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绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：9
1
作者 冯旭飞 王远微 +1 位作者 李定霏 杨发龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期788-791,共4页
为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法。实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO(135 bp)和Mh(227 bp)DNA片段,... 为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法。实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO(135 bp)和Mh(227 bp)DNA片段,其最低检出量分别为2.06×103拷贝/μL和6.37 cfu/mL,与单一PCR相同。该方法对常见的致病菌无交叉反应。对临床样本的检测结果显示MO和Mh的检出率分别为56.25%和52.50%,与单独PCR符合率为100%。研究结果表明,本研究所建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高等特点,为临床上MO和Mh混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了方便、快捷、准确的方法。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 溶血性曼氏杆菌 双重PCR
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绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达 被引量：6
2
作者 冯旭飞 刀筱芳 +2 位作者 张贤宇 李定霏 杨发龙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第2期20-22,26,共4页
为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p... 为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p146高度同源;克隆基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P128蛋白是良好的免疫原。研究结果为进一步分析其功能及绵羊肺炎支原体血清学诊断技术的建立提供了有用的信息。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 p128基因 序列分析 原核表达
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浅析《动物检疫管理办法》第五十二条存在的问题 被引量：2
3
作者 曹成易 《中国水产》 北大核心 2010年第6期31-33,共3页
前不久,本刊编辑部收到一封来自成都的读者来信。来信中就近期正式施行的《动物检疫管理办法》第五十二条中存在的若干问题作了详细而深入的分析和探讨。作者认为,该《办法》第五十二条:"水产苗种产地检疫,由地方动物卫生监督机构... 前不久,本刊编辑部收到一封来自成都的读者来信。来信中就近期正式施行的《动物检疫管理办法》第五十二条中存在的若干问题作了详细而深入的分析和探讨。作者认为,该《办法》第五十二条:"水产苗种产地检疫,由地方动物卫生监督机构委托同级渔业主管部门实施。水产苗种以外的其他水生动物及其产品不实施检疫"的规定,与国际、国内现行的有关法律规定、实际做法和水产业持续健康发展的根本需要相矛盾,"委托"的提法也有待商榷,亟待修正后再下发执行。希望通过本文,能够引起有关部门重视。 展开更多
关键词 《动物检疫管理办法》 持续健康发展 水产苗种 读者来信 产地检疫 主管部门 监督机构 动物卫生
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猪巨细胞病毒四川株gB基因的克隆表达及抗原性分析
4
作者 朱玲 史小红 +6 位作者 王潇娣 梅淼 周远成 刘孟良 吴云飞 徐志文 郭万柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期854-860,共7页
为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆... 为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,分别用琼脂扩散试验和Western-blot对多克隆抗体和复性的gB蛋白进行检测。结果显示,扩增的PCMV gB基因全长2 580bp,编码860个氨基酸。与国内外参考株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为97.8%～99.5%和96.6%～99.0%;与其他9株β疱疹病毒核苷酸和氨基酸序列相似性分别为33.3%～41.4%和13.3%～49.4%;系统进化分析显示,PCMV与人疱疹病毒6型和7型属于一个分支。gB肽链N端1～23位氨基酸为信号肽,729～751位氨基酸间含有跨膜区。构建的表达载体pET30a-gB-B在Rosetta(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导后以包涵体形式表达出大小约80ku的蛋白。所制备的血清琼扩抗体效价为1∶16,Western-blot显示重组gB蛋白可与PCMV阳性猪血清反应。结果表明,PCMV gB基因较为保守,与国内外不同地区的PCMV毒株具有较高的相似性,所表达的重组蛋白具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 GB基因 克隆 原核表达 抗原性
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