猪轮状病毒G9P[7]型云南株的分离鉴定及VP4和VP7基因测序分析

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作者 王修武 邓可辉 +5 位作者 马沐林 关金连 韩淑杰 郭智轩 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期1-7,共7页

为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性... 为确定云南省某猪场仔猪腹泻的病原,对送检腹泻病仔猪小肠组织样品进行猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)RT-PCR检测,将PoRV检测阳性样品处理后接种至MA-104细胞进行PoRV分离;对分离毒株进行间接免疫荧光、电镜观察、胶体金检测和VP4、VP6、VP7基因测序及遗传进化分析。结果显示,仔猪肠道组织样品经终浓度20μg/mL的胰酶在37℃孵育2 h,能在MA-104细胞上增殖传代,第3代出现稳定的细胞病变,盲传20代,每隔5代进行PoRV的检测;间接免疫荧光试验可见特异性荧光,胶体金和RT-PCR检测均为PoRV阳性,电镜观察可见病毒粒子直径约为65 nm,呈车轮状,符合PoRV粒子典型形态特征,将该分离株命名为PoRV YN-A株。基因同源性比较和遗传进化树分析显示,YN-A株的VP6基因序列与国内A群GD株的同源性为99.93%,VP7与中国G9型NJ2012株的同源性为99.12%,VP4与美国P[7]型OSU株的同源性为98.91%,确定该分离株为猪A群轮状病毒G9P[7]型。YN-A株VP7序列在9个氨基酸位点存在点突变,即aa9(I→V)、aa16(V/T→I)、aa44(A→V)、aa100(D/E→N)、aa212(T/A→K)、aa221(N→S)、aa225(V→A)、aa271(I→V)、aa267(D→E)。首次从云南地区的腹泻仔猪小肠组织中成功分离到1株G9P[7]型的新基因型PoRV毒株,为PoRV的致病性、分子生物学特性研究及PoRV G9优势基因型新疫苗研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪A群轮状病毒 分离鉴定 G9基因型 基因测序 电镜观察

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鸡肉低温储藏保鲜技术研究进展 被引量：12

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作者 刘梦竹 魏琦麟 +3 位作者 向蓉 康桦华 彭新宇 徐志宏 《保鲜与加工》 CAS 2022年第3期104-110,120,共8页

鸡肉具有高蛋白、低脂肪,矿物质和维生素丰富,风味独特、生产成本低等优点,相对于猪、羊、牛肉,其性价比更高,符合消费者对营养丰富食物的追求。随着消费量的逐年上升,鸡肉在流通和销售等环节中的品质和货架期备受关注。低温储藏保鲜能... 鸡肉具有高蛋白、低脂肪,矿物质和维生素丰富,风味独特、生产成本低等优点,相对于猪、羊、牛肉,其性价比更高,符合消费者对营养丰富食物的追求。随着消费量的逐年上升,鸡肉在流通和销售等环节中的品质和货架期备受关注。低温储藏保鲜能抑制或杀死微生物、降低酶活性和生化反应速率等,是一种有效便捷的保鲜技术,常用于鸡肉流通过程中。总结了目前评价鸡肉品质的感官、化学、物理和微生物指标情况,比较了冷藏、冰温、超冰温、冻藏四种低温储藏保鲜技术的效果及特点,并对鸡肉储藏保鲜技术未来发展趋势以及鸡肉品质评价等进行了展望,旨在为流通储藏等环节中保持鸡肉品质、延长其货架期提供一定的参考。 展开更多

关键词 鸡肉 品质指标 冷藏保鲜 冰温储藏 超冰温储藏 冻藏保鲜

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冷鲜肉微生物种类及微生物预测模型的研究进展 被引量：12

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作者 邓森荣 向蓉 +4 位作者 魏琦麟 康桦华 彭新宇 袁明贵 徐志宏 《广东农业科学》 CAS 2021年第3期133-141,共9页

