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抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的初步研究 被引量:1
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作者 刘细霞 王弘 +4 位作者 杨金易 张宏斌 雷红涛 沈玉栋 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期161-165,共5页
初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导... 初步研究抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)的表达条件,提高CBLscFv-AP融合蛋白的表达量。采用液体发酵法培养抗克伦特罗单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(CBLscFv-AP)基因工程菌,研究不同宿主菌、初始pH、诱导时期、诱导时间和培养基对CBLscFv-AP融合蛋白表达量的影响以及重组质粒的稳定性。选用E·coliBL21(DE3)pLysS为宿主菌,在初始pH为7·4的LB培养基中培养至A600nm为0·8~0·9时,诱导表达8h,为CBLscFv-AP融合蛋白最佳表达条件。而且重组质粒pBV220-scFv-phoA具有较好的结构稳定性。在该表达条件下,提高了CBLscFv-AP融合蛋白的表达量,为进行大规模发酵生产CBLscFv-AP融合蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白 表达条件
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原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究 被引量:2
2
作者 王弘 刘细霞 +3 位作者 梁艳 张宏斌 孙远明 陈舒迟 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期45-50,共6页
目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鉴定重组抗体特性。方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体。以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和... 目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鉴定重组抗体特性。方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体。以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性。超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western blotting和间接竞争ELISA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定。结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%。以1mol/L尿素洗涤包涵体,6mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%。Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应。间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应。结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 原核表达 纯化
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快速检测技术在果蔬食品安全控制上的研究应用进展 被引量:7
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作者 杨武英 孙远明 +1 位作者 周杨 吴民富 《安徽农业科学》 CAS 2012年第1期147-149,共3页
介绍了目前我国果蔬类食品中存在的主要食品安全问题,综述了化学比色、酶抑制技术、生物传感器、免疫学、分子生物学、生物芯片、ATP生物发光等食品安全快速检测技术在果蔬食品安全控制上的研究应用现状及发展趋势。
关键词 果蔬食品 食品安全 快速检测 研究应用
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基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟 被引量:4
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作者 邓龙 肖治理 +6 位作者 董洁娴 王弘 杨武英 谢曦 杨金易 沈玉栋 孙远明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2486-2491,共6页
为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋... 为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv),从抗CBF scFv氨基酸序列出发,通过同源模建获得抗体模型,找出抗体中的活性口袋区域,进而将小分子药物与抗体进行分子对接,发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用.进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换,再进行分子对接分析,发现当以亮氨酸为突变氨基酸时,对接评分最高.在此基础上,通过构建突变scFv基因及可溶性表达,采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定.结果表明,evoscFv对CBF的IC50值为18.11μg/L,低于野生型抗体的27.25μg/L,亲和解离常数Kd为4.06×10-8mol/L,相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍,说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换,获得了一个亲和力更高的突变体抗体. 展开更多
关键词 克百威 单链抗体 分子对接 定点突变 亲和力成熟
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深圳市公共餐饮膳食营养评价系统的应用 被引量:3
