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基于转录组学筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的关键基因 被引量:1
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作者 霍少川 熊仪 +7 位作者 俞建萍 郭海 廖昔威 程文昌 钟嘉漫 温刘莹 黄婷婷 韩霞 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1478-1485,共8页
目的探讨左归丸治疗骨质疏松(OP)多靶点的分子机制。方法采用0、100、200、400、1000μg/mL浓度的左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞,Western Blot检测总β-连环蛋白(β-catenin)、活性β-catenin、成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)、成骨细胞... 目的探讨左归丸治疗骨质疏松(OP)多靶点的分子机制。方法采用0、100、200、400、1000μg/mL浓度的左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞,Western Blot检测总β-连环蛋白(β-catenin)、活性β-catenin、成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)蛋白表达,qPCR检测Runx2、Osx、Ⅱ型α胶原蛋白基因(Col2a1)、骨钙蛋白(Ocn)、β-catenin mRNA表达,CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活力,碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色(ARS)检测MC3T3-E1细胞成骨细胞分化能力,RNA-Seq筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的差异基因并进行qPCR验证。结果不同浓度左归丸溶液(100、200、400、1000μg/mL)干预MC3T3-E1细胞48 h,成骨标志基因(Runx2、Osx、Col2A1、Ocn、β-catenin)表达水平明显升高(P<0.05),MC3T3-E1细胞增殖率明显升高(P<0.05),ALP、ARS染色明显增强(P<0.05),其中以400μg/mL左归丸溶液干预效果最明显。当左归丸溶液干预浓度达到1000μg/mL,MC3T3-E1细胞成骨分化能力显著下降(P<0.05)。采用400μg/mL左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞48 h,RNA-seq筛选出10个差异最大基因,其中6个上调基因和4个下调基因,qPCR验证发现,EF-Hand钙结合域9(Efcab9)、叉头框蛋白J1(Foxj1)mRNA表达水平升高(P<0.05),Ras蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RasGRF1)、生长分化因子-9(GDF9)、Ⅳ型胶原蛋白α-3链(Col4a3)mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论左归丸溶液(400μg/mL)能够调节Efcab9、FOXj1、RasGRF1、GDF-9、Col4a3 mRNA表达水平,促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化。 展开更多
关键词 左归丸 MC3T3-E1细胞 转录组学 成骨分化 中药复方 骨质疏松
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