肉品安全是一个重要的研究课题,预测肉品微生物的变化是监测食品货架期的基础,它根据食品微生物在不同加工技术、储藏和流通条件下的变化规律,通过建立模型和计算机处理,判断食品内主要致病菌和腐败菌生长或残存的动态变化,从而对食品... 肉品安全是一个重要的研究课题,预测肉品微生物的变化是监测食品货架期的基础,它根据食品微生物在不同加工技术、储藏和流通条件下的变化规律,通过建立模型和计算机处理,判断食品内主要致病菌和腐败菌生长或残存的动态变化,从而对食品的质量和安全性作出快速评估和预测。生鲜肉食品的腐败主要是生产加工过程中微生物污染所致,不同的微生物在特定的条件下生长速率不同,因此不同冷鲜肉类上的特定腐败菌也有所不同。根据微生物在特定的肉类以及环境条件下的生长规律构建微生物预测模型,从而进行货架期预测。综述各种冷鲜肉上的腐败菌以及当前的微生物预测模型种类,并展望该领域的发展方向。 展开更多

关键词 微生物 预测模型 冷鲜肉 腐败菌 贷架期

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不同贮藏温度下稻花鸡肉的品质及细菌组成多样性变化 被引量：5

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作者 刘梦竹 向蓉 +5 位作者 魏琦麟 康桦华 涂杜 田雅 吴俊仪 徐志宏 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第8期112-123,共12页

本文研究了25℃常温、4℃冷藏、0℃冰温贮藏下稻花鸡肉pH值、水分含量、菌落总数、挥发性盐基氮(Total Volatile Basic Nitrogen,TVB-N)及感官评价;基于16S rRNA,研究货架期前后鸡肉细菌群落结构、演替规律及相对丰度。结果表明:结果表... 本文研究了25℃常温、4℃冷藏、0℃冰温贮藏下稻花鸡肉pH值、水分含量、菌落总数、挥发性盐基氮(Total Volatile Basic Nitrogen,TVB-N)及感官评价;基于16S rRNA,研究货架期前后鸡肉细菌群落结构、演替规律及相对丰度。结果表明:结果表明:25℃常温12 h菌落总数和TVB-N均超过国家标准规定,水分含量和pH第12 h后变化趋势极大;4℃冷藏4 d菌落总数超过国家标准规定,TVB-N为13.64 mg/100 g,水分含量和pH第4天后均呈显著性差异;0℃冰温8 d菌落总数为8.90×10^(5) CFU/g,未超过国家标准规定,但TVB-N为15.25 mg/100 g,超过国标限值,水分含量和pH第8天后变化趋势极大。综合各品质指标,三种贮藏温度下货架期分别为12 h、4 d、8 d,感官评分均在可接受范围内。25℃贮藏末期以不动杆菌属、沙雷氏菌属、多源菌属、泛菌属、肠杆菌科未分类属细菌为主。4℃与0℃贮藏末期优势腐败菌均以假单胞菌属、不动杆菌属、沙雷氏菌属、肠杆菌科未分类属为主,但丰度占比有较大差异。不同贮藏温度下稻花鸡肉品质、货架期及细菌群落多样性为研究延长鸡肉保鲜提供相应的理论参考。 展开更多

关键词 稻花鸡肉 贮藏温度 菌群多样性 高通量测序 优势腐败菌 品质 货架期

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猪丁型冠状病毒感染麻黄鸡的研究 被引量：3

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作者 王修武 陈志飞 +6 位作者 邓可辉 俞婷 刘文华 郭智轩 魏文康 陈瑞爱 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期17-21,共5页

为研究猪丁型冠状病毒(PDCoV)跨物种传播宿主谱及其致病性,将PDCoV(HN-17毒株)接种至6日龄SPF麻黄鸡并采集感染鸡的组织器官,通过临床症状、RT-PCR、病理组织切片分析等对其组织嗜性、组织病理学变化进行系统研究。结果表明,口服接种PD... 为研究猪丁型冠状病毒(PDCoV)跨物种传播宿主谱及其致病性,将PDCoV(HN-17毒株)接种至6日龄SPF麻黄鸡并采集感染鸡的组织器官,通过临床症状、RT-PCR、病理组织切片分析等对其组织嗜性、组织病理学变化进行系统研究。结果表明,口服接种PDCoV的麻黄鸡出现腹泻等临床症状,在感染鸡的肺脏、空肠、直肠、肾脏中均检测到PDCoV的RNA,感染鸡的肺脏、空肠产生以出血、炎性细胞浸润为主要特征的组织病理学变化,证明PDCoV可以感染麻黄鸡并致病。证实猪丁型冠状病毒可感染麻黄鸡,为PDCoV的跨物种传播及该病防控提供参考。 展开更多