5
作者 黄薇 王舟 +2 位作者 张锦周 韩淑杰 王伟华 《中国公共卫生管理》 2012年第1期15-17,共3页
目的为提高深圳市民的身体素质,建立膳食营养指导及综合评价的平台,可持续提供远程的膳食营养监测数据,逐步在深圳形成合理搭配、平衡膳食、促进健康的氛围。方法利用SQLSever技术、ActiveX Data Objects技术和Visual Basic模块化设计... 目的为提高深圳市民的身体素质,建立膳食营养指导及综合评价的平台,可持续提供远程的膳食营养监测数据,逐步在深圳形成合理搭配、平衡膳食、促进健康的氛围。方法利用SQLSever技术、ActiveX Data Objects技术和Visual Basic模块化设计的思路,开发研制出公共餐饮膳食营养评价系统,整个系统由菜品配方库、食物成分库、膳食营养素参考摄入量库三个数据库及营养评价及成分计算、自动配餐、营养知识咨询、膳食指南四个模块组成。结果个体用户可以利用在外就餐时菜品的选择、自身的身体状况(身高、体重、年龄)、劳动强度、临床检验等指标,获取个体当餐的营养评价;或选择营养配餐通过计算营养素摄入量形成食谱。所有操作结果均可保存或通过多种报表进行打印。结论本软件的开发与应用,节省了营养工作者的劳动时间,提高了劳动效率,使营养评价向科学化、系统化、人性化的方向迈出了突破性的一步,为深圳市公共餐饮膳食的评价及远程膳食营养的监测提供了一种有力的工具。 展开更多
关键词 营养 膳食 配餐 评价
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家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析 被引量:2
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作者 何永盛 陈舒迟 +6 位作者 王弘 韩双艳 杨琼 刘细霞 董洁娴 杨武英 孙远明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2189-2198,共10页
【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR... 【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmAChE(rBmAChE)的生物活性。【结果】改造后的bmace经重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为70 kD的蛋白,具有AChE活性,酶比活力约为1 187 U.mg-1。抑制试验显示,该rBmAChE能够被毒扁豆碱强烈抑制,并且可被皮蝇磷等10种有机磷农药和克百威等5种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC50值可达2.78×10-10mol.L-1。【结论】成功构建分泌表达BmAChE的毕赤酵母菌株,其表达了具有良好活性的rBmAChE,可用于进一步制备有机磷及氨基甲酸酯类农药快速检测分析制剂。 展开更多
关键词 毕赤酵母 重组家蚕乙酰胆碱酯酶 表达 活性分析 有机磷农药 氨基甲酸酯类农药
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抗克伦特罗单链抗体基因构建及蛋白结构模拟 被引量:2
7
作者 王弘 刘细霞 +3 位作者 潘科 雷红涛 沈玉栋 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第13期227-231,共5页
目的:构建抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因cbl,进行蛋白质结构模拟并对其理化特性进行分析。方法:采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗克伦特罗mAb的杂交瘤细胞株5D1为原料,构建抗克伦特罗scFv基因cbl,进行测序,采用生物信息软件对氨基... 目的:构建抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因cbl,进行蛋白质结构模拟并对其理化特性进行分析。方法:采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗克伦特罗mAb的杂交瘤细胞株5D1为原料,构建抗克伦特罗scFv基因cbl,进行测序,采用生物信息软件对氨基酸序列推导并进行结构预测,同时对理化性质进行分析。结果:抗克伦特罗scFv基因cbl全长720bp,对应225个氨基酸,单链抗体分子量约为25826.6,等电点预测值8.78,为碱性蛋白质;二级结构显示抗克伦特罗单链抗体含α螺旋20处,β折叠99处,β转角28处,随机卷曲93处。cbl三级结构建模显示重链(VH)和轻链(VL)形成一个疏水的"口袋",Linker游离于此结构之外,符合scFv的结构特点,明显具有抗原结合位点的空间构象,理论上应该具有良好的抗原结合活性。结论:构建一个抗克伦特罗scFv基因cbl,应用信息学技术所获得的预测和分析结果为抗克伦特罗单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究提供信息。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 结构预测
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抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达 被引量:1
8
作者 陈舒迟 何永盛 +2 位作者 徐小艳 陆田珍 王弘 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期217-219,236,共4页
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感... 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 毕赤酵母 蛋白表达
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抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
9
作者 邓龙 王弘 +2 位作者 周思 冼燕萍 郭新东 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期178-182,共5页
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及... 为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 克百威 重组单链抗体 可溶性表达
