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重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达 被引量：3
1
作者 何太平 唐菁燕 +5 位作者 徐珑 宋春雷 谭晓晶 聂艳桃 杨波 雷韬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1409-1412,共4页
目的在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)。方法用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSHα和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选... 目的在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)。方法用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSHα和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选并建立稳定表达工程细胞株,并对工程细胞的生长和表达进行分析。结果重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH经双酶切和测序证明构建正确;转染CHO细胞获得高的阳性克隆率(80.65%),经MTX加压和克隆筛选获得稳定表达工程细胞株D5;D5细胞株在无血清摇瓶批次培养中FSH的表达量为2.5 IU/ml,在培养参数可控的生物反应器中FSH的表达量为摇瓶中的2倍多,达6 IU/ml。结论建立了一种在CHO细胞中表达异二聚体糖蛋白的方法,获得的工程细胞适应无血清培养且易于扩大培养,在生物反应器中可获得高的表达量,且具有进一步优化提高表达量的潜力。 展开更多
关键词 促卵泡激素 异二聚体糖蛋白 CHO细胞 培养基 无血清
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抗调亡基因bcl-xl过表达提高工程细胞IVCC及目的蛋白表达的研究 被引量：3
2
作者 何太平 唐菁燕 +3 位作者 宋春雷 聂艳桃 雷韬 杨波 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期674-679,共6页
用无血清培养基或化学成分明确的培养基生产治疗用重组蛋白已成为趋势。然而,在此条件下凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白的表达十分困难,其主要原因之一是在细胞培养过程中工程细胞大量凋亡造成的细胞密度低和生存期短。通过将早期抗... 用无血清培养基或化学成分明确的培养基生产治疗用重组蛋白已成为趋势。然而,在此条件下凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白的表达十分困难,其主要原因之一是在细胞培养过程中工程细胞大量凋亡造成的细胞密度低和生存期短。通过将早期抗凋亡基因导入工程细胞并进行过表达可改善工程细胞的活细胞密度积分(integral viable cell concentration,IVCC),提高表达量。该研究将bcl-xl基因导入工程细胞,筛选其高表达细胞株,并验证工程细胞的抗凋亡能力,获得了稳定表达抗凋亡蛋白和目的蛋白的工程细胞株。与母细胞相比,稳定表达Bcl-xL的工程细胞的IVCC提高了50%,最终目的蛋白表达增加超过200%,显示抗凋亡基因bcl-xl的过表达可改善工程细胞在无血清悬浮培养过程中的细胞凋亡,提高表达量,为表达人凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞凋亡 BCL-XL CHO细胞 无血清培养基 糖蛋白 表达
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重组复杂蛋白快速表达体系的建立 被引量：2
3
作者 何太平 杨波 +5 位作者 谭晓晶 唐菁燕 雷韬 宋春雷 聂艳桃 徐珑 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第11期1259-1263,共5页
目的建立重组复杂蛋白快速表达体系。方法利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析。结果通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库;X-Fc融合蛋白和人FⅧ... 目的建立重组复杂蛋白快速表达体系。方法利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析。结果通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库;X-Fc融合蛋白和人FⅧ均在宿主细胞中获得了高表达,X-Fc融合蛋白的表达量为220 mg/L,人FⅧ在有血清培养条件下的酶活性为2 IU/ml,且细胞株表达稳定,易于扩大培养。结论已成功建立了基于CHO细胞定点整合的重组复杂蛋白快速表达体系,该体系在克隆效率和时间上具有很大优势,可实现蛋白的有效快速表达。 展开更多
关键词 重组蛋白 CHO细胞 定点整合 快速表达
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