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广州地区2011年肠道病毒71型基因特征分析
1
作者 徐翼 罗丹 +5 位作者 叶家卫 谭莉梅 房春晓 毕丰 王弋 彭涛 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2012年第11期848-851,共4页
目的研究广州地区2011年手足口病病原流行特点及EV71的基因特征。方法收集2011年1～11月广州市妇女儿童研究中心63份不同患者来源的肛拭子、咽拭子以及血液样本,选择12份EV71阳性标本进行病毒分离,扩增EV71VP1区,测序并与EV71各血清型... 目的研究广州地区2011年手足口病病原流行特点及EV71的基因特征。方法收集2011年1～11月广州市妇女儿童研究中心63份不同患者来源的肛拭子、咽拭子以及血液样本,选择12份EV71阳性标本进行病毒分离,扩增EV71VP1区,测序并与EV71各血清型代表株序列比对,进行进化分析。结果 2011年广州地区12个临床分离株同A、B亚型的亲缘性较远,核苷酸同源性都不足85%,氨基酸同源性不足96.5%。其同C亚型的亲缘型较近,核苷酸、氨基酸同源性超过88.5%和97.5%,尤其与C4亚型的亲缘性最近,核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.9%～94.6%和97.9%～98.9%。结论 2011年广州地区的12株EV71分离株都属于C4a亚型进化分支,并处于选择进化过程中。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71 种系发生 病毒结构蛋白质类
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人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达 被引量：4
2
作者 吴世卿 郑俊发 +3 位作者 曾曙光 陈少鹏 薛国初 章锦才 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期653-656,共4页
目的分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),对其进行鉴定,并探讨酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)基因在HUVECs中的表达情况。方法用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养,根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定... 目的分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),对其进行鉴定,并探讨酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)基因在HUVECs中的表达情况。方法用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养,根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SABC免疫细胞化学染色对HUVECs中Tie-2mRNA和蛋白表达情况进行检测。结果原代培养的HUVECs约于24h完全贴壁,4～5d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子免疫荧光组化法证实细胞是HUVECs。RT-PCR检测到HUVECs中Tie-2mRNA条带明显,SABC免疫细胞组化法检测到Tie-2蛋白在HUVECs胞浆、核膜中呈强阳性表达,阳性率为85%以上。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得高纯度的HUVECs,Tie-2在HUVECs中呈强阳性表达。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 酪氨酸激酶受体-2 肿瘤
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HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建 被引量：1
3
作者 何秋璟 张春龙 +5 位作者 仁哲 张美英 朱钦昌 刘秋英 张佩琢 王一飞 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期1-4,共4页
目的:克隆HSV-1 UL30 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。方法:从感染HSV-1F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA4个... 目的:克隆HSV-1 UL30 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。方法:从感染HSV-1F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜观察融合蛋白表达情况。结果:成功克隆出UL30 cDNA,序列对比显示与基因库中的HSV-1F株UL30序列同源性为99.4%;成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达。结论:成功克隆出UL30 cDNA,成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。 展开更多
关键词 UL30基因/警纯疱疹病毒1型 分子克隆 EGFP 融合表达载体
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源于尿道上皮细胞的诱导多能干细胞构建阿尔茨海默病研究模型 被引量：2
4
作者 王旎 刘舜杰 +3 位作者 孟洋阳 雷清锋 韦睿 李中 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期487-494,共8页
目的:阿尔茨海默病(AD)是常见的神经退行性疾病之一,目前仍未有理想的研究模型,这使得其发病机制尚不完全清楚。因此,本研究将利用非侵袭性方法收集的尿道上皮细胞重编程为诱导多能干细胞(iPSC)从而构建AD疾病研究模型。方法:本研究选取... 目的:阿尔茨海默病(AD)是常见的神经退行性疾病之一,目前仍未有理想的研究模型,这使得其发病机制尚不完全清楚。因此,本研究将利用非侵袭性方法收集的尿道上皮细胞重编程为诱导多能干细胞(iPSC)从而构建AD疾病研究模型。方法:本研究选取3名男性AD患者作为实验组和2名正常男性作为对照者组,通过分离实验组和对照组的尿道上皮细胞,并将其重编程成为iPSC,利用碱性磷酸酶染色、RT-qPCR及畸胎瘤形成实验等验证其干细胞特性。随后将iPSC定向神经分化成为神经细胞,采用ELISA方法验证AD特异性标志物的表达水平。同时,将BACE1基因在iPSC细胞系中过表达,采用ELISA方法验证AD特异性标志物的表达水平,以上实验每组研究对象均进行2~3次重复实验。结果:尿道上皮细胞被成功地重编程成iPSC,且具有分化为三种不同胚层来源组织的多能性。定向分化患者来源的神经细胞分泌AD标志物的水平与正常对照比较没有显著差异(P>0.05)。但是,过表达BACE1后的iPSC细胞系和分化的神经细胞,AD相关标志物表达水平较对照组显著增高(P<0.05),说明该细胞系作为AD模型的可行性。结论:本研究成功地将AD患者的尿道上皮细胞重编程为iPSC,并将其与正常来源的iPSC进行比较,观察到患者来源的iPSC具有相对正常的蛋白表达谱,提示该细胞的临床应用价值。同时,过表达BACE1基因的iPSC能检测到高表达的AD相关标志物,提示该细胞可以作为研究AD发病机制的细胞模型。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 尿道上皮细胞 诱导多能干细胞 神经分化 BACE1基因
