目的:通过网络药理学和分子对接技术探究麝香治疗脑梗死的潜在作用机制。方法:通过BATMAN-TCM数据库收集麝香的活性成分,从GeneCards、OMIM数据库中筛选脑梗死疾病的靶点,应用Venny 2.1.0数据库获得麝香与脑梗死交集靶点韦恩图。使用Cyt...目的:通过网络药理学和分子对接技术探究麝香治疗脑梗死的潜在作用机制。方法:通过BATMAN-TCM数据库收集麝香的活性成分,从GeneCards、OMIM数据库中筛选脑梗死疾病的靶点,应用Venny 2.1.0数据库获得麝香与脑梗死交集靶点韦恩图。使用Cytoscape 3.8.2构建麝香-有效成分-靶点网络图与蛋白质-蛋白质相互作用网络图,获得核心成分与靶点。利用DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。运用Auto Dock vina将5种核心成分与5个核心靶点进行对接,通过PyMOL软件进行可视化分析。结果:麝香治疗脑梗死的活性成分有胆固醇、脱氢表雄酮、雌二醇等共16种,靶点共372个,脑梗死疾病靶点共4404个,药物活性成分与疾病的交集靶点有261个。GO功能富集分析显示交集靶点共有1219个生物功能条目。KEGG富集分析显示交集靶点涉及的信号通路共有192条,包括脂质和动脉粥样硬化、磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。核心成分与核心靶点有较好的结合活性。结论:麝香中高密度脂蛋白胆固醇、脱氢表雄酮、雌二醇、甘氨酸、睾酮等核心成分可能通过作用于肿瘤抑制蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine-Threonine Protein Kinase 1,AKT1)、信号转导与转录激活因子3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3,STAT3)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)等靶点与脂质和动脉粥样硬化等信号通路治疗脑梗死。展开更多
超短肽具有更好的稳定性、组织渗透性、生物相容性以及更低的免疫原性。GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)和GQPR(glycyl-L-glutamyl-L-prolyl-L-arginine)具有刺激胶原蛋白产生、减缓胶原蛋白降解的作用,作为抗皱成分广泛应用于化妆品...超短肽具有更好的稳定性、组织渗透性、生物相容性以及更低的免疫原性。GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)和GQPR(glycyl-L-glutamyl-L-prolyl-L-arginine)具有刺激胶原蛋白产生、减缓胶原蛋白降解的作用,作为抗皱成分广泛应用于化妆品。超短肽一般都是通过固相合成方法制备,其缺陷是制备过程中大量使用有机化学试剂而造成环境负担,故本文探讨了一种设计和制备超短肽的新方法。因序列短而无法直接重组表达,文中首先构建了适用于融合表达的载体骨架pET28a-Trxm。以GHK和GQPR串联重复基因作为滚环扩增的基本单元(tandem repeat of short peptides,TRSP),反应时随机掺入5-甲基胞嘧啶获得长基因片段,然后经Acc65Ⅰ和ApaⅠ消化产生随机长度的基因。胶回收500 bp到1500 bp的DNA片段,克隆得到表达载体pET28a-Trxm-(TRSP)n并转化获得重组菌。双酶切及测序结果表明,成功构建获得串联重复数n=1、2、3、4、6、7、8、9的阳性克隆。蛋白表达结果显示,当串联重复数n=1、2、3、4、8、9时均有相应融合蛋白表达,表达水平随着重复数增加而降低。Trxm-(TRSP)1表达水平最高,达总蛋白的50%,而Trxm-(TRSP)2表达水平为总蛋白的30%。进一步地,含Trxm-(TRSP)1的清液先后经肠激酶和胰蛋白酶切割后,HPLC分析结果表明,成功获得超短肽GHK和GQPR。该结果对于超短肽重组制备的工业化应用具有重要价值。展开更多
文摘目的:通过网络药理学和分子对接技术探究麝香治疗脑梗死的潜在作用机制。方法:通过BATMAN-TCM数据库收集麝香的活性成分,从GeneCards、OMIM数据库中筛选脑梗死疾病的靶点,应用Venny 2.1.0数据库获得麝香与脑梗死交集靶点韦恩图。使用Cytoscape 3.8.2构建麝香-有效成分-靶点网络图与蛋白质-蛋白质相互作用网络图,获得核心成分与靶点。利用DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。运用Auto Dock vina将5种核心成分与5个核心靶点进行对接,通过PyMOL软件进行可视化分析。结果:麝香治疗脑梗死的活性成分有胆固醇、脱氢表雄酮、雌二醇等共16种,靶点共372个,脑梗死疾病靶点共4404个,药物活性成分与疾病的交集靶点有261个。GO功能富集分析显示交集靶点共有1219个生物功能条目。KEGG富集分析显示交集靶点涉及的信号通路共有192条,包括脂质和动脉粥样硬化、磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等。核心成分与核心靶点有较好的结合活性。结论:麝香中高密度脂蛋白胆固醇、脱氢表雄酮、雌二醇、甘氨酸、睾酮等核心成分可能通过作用于肿瘤抑制蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine-Threonine Protein Kinase 1,AKT1)、信号转导与转录激活因子3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3,STAT3)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)等靶点与脂质和动脉粥样硬化等信号通路治疗脑梗死。
文摘超短肽具有更好的稳定性、组织渗透性、生物相容性以及更低的免疫原性。GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)和GQPR(glycyl-L-glutamyl-L-prolyl-L-arginine)具有刺激胶原蛋白产生、减缓胶原蛋白降解的作用,作为抗皱成分广泛应用于化妆品。超短肽一般都是通过固相合成方法制备,其缺陷是制备过程中大量使用有机化学试剂而造成环境负担,故本文探讨了一种设计和制备超短肽的新方法。因序列短而无法直接重组表达,文中首先构建了适用于融合表达的载体骨架pET28a-Trxm。以GHK和GQPR串联重复基因作为滚环扩增的基本单元(tandem repeat of short peptides,TRSP),反应时随机掺入5-甲基胞嘧啶获得长基因片段,然后经Acc65Ⅰ和ApaⅠ消化产生随机长度的基因。胶回收500 bp到1500 bp的DNA片段,克隆得到表达载体pET28a-Trxm-(TRSP)n并转化获得重组菌。双酶切及测序结果表明,成功构建获得串联重复数n=1、2、3、4、6、7、8、9的阳性克隆。蛋白表达结果显示,当串联重复数n=1、2、3、4、8、9时均有相应融合蛋白表达,表达水平随着重复数增加而降低。Trxm-(TRSP)1表达水平最高,达总蛋白的50%,而Trxm-(TRSP)2表达水平为总蛋白的30%。进一步地,含Trxm-(TRSP)1的清液先后经肠激酶和胰蛋白酶切割后,HPLC分析结果表明,成功获得超短肽GHK和GQPR。该结果对于超短肽重组制备的工业化应用具有重要价值。
