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SELEX技术筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌适配子的研究 被引量：3
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作者 汪江波 李赞东 +4 位作者 赵延斌 侯德凤 廖玲 李艳红 毛伟丽 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期3041-3043,共3页
目的利用指数富集的配体进化技术(SELEX)筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的适配子,并研究适配子AM6与MRSA结合的特异性,为研发MRSA的特异性诊断试剂和靶向治疗药物打下基础。方法体外构建81个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库;通过反复... 目的利用指数富集的配体进化技术(SELEX)筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的适配子,并研究适配子AM6与MRSA结合的特异性,为研发MRSA的特异性诊断试剂和靶向治疗药物打下基础。方法体外构建81个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库;通过反复的SELEX筛选获得MRSA的适配子并进行一级结构分析;利用荧光显微镜和PCR扩增法鉴定AM6与MRSA结合的特异性。结果经过20轮环筛选,获得了25个与预期大小相同的ssDNA序列,它们之间没有共同的保守序列;AM6仅与MRSA结合,而不与甲氧西林敏感葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)、甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSSCN)、大肠埃希菌结合。结论利用SELEX技术成功地筛选出MRSA的适配子,其中适配子AM6能特异性结合MRSA。 展开更多
关键词 指数富集的配体进化技术 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 适配子
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Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子的初步研究 被引量：4
2
作者 汪江波 李艳红 严鹏科 《中国医药科学》 2012年第24期25-28,共4页
目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细... 目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细胞和血管平滑肌细胞为反筛细胞,利用Cell SELEX技术筛选与巨噬细胞源性泡沫细胞结合的寡核苷酸序列,并对最后一轮筛选结果进行克隆测序。结果 PCR的退火温度对PCR产物的量有显著的影响,退火温度由65℃提高为72℃时的产物量明显增加。利用生物素-链霉亲和素磁珠分离法获得了纯度高、产量大的ssDNA文库;经过18轮筛选后,成功获得了28个与预期大小相同的ssDNA序列。结论利用Cell SELEX技术筛选出了巨噬细胞源性泡沫细胞的适配子,为研发用于动脉粥样硬化的早期无创诊断试剂和靶向治疗药物奠定了基础。 展开更多
关键词 CELL SELEX技术 巨噬细胞源性泡沫细胞 适配子 随机ssDNA文库
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