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抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化
10
作者 梁艳 王弘 +6 位作者 杨金易 刘细霞 徐小艳 张宏斌 雷红涛 沈玉栋 孙远明 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期200-202,共3页
为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 ... 为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,scFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响。优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%。 展开更多
关键词 克伦特罗 重组抗体 发酵
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高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:10
11
作者 杨金易 吴青 +5 位作者 王弘 潘科 雷红涛 肖治理 郑晓锋 孙远明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期518-523,共6页
目的制备高亲和力农药克百威单克隆抗体,建立克百威残留免疫检测方法,控制克百威残留,保障人民身体健康与保护环境。方法合成克百威半抗原BFNB,用人工抗原BFNB-BSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA... 目的制备高亲和力农药克百威单克隆抗体,建立克百威残留免疫检测方法,控制克百威残留,保障人民身体健康与保护环境。方法合成克百威半抗原BFNB,用人工抗原BFNB-BSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆,分离出阳性细胞株,腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力,间接竞争ELISA法测定抗体特异性。结果获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3,其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1:1.024×106,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数为2.54×109 L.mol-1,IC50为1.18 ng.ml-1,最低检测限为0.01ng.ml-1。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4%,另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4%。结论此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强,为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 克百威 单克隆抗体 免疫化学分析
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基于不同载体免疫原制备河豚毒素抗体的研究 被引量:11
12
作者 刘燕婷 钟青萍 +3 位作者 雷红涛 张挺 余海虎 孙远明 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期234-236,共3页
目的比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种载体蛋白合成的河豚毒素人工抗原的免疫原性,并对其制备的抗体进行研究。方法用曼尼希法将半抗原河豚毒素(TTX)分别与大分子载体BSA和KLH偶联合成人工抗原TTX-BSA及TTX-KLH... 目的比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种载体蛋白合成的河豚毒素人工抗原的免疫原性,并对其制备的抗体进行研究。方法用曼尼希法将半抗原河豚毒素(TTX)分别与大分子载体BSA和KLH偶联合成人工抗原TTX-BSA及TTX-KLH,免疫6~8周龄Balb/c雌性小鼠,制备多抗;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白,同样用曼尼希法制备包被抗原TTX—OVA。TTX—KLH多抗血清同时采用TTX-OVA和TTX—BSA作包被抗原检测,抗血清经问接酶联免疫吸附法(iELISA)以及间接竞争酶联免疫吸附法icELISA)检测。结果经TTX-KLH免疫获得的多抗血清较TTX—BSA免疫获得的多抗血清特异性高。两种包被抗原的检测效价一致:均为1:64000,而以TTX—OVA为包被原的检测值稍高,与TTX进行竞争酶联免疫检测,其IC50值波动范围为10~20ng/ml。结论TTX—KLH具有更好的免疫原性。 展开更多
关键词 河豚毒素 载体 人工抗原 抗体 食品检测
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抗副溶血弧菌IgY的提纯及检测副溶血弧菌的间接ELISA的建立 被引量:7
13
作者 何彬斌 钟青萍 王斌 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期95-99,共5页
分离纯化抗副溶血弧菌IgY,并建立一种快速检测副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附法(indirect ELISA),分析了该方法的敏感性、特异性和重复性.将水稀释法、乙醇沉淀法和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用以分离纯化抗副溶血弧菌IgY,然后以... 分离纯化抗副溶血弧菌IgY,并建立一种快速检测副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附法(indirect ELISA),分析了该方法的敏感性、特异性和重复性.将水稀释法、乙醇沉淀法和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用以分离纯化抗副溶血弧菌IgY,然后以纯化的IgY为一抗,辣根过氧化物酶标兔抗鸡IgY为二抗,建立检测副溶血弧菌的间接ELISA方法.结果表明:建立的间接ELISA方法,一抗的最佳工作质量浓度为15μg/mL,二抗的最佳稀释度为1∶10 000,副溶血弧菌培养液的检出限为1.0×105cfu/mL,该方法对测定的其他8种菌株没有交叉反应.建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性,能够快速、准确地对副溶血弧菌进行检测. 展开更多
