目的采用实时荧光定量PCR检测白天和晚上所形成牙菌斑生物膜中变异链球菌的数量,比较早晚牙菌斑中变异链球菌定植的差异。方法收集30名健康成人全口口腔洁治后白天和晚上形成的龈上菌斑,提取细菌基因组DNA。合成变异链球菌特异性引物,纯...目的采用实时荧光定量PCR检测白天和晚上所形成牙菌斑生物膜中变异链球菌的数量,比较早晚牙菌斑中变异链球菌定植的差异。方法收集30名健康成人全口口腔洁治后白天和晚上形成的龈上菌斑,提取细菌基因组DNA。合成变异链球菌特异性引物,纯化PCR产物获得目的基因连接于pTA-TA载体,克隆于大肠埃希菌DH5α感受态细胞。选取阳性克隆测序后纯化质粒DNA,获得质粒标准品。将样本和梯度稀释的质粒标准品进行SYBR Green I实时荧光定量PCR检测,确定标准曲线,定量样本中变异链球菌DNA的拷贝数。结果早晚牙菌斑细菌基因组DNA样本的扩增曲线均在标准品的扩增曲线范围内。晚上所形成牙菌斑中定植的变异链球菌数量(对数值7.67±0.77)高于白天定植的变异链球菌数量(对数值7.25±0.62)(P=0.007)。结论牙菌斑的微生物定植存在日夜节奏变化,晚上所形成牙菌斑中变异链球菌数量多于白天。展开更多
文摘目的采用实时荧光定量PCR检测白天和晚上所形成牙菌斑生物膜中变异链球菌的数量,比较早晚牙菌斑中变异链球菌定植的差异。方法收集30名健康成人全口口腔洁治后白天和晚上形成的龈上菌斑,提取细菌基因组DNA。合成变异链球菌特异性引物,纯化PCR产物获得目的基因连接于pTA-TA载体,克隆于大肠埃希菌DH5α感受态细胞。选取阳性克隆测序后纯化质粒DNA,获得质粒标准品。将样本和梯度稀释的质粒标准品进行SYBR Green I实时荧光定量PCR检测,确定标准曲线,定量样本中变异链球菌DNA的拷贝数。结果早晚牙菌斑细菌基因组DNA样本的扩增曲线均在标准品的扩增曲线范围内。晚上所形成牙菌斑中定植的变异链球菌数量(对数值7.67±0.77)高于白天定植的变异链球菌数量(对数值7.25±0.62)(P=0.007)。结论牙菌斑的微生物定植存在日夜节奏变化,晚上所形成牙菌斑中变异链球菌数量多于白天。
