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壳聚糖载药微球/大孔磷酸钙骨水泥支架的力学性能研究 被引量:4
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作者 李益丰 张姝江 +1 位作者 陈艺 白波 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS 2016年第2期38-41,共4页
目的比较具有大孔径的磷酸钙骨水泥支架在复合了载有万古霉素的壳聚糖微球后的生物力学性能改变。方法使用粒子溶出法制作不同孔隙率的磷酸钙骨水泥支架,用方差分析比较不同孔隙率骨水泥支架的力学性能差异。以乳化化学交联法制作万古... 目的比较具有大孔径的磷酸钙骨水泥支架在复合了载有万古霉素的壳聚糖微球后的生物力学性能改变。方法使用粒子溶出法制作不同孔隙率的磷酸钙骨水泥支架,用方差分析比较不同孔隙率骨水泥支架的力学性能差异。以乳化化学交联法制作万古霉素壳聚糖微球;挑选适宜孔隙率和力学强度的多孔磷酸钙骨水泥支架与2、6、10 mg载药壳聚糖微球复合,检测加微球后的力学强度改变。采用K-W秩和检验做统计学分析。结果随着造孔剂用量的增加,孔隙率增加,分别为(14.7±0.2)%、(52.4±2.3)%、(56.4±2.2)%、(60.4±5.8)%、(64.3±9.7)%;骨水泥支架的抗压强度逐渐下降[(9.4±0.5)Mpa、(7.1±1.1)Mpa、(6.7±2.1)Mpa、(4.5±1.9)Mpa、(1.6±0.7)Mpa],差异有统计学意义(孔隙率:x^2=25.276,P<0.05)(抗压强度:x^2=19.847,P<0.05)。其中使用30%质量分数造孔剂的支架总孔隙率约(60.4±5.8)%,抗压强度为(4.5±1.9)Mpa,比较适中。电镜下观测到孔道直径为1mm左右。选择含30%造孔剂的骨水泥支架添加壳聚糖微球,随着微球质量的增加,其抗压强度分别为(4.4±0.9)Mpa、(4.2±1.1)Mpa、(4.2±1.0)Mpa,差异不具有统计学意义(P>0.05);但含壳聚糖微球的支架和单纯大孔骨水泥支架比较,其抗压强度差异具有统计学意义(x^2=19.847,P<0.05)。结论大孔径磷酸钙骨水泥支架在添加了壳聚糖微球后,其力学性能有所下降,但仍可用于非负重骨缺损修复。 展开更多
关键词 壳聚糖 微球 磷酸钙 骨水泥 力学
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人骨形态蛋白-2可调控系统在大鼠骨髓间充质干细胞的表达 被引量:3
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作者 白波 黄弘轩 +5 位作者 黄芳立 张姝江 杜秀藩 钱东阳 陈艺 姚咏嫦 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS 2017年第6期622-628,共7页
目的构建携带四环素真核诱导表达系统(Tet-on)调控的人骨形态发生蛋白2(h BMP-2)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),为骨缺损修复提供可控的成骨活性细胞。方法设计目的基因h BMP-2引物,将扩增纯化的目的基因h BMP-2定向克隆... 目的构建携带四环素真核诱导表达系统(Tet-on)调控的人骨形态发生蛋白2(h BMP-2)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),为骨缺损修复提供可控的成骨活性细胞。方法设计目的基因h BMP-2引物,将扩增纯化的目的基因h BMP-2定向克隆至携带Tet-on的慢病毒GV347载体上并测序鉴定产物。h BMP-2-GV347质粒、空载的GV347质粒分别与辅助质粒共感染293T细胞以收获慢病毒浓缩液。用h BMP-2-GV347慢病毒转染大鼠BMSCs,得到h BMP-2阳性表达细胞,探索转染最佳感染复数(MOI)。用CCK8法比较BMSCs转染前后的增殖活性;强力霉素(DOX)诱导打开Tet-on,real-time PCR、Western Blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染后各组BMSCs中BMP-2蛋白及RNA的表达情况。