关键词 鸡卵黄免疫球蛋白 间接ELISA 副溶血弧菌 检测
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甲硝唑半抗原及全抗原合成与鉴定 被引量:6
14
作者 雷红涛 沈玉栋 +3 位作者 刘文字 邱志超 杨瑾 孙远明 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期101-104,共4页
在微波加热条件下,将甲硝唑与琥珀酸酐反应,合成半抗原甲硝唑半琥珀酸酯,氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法的鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备甲硝唑全抗原,紫外光谱法鉴定结果表明,全抗... 在微波加热条件下,将甲硝唑与琥珀酸酐反应,合成半抗原甲硝唑半琥珀酸酯,氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法的鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备甲硝唑全抗原,紫外光谱法鉴定结果表明,全抗原合成成功. 展开更多
关键词 甲硝唑 半抗原 全抗原 鉴定
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免疫分析标记技术研究进展 被引量:4
15
作者 王宇 沈玉栋 +3 位作者 雷红涛 刘文字 王弘 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期221-225,共5页
较系统地综述了目前应用于免疫分析检测中的各种标记技术:放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记、金标记和超顺磁粒子标记方法的原理、特点及免疫检测现状,同时对免疫分析标记技术的发展进行展望。
关键词 免疫分析 标记技术 研究进展
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有机磷农药三唑磷半抗原合成与鉴定 被引量:2
16
作者 雷红涛 孙远明 +3 位作者 邓礼舜 肖治理 王弘 沈玉栋 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第1期20-24,共5页
以三氯硫磷、苯唑醇、6-氨基己酸为原料,采用3步反应合成三唑磷半抗原6-[O-乙基-O-(1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫代磷酰胺基]己酸,经质谱和1H-NMR鉴定表明,合成成功,为进一步制备三唑磷抗体奠定了基础。
关键词 三唑磷 芈抗原 合成 鉴定
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抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定 被引量:4
17
作者 王弘 潘科 +5 位作者 杨金易 张宏斌 王捷 武婕 雷红涛 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期332-335,共4页
目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELIS... 目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELISA法分析检测可溶性scFv的表达,并采用间接竞争ELISA法鉴定scFv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗CBL可溶性scFv表达,其分子量约为29kD;上清液及周质腔中scFv效价分别为1:80,1:1600,能够被CBL竞争性抑制,IC50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗CBLscFv在大肠杆菌HB2151中获得成功表达,表达的scFv与CBL具有很好的结合活性,可用于进一步建立CBL相应的免疫学检测方法。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 可溶性表达
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公共餐饮膳食评价系统的研究 被引量:2
18
作者 黄薇 王舟 +2 位作者 张锦周 韩淑杰 王伟华 《中国公共卫生管理》 2011年第6期595-596,共2页
本文利用SQLSever技术、ActiveX Data Objects技术和Visual Basic模块化设计的思路,开发研制出计算机膳食指导服务系统,本系统由三个数据库组成,整个系统将营养评价及成分计算、自动配餐、营养知识咨询、膳食指南等功能进行了有机的整合... 本文利用SQLSever技术、ActiveX Data Objects技术和Visual Basic模块化设计的思路,开发研制出计算机膳食指导服务系统,本系统由三个数据库组成,整个系统将营养评价及成分计算、自动配餐、营养知识咨询、膳食指南等功能进行了有机的整合,从而形成了一个餐饮企业菜品配方资料收集、数据化食物选择、个体人群配餐及合理膳食指导一体化的营养实时状况的调查、分析、评价、干预和做出指导的完整的软件系统。本系统已经在深圳市面点王餐饮公司通过测试,市场前景良好。 展开更多
关键词 营养 膳食 配餐 评价 数据库
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脂质运载蛋白突变文库的应用及研究现状 被引量:1
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作者 武婕 王捷 王弘 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期416-418,共3页
脂质运载蛋白(lipocalin)蛋白家族是一类广泛存在于生物界、与体内小分子物质运输和贮存相关的蛋白质家族。由于其高级结构具有与抗体高级结构类似的特点:由保守区和超变区组成,因此,以脂质运载蛋白为骨架构建的突变文库也成为一个新的... 脂质运载蛋白(lipocalin)蛋白家族是一类广泛存在于生物界、与体内小分子物质运输和贮存相关的蛋白质家族。由于其高级结构具有与抗体高级结构类似的特点:由保守区和超变区组成,因此,以脂质运载蛋白为骨架构建的突变文库也成为一个新的研究领域,该文介绍脂质运载蛋白家族的结构特点、脂质运载蛋白突变文库的应用及研究现状。 展开更多
关键词 脂质运载蛋白 文库 抗体结构
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