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一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段 被引量：6
1
作者 胡栋平 韩焕兴 +2 位作者 尤长宣 罗荣城 毛庆民 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期50-52,共3页
目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢ... 目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ 片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分，木瓜酶处理后分离、纯化出Ｆａｂ，免疫绵羊制备高效价抗血清。用Ｇａｍ ｍ ａＢｉｎｄ 一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ组分，再将该ＩｇＧ经交联剂与Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ 交联后制成亲和胶。人源抗ＨＢｓ阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱，ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白，再用５ ｍ ｏｌ／Ｌ氯化锂洗脱特异Ｆａｂ。结果：聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示，纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带，达到电泳纯；用酶标抗Ｆａｂ 抗体免疫印迹结果证明，电泳显示的单一区带为Ｆａｂ 蛋白区带；抗原特异Ｄｏｔｂｌｏｔ检测表明，该法制备出的Ｆａｂ 保持了抗原结合活性。结论：本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点，是人源性单克隆抗体Ｆａｂ 展开更多
关键词 乙型肝炎 抗HBS 单克隆抗体 FAB片段
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食道癌、直肠癌瘤内注射^(131)I—CL_3放射免疫治疗初步观察 被引量：2
2
作者 锘挎柦缁冭繀 罗荣城 +2 位作者 吴新年 陈楚钦 张军一 《医学理论与实践》 1998年第9期391-392,共2页
本文报道了6例食道癌、直肠癌病人,利用放射免疫治疗疗法,通过瘤内注射抗体核素偶联物I—CL_3,单次给药剂量3～4mg,放射强度1110～1480MBq;本组病人3例接受治疗2次,3例接受治疗1次。结果CR 1例、PR 3例、MR 2例,缓解率66.66%,取得了满... 本文报道了6例食道癌、直肠癌病人,利用放射免疫治疗疗法,通过瘤内注射抗体核素偶联物I—CL_3,单次给药剂量3～4mg,放射强度1110～1480MBq;本组病人3例接受治疗2次,3例接受治疗1次。结果CR 1例、PR 3例、MR 2例,缓解率66.66%,取得了满意效果。作者认为该疗法具有高效、可靠、副作用小及操作简单等特点。 展开更多
关键词 食道癌 直肠癌 瘤内注射 放射免疫治疗
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DNA标记杂交技术筛选抗HBs-IFN-α融合蛋白表达载体
3
作者 韩焕兴 王永奎 +3 位作者 尤长宣 叶伟民 罗荣城 孔宪涛 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期172-174,共3页
为在无抗药性改变 ,转化细胞无生物指示系统改变的克隆载体中扩大筛选范围 ,提高筛选阳性率 ,本文应用地高辛标记DNA检测系统筛选人源单抗片段与干扰素融合蛋白表达质粒 (Anti HBs IFN α ) ,取得了理想的效果。纯化制备载体的插入段DN... 为在无抗药性改变 ,转化细胞无生物指示系统改变的克隆载体中扩大筛选范围 ,提高筛选阳性率 ,本文应用地高辛标记DNA检测系统筛选人源单抗片段与干扰素融合蛋白表达质粒 (Anti HBs IFN α ) ,取得了理想的效果。纯化制备载体的插入段DNA ,用地高辛标记系统进行化学标记 ,制成标记探针。挑取单克隆菌扩增 ,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体DNA ,点样于硝酸纤维膜上并经 80℃烤 2h ,分别用预杂交液和标记探针进行 42℃ 2h、 42℃ 6h的膜预杂交和杂交反应 ,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。未带插入片段的抗体表达载体为阴性对照 ,IFN α质粒DNA作阳性对照 ,在 40株转化细胞中筛选出 7个目的克隆。为进一步核实该法的筛选效率和可靠性 ,分别用单酶切和双酶切法对筛选出的阳性载体进行鉴定 ,琼脂糖电泳结果显示 ,两者的符合率为 10 0 %。该系统筛选结果可靠 ,尤其在克隆载体转化细胞后无抗药改变 。 展开更多
关键词 融合蛋白表达载体 DNA杂交 人源单克隆抗体
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LAK细胞/IL-2联合放射免疫治疗晚期肿瘤的临床研究 被引量：1
4
作者 李爱民 罗荣城 +3 位作者 张军一 廖旺军 张鸣江 蒋丽群 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期123-124,共2页
观察了72例接受不同方法治疗的晚期消化道恶性肿瘤患者愈后及γ显像情况,患者随机分为3组,第一组21例单独应用131I标记的抗结肠癌单克隆抗体CL3(简称131I-CL3)局部多点注射治疗;第二组33例接受LAK细胞/IL-2静脉注射治疗;第三组18例接受... 观察了72例接受不同方法治疗的晚期消化道恶性肿瘤患者愈后及γ显像情况,患者随机分为3组,第一组21例单独应用131I标记的抗结肠癌单克隆抗体CL3(简称131I-CL3)局部多点注射治疗;第二组33例接受LAK细胞/IL-2静脉注射治疗;第三组18例接受LAK细胞/IL-2联合131I-CL3肿瘤局部多点注射治疗。发现:(1)LAK细胞/IL-2和131I-CL3联合应用组,肿瘤局部核素标记抗体浓聚大于131I-CL3组。(2)联合应用LAK细胞/IL-2及131I-CL3治疗组的有效率(CR+PR,50%)明显高于131I-CL3治疗组(238%)及LAK细胞/IL-2治疗组(121%)。说明LAK细胞/IL-2联合应用后可增强放免显像及放免治疗的效果。 展开更多
关键词 LAK细胞 IL-2 放射免疫治疗 消化道肿瘤
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肿瘤放免治疗后LAK细胞活性及IL—2R表达的改变及其与预后的关系
5
作者 李爱民 严晓 +3 位作者 张军一 廖旺军 蒋丽群 张鸣江 《实用肿瘤学杂志》 CAS 1998年第2期114-115,共2页
目的 本研究为了解放射免疫治疗是否可增强患者免疫活性细胞的功能,增强抗肿瘤效果。方法 检测21例恶性肿瘤患者接受放射免疫治疗当天、治疗后14天LAK细胞活性及白细胞介素—2受体(IL—2R)表达。结果 放免治疗后14天患者外周血LAK细胞... 目的 本研究为了解放射免疫治疗是否可增强患者免疫活性细胞的功能,增强抗肿瘤效果。方法 检测21例恶性肿瘤患者接受放射免疫治疗当天、治疗后14天LAK细胞活性及白细胞介素—2受体(IL—2R)表达。结果 放免治疗后14天患者外周血LAK细胞活性增强,LAK细胞中IL—2R阳性细胞明显增加,治疗后显效组LAK细胞活性明显强于非显效组,IL—2R的表达也明显强于非显效组,而治疗前两组之间无明显差异。结论 认为放免治疗可增强机体免疫功能,且治疗的预后与LAK细胞的活性增强及IL—2R的表达密切相关。 展开更多
关键词 肿瘤 放射免疫治疗 LAK细胞活性 IL-2R
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