结果 PCR后得到目的基因h BMP-2,定向克隆至携带Tet-on系统调控的GV347质粒上,经酶切后电泳、测序结果证实成功构建携带可调控系统的h BMP-2-GV347质粒。h BMP-2-GV347质粒与空载GV347质粒分别感染293T细胞后获得h BMP-2-GV347慢病毒浓缩液。在DOX诱导下,h BMP-2-GV347慢病毒载体在293T细胞内表达BMP-2蛋白。h BMP-2-GV347慢病毒载体转染最佳MOI值为9,且转染后的BMSC细胞增殖能力较普通BMSC强,并在DOX浓度为10μg/ml诱导下稳定表达BMP-2蛋白和RNA。结论本研究成功构建携带Tet-on系统调控h BMP-2慢病毒表达载体,转染BMSCs后在DOX调控下可持续高效表达BMP-2蛋白。 展开更多
关键词 间质干细胞 骨形态发生蛋白质类 慢病毒属 多西环素
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高分子修饰细菌纤维素细胞相容性的初步研究 被引量:2
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作者 黄弘轩 白波 +3 位作者 赖琛 王瑛 陈艺 张姝江 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS CSCD 2020年第1期63-67,共5页
目的筛选适于平滑肌细胞附着生长的聚乳酸-共-聚乙醇酸(PLGA)修饰的细菌纤维素材料。方法不同比例PLGA修饰的细菌纤维素材料分为5组:单纯PLGA材料(50P组);经PLGA修饰的细菌纤维素材料组则包括聚乳酸(PLA)∶聚乙醇酸(PGA)=50∶50的50PB组... 目的筛选适于平滑肌细胞附着生长的聚乳酸-共-聚乙醇酸(PLGA)修饰的细菌纤维素材料。方法不同比例PLGA修饰的细菌纤维素材料分为5组:单纯PLGA材料(50P组);经PLGA修饰的细菌纤维素材料组则包括聚乳酸(PLA)∶聚乙醇酸(PGA)=50∶50的50PB组、PLA∶PGA=75∶25的75PB组和PLA∶PGA=90∶10的90PB组;单纯细菌纤维素为空白对照组。将平滑肌细胞接种于不同组别的材料上培养7 d,扫描电镜观察细胞的生长状态,并用荧光染色计数活/死细胞,CCK8法测定材料上的细胞增殖情况并绘制增殖曲线。不同材料上细胞数量及增殖数据用单因素方差分析比较、两两比较用SNK检验。结果接种后第3天的扫描电镜可见细胞均能在各组材料上成功附着并生长,但75PB组和空白对照组细胞生长形态较差。活/死细胞染色结果显示,平滑肌细胞可以在各组材料中均匀的分布以及生长,活细胞计数各组差异无统计学意义(F=1.454,P>0.05)。细胞生长曲线检测显示,接种后3 d及5 d,平滑肌细胞在各组材料上的增殖量差异无统计学意义(3 d F=1.672,P>0.05;5 d F=1.19,P>0.05);接种后7 d,50PB组和空白对照组的平滑肌细胞增殖优于90PB组及75PB组(F=13.328,P<0.01)。结论PLA/PGA比例为50∶50的PLGA修饰细菌纤维素后的材料细胞相容性更优,可以成为用于组织修复的生物材料。 展开更多
关键词 纤维素 聚乳酸-聚乙醇酸共聚物 肌细胞 平滑肌 生物相容性材料
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软骨组织工程中种子细胞接种密度和比例的研究进展 被引量:1
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作者 谢慧锋 周伟 +1 位作者 白波 张姝江 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期470-478,共9页
目的 综述软骨组织工程中种子细胞接种密度和比例的研究进展。方法 广泛查阅三维结构中构建组织工程软骨的相关文献,对最常用的种子细胞接种密度与比例进行综述。结果 关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACHs)和BMSCs是软骨组织工程... 目的 综述软骨组织工程中种子细胞接种密度和比例的研究进展。方法 广泛查阅三维结构中构建组织工程软骨的相关文献,对最常用的种子细胞接种密度与比例进行综述。结果 关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACHs)和BMSCs是软骨组织工程中最常用的种子细胞,体内、外实验显示两种细胞均具有一定形成透明软骨的能力。而种子细胞的接种密度和比例对最终形成的组织工程软骨质量有重要影响。ACHs或BMSCs细胞接种密度接近或高于正常关节软骨中的细胞密度时,可构建出质量较好的组织工程软骨。在相同培养条件下,BMSCs在单独应用时形成透明软骨的能力不如ACHs或两者共培养。结论 受支架材料、生长因子、细胞代次等因素影响,软骨组织工程中最优的细胞接种密度与比例仍需进一步研究。 展开更多
