163,1166,共4页

目的:探讨p210bcr-abl抗原的免疫原性,预测并鉴定该蛋白来源的HLA-A2限制性T细胞表位,并在慢性粒细胞白血病患者中检测其特异性CTL细胞分布。方法:首先利用生物信息学软件预测并选取2个p210bcr-abl来源的表位:BCR-ABL642与BCR-ABL926m;T... 目的:探讨p210bcr-abl抗原的免疫原性,预测并鉴定该蛋白来源的HLA-A2限制性T细胞表位,并在慢性粒细胞白血病患者中检测其特异性CTL细胞分布。方法:首先利用生物信息学软件预测并选取2个p210bcr-abl来源的表位:BCR-ABL642与BCR-ABL926m;T2细胞亲和力实验鉴定短肽与HLA-A2分子的亲和力;然后制备分别锚合这2种表位的可溶性HLA-A2四聚体,流式检测术检测其特异性CTL细胞在CML患者外周血CD8+T细胞中的频率。结果:与健康人群相比,BCR-ABL642和BCR-ABL926m肽表位限制性CTL细胞的频率在CML患者均明显升高(P<0.01);而来自流感病毒短肽的特异性CTL细胞在两个群体中无统计学差异(P>0.05);另外,BCR-ABL642特异性CTL细胞的频率在CML慢性期和急变期之间有统计学差异(P<0.05)。结论:所选2种肽表位均具有免疫原性,可建立基于这2种短肽的免疫治疗措施。 展开更多

关键词 p210bcr-abl 表位 可溶性HLA四聚体 CTL 慢性粒细胞白血病

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