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实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸载量的测量不确定度构成分析 被引量：10
1
作者 余南 毕晓云 +2 位作者 崔进 陈小坚 李汛 《中国医药生物技术》 CSCD 2006年第1期37-41,共5页
目的研究实时荧光定量PCR用于乙型肝炎病毒(HBV)核酸载量检测时的测量不确定度构成。方法采用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清标本中HBV核酸载量,收集检测过程中的各类数据,计算以下6种来源的测量不确定度,对该方法的测量不确定度... 目的研究实时荧光定量PCR用于乙型肝炎病毒(HBV)核酸载量检测时的测量不确定度构成。方法采用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清标本中HBV核酸载量,收集检测过程中的各类数据,计算以下6种来源的测量不确定度,对该方法的测量不确定度构成进行评估。⑴标本浓缩的不确定度(uenrich);⑵核酸提取的不确定度(uex);⑶扩增反应体系的不确定度(upcr);⑷热循环仪的不确定度(uins);⑸数据处理的不确定度(uana);⑹加样枪的不确定度(upip)。其中热循环仪的不确定度检测样本数为7份,其他各种不确定度检测的样本数为10份。结果核酸浓度为5.610E+07拷贝/ml的标本,其浓缩过程来源的相对不确定度达0.437;核酸提取来源的浓度真值无偏估计在6.585E+03、9.067E+04、7.223E+06拷贝/ml样本的相对不确定度分别为0.249、0.173、0.140;热循环仪和数据分析来源的相对不确定度分别为0.020和不大于0.050。结论标本制备过程中的浓缩和DNA提取步骤所带来的不确定度是实时荧光定量PCR检测HBV核酸载量测量不确定度的主要分量,因此标本制备处理的方法与标准操作程序能否有效地提取核酸并去除PCR反应的抑制物对于该项检测十分关键;起始模板浓度与测量不确定度相关,低浓度的样本显示出更大的相对不确定度。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 肝炎病毒 乙型 核酸类 不确定度
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人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7编码区序列变异研究 被引量：4
2
作者 余南 辜为为 +1 位作者 刘红娥 孙洪青 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第1期1-3,10,共4页
目的获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法的研发提供目标序列。方法通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞。设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编... 目的获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法的研发提供目标序列。方法通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞。设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析。结果通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞的分型检测,获得了人乳头瘤病毒16型感染阳性标本;选择其中3份阳性标本核酸为模板,通过特异性引物均成功扩增出大小介于750 bp和1 000 bp之间的目的序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒16型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆并测序后向GenBank核酸数据库提交获收录,登录号分别为EU869316、EU869317和EU869318;经BLAST分析,3条序列与GenBank序列PPH16(Accession:K02718)的E6/E7编码区序列一致性均为99%,且存在8种碱基置换,其中4种为同义突变,另4种则可引起所编码的相应氨基酸残基改变。结论本研究得到了与HPV高危型16型PPH16高度相似的E6/E7编码序列,为HPV致病机制和新型分子检测方法研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 早基因E6/E7 编码区序列 变异
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脐血乙型肝炎病毒核酸载量检测 被引量：1
3
作者 余南 陈小坚 +1 位作者 毕晓云 张云娇 《实用医学杂志》 CAS 2007年第13期1948-1950,共3页
目的:评价脐血乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)核酸载量检测结果。方法:通过建立扩增效率分析法,评价脐血进行HBV-DNA定量检测的有效性;通过比较脐血HBV血清学标志物的检测结果与脐血标本HBV-DNA定量检测结果,评价检测方法。结果:HB... 目的:评价脐血乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)核酸载量检测结果。方法:通过建立扩增效率分析法,评价脐血进行HBV-DNA定量检测的有效性;通过比较脐血HBV血清学标志物的检测结果与脐血标本HBV-DNA定量检测结果,评价检测方法。结果:HBV血清学标志物检测结果为大三阳,即HBsAg(+)、HBeAg(+)和HBcAb(+)的乙型病毒性肝炎产妇,其新生儿脐血标本在HBV-DNA定量检测中,20例中有13例(65%)发生扩增,扩增效率分析与其他血清标本差异无显著性;该20例脐血标本的HBV血清学标志物检测结果HBcAb(+)12例(60%),HBeAg(+)11例(55%),而其中HBsAg(+)仅1例(5%)。结论:脐血标本可用于检测HBV核酸载量。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 脐血 荧光定量PCR 扩增效率
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