关键词 猪丁型冠状病毒 致病性 麻黄鸡 跨物种传播

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基于传统烹饪肉类预制菜的加工技术需求 被引量：4

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作者 刘梦竹 康桦华 +4 位作者 涂杜 韩依辛 谭庶 甄锐 徐志宏 《广东畜牧兽医科技》 2023年第3期24-29,48,共7页

畜禽肉类预制菜是指以畜禽肉为主要原料,经过加工处理后的成品或半成品,作为主食菜肴。该文基于预制菜基本特征和发展现状,比较了传统畜禽肉类烹饪菜肴与肉类预制菜工业化的特征,总结了中西传统畜禽肉类产品加工工艺,针对肉类预制菜和... 畜禽肉类预制菜是指以畜禽肉为主要原料,经过加工处理后的成品或半成品,作为主食菜肴。该文基于预制菜基本特征和发展现状,比较了传统畜禽肉类烹饪菜肴与肉类预制菜工业化的特征,总结了中西传统畜禽肉类产品加工工艺,针对肉类预制菜和传统菜肴的特点,提出相应发展预制菜的技术需求和建议,以期为科技创新推动畜禽肉类预制菜产业快速发展提供参考。 展开更多

关键词 预制菜 畜禽肉 发展 加工工艺

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H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的制备及鉴定

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作者 董楠 刘郁夫 +3 位作者 杨小云 谭银娟 欧阳征亮 陈瑞爱 《养禽与禽病防治》 2024年第3期11-18,共8页

为构建H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒,研制新型基因工程疫苗。利用杆状病毒一昆虫细胞表达系统,在Sf9细胞中共表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白。将H5亚型禽流感病毒的HA基因和M1基因分别克隆至pFastBac-dual载体PH和P10启动子下游多... 为构建H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒,研制新型基因工程疫苗。利用杆状病毒一昆虫细胞表达系统,在Sf9细胞中共表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白。将H5亚型禽流感病毒的HA基因和M1基因分别克隆至pFastBac-dual载体PH和P10启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFastBac-H5-M1,再通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,将重组杆粒转染至昆虫细胞Sf9中,拯救重组杆状病毒,通过间接免疫荧光、westernblot试验鉴定是否表达特异性蛋白,最后在透射电镜下观察病毒样颗粒的形态。重组H5亚型禽流感病毒HA基因和M1基因的杆状病毒,在Sf9细胞中盲传3代后,可在显微镜下观察到杆状病毒感染引起的细胞肿胀破裂等细胞病变;通过间接免疫荧光试验可观察到细胞内绿色荧光信号,证明重组杆状病毒拯救成功;westernblots试验结果显示Sf9细胞中可检测到HA蛋白和M1蛋白,目的条带大小分别为70ku和25ku左右,与预期相符,并且均以分泌上清的形式表达;通过透射电镜可在Sf9细胞上清中观察到与流感病毒结构类似的颗粒。本研究成功构建共表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白和M1蛋白的重组杆状病毒,该重组杆状病毒可在Sf9昆虫细胞中组装成与天然流感病毒粒子结构相似的颗粒样物质。 展开更多

关键词 H5亚型 禽流感病毒 杆状病毒 病毒样颗粒

原文传递

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

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作者 孙荣航 容芳 +2 位作者 陈桂娥 刘郁夫 陈瑞爱 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第14期61-67,73,126,共9页

