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姜黄素抑制Caco-2细胞胆固醇吸收的作用及机制研究 被引量：4
1
作者 冯丹 凌文华 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期488-491,共4页
目的探讨姜黄素对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,分别用25、50、100μmol/L姜黄素或胆固醇吸收转运蛋白尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)的抑制剂依折麦布孵育细胞24h或2h后,再用[14C]-胆固醇微... 目的探讨姜黄素对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,分别用25、50、100μmol/L姜黄素或胆固醇吸收转运蛋白尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)的抑制剂依折麦布孵育细胞24h或2h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2h。用液闪计数仪检测细胞胆固醇吸收量,荧光定量PCR和Western blot检测NPC1L1的基因和蛋白表达量。结果 Caco-2细胞[14C]-胆固醇吸收可被依折麦布呈浓度依赖性地抑制,表明本研究建立的单层Caco-2细胞模型的胆固醇吸收是由NPC1L1所介导的。姜黄素能有效的下调NPC1L1的基因及蛋白表达水平,降低Caco-2细胞胆固醇吸收,100μmol/L姜黄素可引起40%胆固醇吸收下降。结论姜黄素能够降低Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其抑制NPC1L1表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 NPC1L1 胆固醇 CACO-2细胞
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蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因5'侧翼区多态性在广东汉族人群中的分布 被引量：3
2
作者 陈慧峰 罗洁 +6 位作者 林丽娜 李文 张树江 万建新 陈雯 林忠宁 林育纯 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2011年第2期93-97,共5页
目的:探讨蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因PPP2RIA启动子区的遗传多态性在中国南方汉族人群中的分布特征。方法:随机选取部分广东汉族人群,获取全血基因组DNA。PCR扩增获得PPP2RIA基因5′-侧翼区的目的片段产物直接再测序,筛查并确证潜在的基... 目的:探讨蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因PPP2RIA启动子区的遗传多态性在中国南方汉族人群中的分布特征。方法:随机选取部分广东汉族人群,获取全血基因组DNA。PCR扩增获得PPP2RIA基因5′-侧翼区的目的片段产物直接再测序,筛查并确证潜在的基因多态性位点,采用HaploView软件进行该人群多态性等位基因分布频率的分析、并与HapMap结果进行分布特征比较。结果:PCR扩增和成功测序63例健康人(126条染色体)PPP2RIA基因-1 844～+201nt的目的片段,序列比对发现该人群中6个已知多态性位点及其人群最小等位基因频率分别为-1 039 G>T(+Ins)(rs10414793,但其中T等位基因型含有29个碱基片段的插入)(8.73%)、-568 G>A(rs1864007)(25.40%)、-241 -/G(rsl 1453459)(26.90%)、+87 T>C(rs13344984)(7.94%)、+107 -/C(rs3833207)(30.16%)和+108 A>G(rs1 7554825)(7.94%);且其中2个位点在该人群中的分布与HapMap公布的国外人群数据存在不同(P<0.05);同时,该人群中还发现-512 G>A(2.38%)的潜在新多态性位点。结论:筛查PPP2RIA基因5′-侧翼区在中国广东汉族人群中多态性位点的等位基因分布,为进一步开展多态性功能性分析提供基础。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A 支架亚基Aα PPP2R1A基因 5'侧翼区 多态性
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广东人群PP2A-B亚基基因5′-侧翼区多态性连锁不平衡和单体型分析 被引量：2
3
作者 张树江 林育纯 +6 位作者 陈慧峰 万建新 林丽娜 罗洁 李文 陈雯 林忠宁 《华南预防医学》 2011年第3期1-4,10,共5页
目的探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）的调节B／PR558亚基基因5’-侧翼区多态性的连锁不平衡和人群单体型分布特征。方法选取经体检排除急慢性疾病的50例广东汉族健康人群为调查对象，以人胱舵D基因5’-侧翼区中-1684A〉G（rslll46169）、-1196... 目的探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）的调节B／PR558亚基基因5’-侧翼区多态性的连锁不平衡和人群单体型分布特征。方法选取经体检排除急慢性疾病的50例广东汉族健康人群为调查对象，以人胱舵D基因5’-侧翼区中-1684A〉G（rslll46169）、-1196C〉T（rs9419202）、-462G〉A（rs7074421）和-1610A〉T为4个纳入的多态性位点，采用HaploView软件分析遗传特征、连锁不平衡（LD）和单体型分布，进行人群分布的x2检验。结果50例广东汉族人群中各多态性位点基因型频率均符合Hardy—Weinberg平衡（P〉0．