关键词 软骨组织工程 关节软骨细胞 BMSCS 共培养 接种密度 细胞比例
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转化生长因子对两种人骨肉瘤细胞株侵袭和迁移的影响
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作者 樊攀 兰海峰 +2 位作者 陈艺 张姝江 白波 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS 2017年第2期45-51,共7页
目的观察外源性转化生长因子beta(TGF-β)对人骨肉瘤细胞HOS、MG-63细胞侵袭和迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法 SD208是TGF-β受体抑制剂,可以特异性抑制TGF-β信号通路。本实验所需细胞由广州医科大学实验医学研究中心赠与... 目的观察外源性转化生长因子beta(TGF-β)对人骨肉瘤细胞HOS、MG-63细胞侵袭和迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法 SD208是TGF-β受体抑制剂,可以特异性抑制TGF-β信号通路。本实验所需细胞由广州医科大学实验医学研究中心赠与。用TGF-β与SD208分别和共同处理人骨肉瘤细胞HOS、MG-63,采用划痕实验检测TGF-β对细胞迁移的影响,侵袭实验(Transwell)检测TGF-β对细胞侵袭的影响,实时荧光定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测TGF-β与SD208处理细胞后PTHr P(甲状旁腺激素相关蛋白)、解离素19(ADAM19)、白细胞介素-11(IL-11)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因的变化,蛋白免疫印迹检测TGF-β与SD208对细胞PTHr P和MMP-2蛋白的作用。TGF-β和SD208处理细胞后各基因、蛋白及侵袭和迁移能力的变化,通过Graphpad Prism 5统计学软件进行统计分析,采用单因素方差分析经行分析,两两比较采用Bonferroni法进行比较。结果 TGF-β刺激骨肉瘤细胞后,细胞侵袭及迁移能力增强,HOS对照组、TGF-β组、SD208组和TGF-β+SD208组24 h侵袭细胞数分别为(73.4±5.2)个、(161.8±8.1)个、(55.3±4.5)个、(68.2±6.1)个,差异有统计学意义(F=6.9,P<0.05);MG63细胞为(19.9±1.5)个、(32.3±2.2)个、(15.7±1.5)个、(17.6±2.5)个,差异有统计学意义(F=7.3,P<0.05)。TGF-β能够明显上调细胞PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2 mRNA的表达,同时PTHr P与MMP-2的蛋白表达明显升高。HOS对照组、TGF-β组、SD208组和TGF-β+SD208组PTHr P蛋白表达量分别为(0.2±0.02)、(0.5±0.07)、(0.2±0.02)、(0.2±0.14)差异有统计学意义(F=4.6,P<0.05)。MMP-2蛋白表达量分别为(0.4±0.03)、(0.8±0.02)、(0.2±0.02)、(0.3±0.02)差异有统计学意义(F=5.1,P<0.05)。结论外源性TGF-β能够增强人骨肉瘤细胞HOS、MG-63细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与升高细胞内PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2有关。 展开更多
关键词 转化生长因子Β 骨肉瘤 细胞迁移 肿瘤侵袭
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