为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋... 为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;将纯化后的重组蛋白于皮下免疫Balb/c小鼠,免疫结束后测定免疫小鼠血清效价,当小鼠血清抗体效价达到1∶100000时进行细胞融合;采用有限稀释法进行亚克隆,筛选能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性杂交瘤细胞株,鉴定杂交瘤细胞株抗体亚类,并选择1株抗体效价最高的细胞株再次注射到小鼠腹腔中(5×10^(5)个/只),取腹水采用亲和层析法对单克隆抗体进行纯化;采用间接ELISA方法测定单克隆抗体效价并检测其特异性,分别采用Western-blot和间接免疫荧光试验检测单克隆抗体的反应性。结果表明:PCR扩增得到大小为708 bp的Cap基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-Cap;重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)经诱导后表达的重组蛋白可与His标签抗体发生特异性反应,纯化后的重组蛋白在预期位置(31.7 ku)出现清晰的单一条带;共筛选出8株能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性单克隆细胞株(1E5、2A9、3C6、4B3、5F7、6D11、7A2、8G1株),抗体亚类鉴定均为IgG1亚类。其中7A2株抗体效价最高,用于单克隆抗体的制备;间接ELISA方法证实7A2株单克隆抗体仅与PCV-2 Cap蛋白发生反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)不发生反应;Western-blot和间接免疫荧光试验均证实PCV-2 Cap蛋白可被7A2株单克隆抗体特异性识别。说明本试验成功 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型(PCV-2) 单克隆抗体 CAP蛋白 细胞融合 亚克隆

原文传递

丁酸梭菌及产丁酸代谢改造 被引量：6

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作者 傅云扉 魏琦麟 +4 位作者 袁明贵 康桦华 田雅 向蓉 徐志宏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期37-45,共9页

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种专性厌氧菌,可通过多基因过表达、同源重组、基于非复制型质粒和非复制型质粒的同源重组等多种遗传操作方式对其进行改造。丁酸是丁酸梭菌发酵的产物之一,丁酸用途广泛,用于饲料添加剂,可提高动... 丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种专性厌氧菌,可通过多基因过表达、同源重组、基于非复制型质粒和非复制型质粒的同源重组等多种遗传操作方式对其进行改造。丁酸是丁酸梭菌发酵的产物之一,丁酸用途广泛,用于饲料添加剂,可提高动物抵抗力,减少抗生素的使用。用丁酸梭菌发酵产丁酸,其产量仍然较低,不利于工业化生产,有必要通过代谢工程对丁酸梭菌产丁酸的途径进行优化。对丁酸梭菌的主要代谢途径、遗传操作体系及丁酸合成途径的优化等研究进展进行了综述。在此基础上,对丁酸梭菌进一步改造的思路和想法进行了展望。 展开更多

关键词 丁酸梭菌 代谢途径 丁酸 改造

原文传递

肉品保鲜包装材料与新技术研究进展 被引量：1

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作者 张乾坤 康桦华 +2 位作者 刘梦竹 涂杜 徐志宏 《包装工程》 CAS 北大核心 2024年第3期126-138,共13页

目的 对现阶段肉品保鲜包装材料及相应的包装新技术进行研究总结,以期为肉类食品保鲜提供一定参考。方法 通过查阅国内外相关文献,总结当前肉类食品使用的包装材料及包装技术,综述真空包装、气调包装、智能包装的研究进展,分析其存在的... 目的 对现阶段肉品保鲜包装材料及相应的包装新技术进行研究总结,以期为肉类食品保鲜提供一定参考。方法 通过查阅国内外相关文献,总结当前肉类食品使用的包装材料及包装技术,综述真空包装、气调包装、智能包装的研究进展,分析其存在的优点和不足,并对其未来发展趋势进行展望。结论 包装可对肉品起到直接的保护作用,在一定程度上延长了肉品的货架期。新型包装材料及配套包装技术的应用对提升肉品质量和安全至关重要。未来更加安全高效便捷的新型肉类食品包装材料及不同包装技术间的结合会成为行业发展的大趋势。 展开更多

关键词 肉品保鲜 包装材料 包装技术 货架期

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共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价