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表达狂犬病病毒CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒在犬体内的免疫效果 被引量：1
5
作者 袁子国 张才 +4 位作者 王晓虎 徐慧娟 张守峰 扈荣良 张秀香 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期984-989,共6页
为研制一种新型有效的狂犬病重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的SphⅠ/NdeⅠ酶切位点处,将酶切鉴定为正向连接的阳性重组子命名为p8AA-EGFP-rgp。在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得能够表达狂... 为研制一种新型有效的狂犬病重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的SphⅠ/NdeⅠ酶切位点处,将酶切鉴定为正向连接的阳性重组子命名为p8AA-EGFP-rgp。在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得能够表达狂犬病病毒(RV)CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV/EGFP-rgp,经RT-PCR和Western-blot鉴定后对犬进行肌肉注射免疫,并测定相应试验指标,研究重组病毒对犬的免疫诱导情况。结果显示,重组病毒可以有效地刺激机体产生体液免疫和细胞免疫;产生的针对RV的中和抗体水平[(0.95±0.21)U/mL]在14周时还保持相对国际最低保护标准(0.5U/mL)较高的水平;且产生的针对RV和PRV的中和抗体水平均达到了相应灭活疫苗和减毒活疫苗的水平,抗体效价均维持在14周以上。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 增强绿色荧光蛋白 重组病毒 免疫
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siRNA干扰HSV-1 UL30 DNA聚合酶基因的研究
6
作者 张春龙 何秋璟 +5 位作者 仁哲 朱钦昌 张美英 刘秋英 张佩琢 王一飞 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第5期11-16,共6页
目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响。方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光... 目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响。方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对HSV-1繁殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终形成的空斑直径分别比对照组减小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01)。结论:筛选到高效抑制UL30的3对siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,说明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延缓病斑的扩大和病斑数目的增长,对病毒的繁殖有一定的抑制效果。 展开更多
关键词 SIRNA RNA干扰 UL30基因/DNA聚合酶/HSV-1
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汉坦病毒疫苗研究进展
7
作者 魏光伟 徐慧娟 +4 位作者 余永鹏 魏文康 张涛 马江耀 罗胜军 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第7期109-112,共4页
关键词 病毒疫苗 自然疫源性疾病 肾综合征出血热 流行性出血热 汉坦病毒 VIRUS 人体健康 基因型
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重组人促卵泡激素剂量对食蟹猴卵泡发育和排卵同期化的影响
8
作者 张秀娟 陈金平 +4 位作者 张全军 刘朝明 刘晓明 赖良学 张守全 《四川动物》 北大核心 2015年第3期407-410,共4页
目的优化食蟹猴胚胎移植同步受体的处理技术。方法选择5～9岁月经周期正常的成年雌性食蟹猴37只,于出现月经血的第2～3天,每日肌注重组人促卵泡激素（rh FSH）,按超排剂量和方式分2个实验组,超排供体组、超排受体组,另有一组自然受体组... 目的优化食蟹猴胚胎移植同步受体的处理技术。方法选择5～9岁月经周期正常的成年雌性食蟹猴37只,于出现月经血的第2～3天,每日肌注重组人促卵泡激素（rh FSH）,按超排剂量和方式分2个实验组,超排供体组、超排受体组,另有一组自然受体组（对照组）。结果和结论 2个实验组超排后卵巢反应全部良好,超排供体组和超排受体组超排后卵巢的获卵总数（15.18±6.51 VS.5.67±3.79）和平均排卵数（6.77±3.61 VS.1.00±0.00）差异具有统计学意义（P〈0.05）,但超排受体组和超排供体组的雌二醇（E2）水平浓度差异无统计学意义（P〉0.05）,变化模式一致,且超排受体组与超排供体组排卵同期化的准确率可达83.33%,而对照组仅为42.85%,两者差异具有统计学意义（P〈0.05）。 展开更多
关键词 食蟹猴 卵泡发育 排卵同期化
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人支气管上皮细胞16HBE和其经硫化镍、反式-BPDE诱导的恶性转化细胞对脂质体转染效率的差异性比较
9
作者 夏盛源 王远航 +1 位作者 朱蔚云 张岚 《激光生物学报》 CAS 2018年第2期148-154,共7页
目的:通过脂质体法转染不同荧光蛋白质粒到多种接种密度细胞的效率差异探讨恶性转化细胞的癌变过程。方法:以16HBE、结晶型NiS诱导的16HBE恶性转化细胞和反式-BPDE诱导的16HBE恶性转化细胞为实验对象,采用不同的细胞接种密度,用脂质体... 目的:通过脂质体法转染不同荧光蛋白质粒到多种接种密度细胞的效率差异探讨恶性转化细胞的癌变过程。方法:以16HBE、结晶型NiS诱导的16HBE恶性转化细胞和反式-BPDE诱导的16HBE恶性转化细胞为实验对象,采用不同的细胞接种密度,用脂质体法对它们分别转染两种不同的表达荧光蛋白的质粒,通过荧光显微镜观察细胞的转染情况。结果:无论转染eGFP质粒还是GFP-LC3质粒,在多种细胞密度下,正常细胞16HBE都比恶性转化细胞的转染效率低。结论:恶性转化细胞在癌变过程中可能发生了细胞膜通透性的改变。 展开更多
关键词 脂质体 转染效率 恶性转化细胞 EGFP GFP-LC3
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