05）；杂合度（π）分别为-1684A〉G（0．020）、-1610A〉T（0．132）、-1196C〉T（0．059）和-462G〉A（0．059），且均不存在变异纯合型，其中在-1196C〉T和-462G〉A位点明显低于HapMap人群（P〈0．05）；-1196C〉T和-462G〉A位点之间呈完全LD，但其他位点间未见LD关系；构建了该人群的3种单体型（HI～H3），频率分布主要是野生单体型（H1，89．0％），其余2种变异单体型分别为H2（7．0％）和H3（3．0％）；筛选出的3个标签SNP为-1684A〉G、-1610A〉T和-462G〉A。结论确定并报道中国南方广东汉族人群PPP2R2D基因5’-侧翼区中相对保守的标签SNP和单体型分布，为进行该基因启动子区的功能分析提供依据。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A B8亚基 PPJp2舵D基因 5’-侧翼区 单体型
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白藜芦醇对KKAy小鼠的胰岛素敏感性影响及机制 被引量：1
4
作者 孙延双 陈思凡 +4 位作者 朱伟 郑琳 张子丽 凌文华 冯翔 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期221-224,共4页
目的:观察白藜芦醇对胰岛素抵抗小鼠(KKAy)胰岛素敏感性的影响,并探讨其机制。方法:将36只8周龄KKAy小鼠分成3组,其中两组KKAy小鼠分别饲喂添加白藜芦醇的AIN93G饲料(2g/kg饲料或4g/kg饲料),另一组KKAy小鼠为模型组,另外以12只同周龄C57... 目的:观察白藜芦醇对胰岛素抵抗小鼠(KKAy)胰岛素敏感性的影响,并探讨其机制。方法:将36只8周龄KKAy小鼠分成3组,其中两组KKAy小鼠分别饲喂添加白藜芦醇的AIN93G饲料(2g/kg饲料或4g/kg饲料),另一组KKAy小鼠为模型组,另外以12只同周龄C57BL/6J小鼠为对照。观察白藜芦醇对小鼠血糖、血清胰岛素水平、葡萄糖耐量、胰岛素耐量等的影响;Western blot实验检测不同组小鼠肝脏中沉默信息调节因子1(silent in-formation regulator 1,sirt-1)蛋白表达及胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)的磷酸化水平。结果:白藜芦醇干预可以增强KKAy小鼠胰岛素敏感性,改善胰岛素耐量和葡萄糖耐量;肝脏中sirt-1的表达和IRS-1的磷酸化水平均升高。结论:白藜芦醇可以改善小鼠胰岛素抵抗及糖耐量异常,这可能与白藜芦醇提高肝脏中sirt-1的表达,从而激活胰岛素信号通路相关蛋白有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胰岛素抵抗 沉默信息调节因子1 胰岛素受体底物1
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核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究
5
作者 麦剑荣 林育纯 +6 位作者 陈慧峰 陈宇曦 夏斌 廖昆 张玉静 高艳芳 林忠宁 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2013年第3期181-185,共5页
目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP... 目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。 展开更多
关键词 核因子-1 蛋白磷酸酶2A B55δ亚基 肝L02细胞
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锌影响镉对人未成熟树突状细胞毒性作用 被引量：1
6
作者 李文 林育纯 +7 位作者 陈慧峰 罗洁 李晓杰 林丽娜 胡耀明 张树江 陈雯 林忠宁 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2011年第3期181-185,共5页
目的探讨锌对镉诱导的人未成熟树突状细胞(iDC)毒性的影响。方法分离人周围血单核细胞(PBMC)并诱导为iDC后,分组给予生理氯化钠溶液(对照组)、氯化镉(CdCl2组)、硫酸锌(ZnSO4组)、锌预处理后加氯化镉(Zn+Cd组)、锌离子特异性螯合剂(TPEN... 目的探讨锌对镉诱导的人未成熟树突状细胞(iDC)毒性的影响。方法分离人周围血单核细胞(PBMC)并诱导为iDC后,分组给予生理氯化钠溶液(对照组)、氯化镉(CdCl2组)、硫酸锌(ZnSO4组)、锌预处理后加氯化镉(Zn+Cd组)、锌离子特异性螯合剂(TPEN)预处理后加氯化镉(TPEN+Cd组)处理。噻唑蓝(MTT)颜色反应法检测细胞活力;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA链断裂损伤;吖啶橙(AO)与碘化丙啶(PI)核双染观察细胞凋亡并通过流式细胞仪检测凋亡细胞中染色体断裂的亚二倍体(SubG1)。结果 CdCl2组iDC活力抑制率随CdCl2呈剂量依赖性显著增高(P<0.05);与ZnSO4组或CdCl2组相比,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞活力抑制率明显升高(P<0.05);相同CdCl2剂量(20μmol/L)时,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞的彗星尾长和尾矩明显增大(P<0.05);各处理组出现凋亡细胞核染色和SubG1阳性细胞比例明显增加。结论镉化合物暴露导致iDC活力降低,其诱导的细胞毒性明显高于锌;细胞内锌稳态干预可增加镉介导的iDC内DNA损伤相关的毒作用敏感性。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 镉 锌 免疫毒性 DNA损伤
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