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作者 吕亚迪 杨洁 +2 位作者 谢文婷 徐婷 陈瑞爱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2123-2134,共12页

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF... 旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 HA蛋白 新城疫病毒 免疫原性 载体疫苗 免疫保护效率

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STING信号通路在不同宿主疾病中的研究进展

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作者 王焕硕 牛瑞辉 +6 位作者 赵亮 罗胜军 温肖会 宋帅 贾春玲 周秀蓉 吕殿红 《广东畜牧兽医科技》 2024年第2期57-64,84,共9页

cGAS-STING是一种细胞内DNA感受器,可以针对入侵的病原体和自身免疫性疾病激活先天性免疫应答,STING通路激活可启动干扰素调节因子(IRF3)和核因子(NF-κB)。IRF3能向细胞核内转运,并触发免疫刺激基因(ISGs)和Ⅰ型干扰素(IFNs)的表达,导... cGAS-STING是一种细胞内DNA感受器,可以针对入侵的病原体和自身免疫性疾病激活先天性免疫应答,STING通路激活可启动干扰素调节因子(IRF3)和核因子(NF-κB)。IRF3能向细胞核内转运,并触发免疫刺激基因(ISGs)和Ⅰ型干扰素(IFNs)的表达,导致免疫细胞激活并迁移到靶细胞,NF-κB能驱动炎症细胞因子的产生。cGAS-STING可导致介导炎症反应的蛋白产生,并且能在宿主抵抗入侵的病原、自身免疫性疾病、肿瘤免疫和衰老相关炎症中发挥着独特和关键的作用。该文以cGAS-STING信号通路的结构和功能作为切入点,对其在不同宿主中的调控作用进行综合论述,以期为cGAS-STING的相关研究提供理论依据和参考价值。 展开更多

关键词 STING 信号通路 先天性免疫 宿主疾病

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不同贮藏温度下稻花鸡肉优势腐败菌变化及Arrhenius货架期预测模型的建立

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作者 刘梦竹 徐志宏 +2 位作者 魏琦麟 涂杜 康桦华 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第2期178-186,共9页

为获得稻花鸡肉腐败菌的Arrhenius货架期预测模型,采用培养基初步筛选与16S rDNA全基因序列鉴定优势腐败菌,研究不同贮藏温度(25、4、0℃)下优势腐败菌和菌落总数的生长变化,通过化学反应动力学方程构建菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货... 为获得稻花鸡肉腐败菌的Arrhenius货架期预测模型,采用培养基初步筛选与16S rDNA全基因序列鉴定优势腐败菌,研究不同贮藏温度(25、4、0℃)下优势腐败菌和菌落总数的生长变化,通过化学反应动力学方程构建菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货架期预测模型并进行验证。结果表明,稻花鸡肉在贮藏过程中逐渐占主导地位的优势腐败菌是假单胞菌属莓实假单胞菌和肠杆菌科沙雷氏菌属液化沙雷氏菌。稻花鸡肉25℃常温贮藏下货架期不超过0.5 d,腐败中后期沙雷氏菌占主导地位,4℃冷藏保鲜货架期不超过4 d,假单胞菌和沙雷氏菌均随贮藏时间的延长呈增长趋势,0℃冰温贮藏货架期不超过10 d,贮藏后期假单胞菌和沙雷氏菌差异性不显著。利用菌落总数、假单胞菌、沙雷氏菌3个指标建立货架期预测模型,3种货架期预测模型预测值与实测值对比,平均相对误差均在允许范围内,预测效果最佳的是假单胞菌货架期预测模型。菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货架期预测模型均能对稻花鸡肉的货架期进行真实预测。 展开更多

关键词 稻花鸡肉 菌落总数 假单胞菌 沙雷氏菌 货架期预测模型

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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GD2022株的分离鉴定及遗传进化分析

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作者 邓可辉 王修武 +3 位作者 郭智轩 韩淑杰 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期34-41,共8页

为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-... 为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-1和PRRSV-2参考毒株序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,成功分离1株PRRSV-1,命名为GD2022株,其接种PAMs可引起典型的细胞病变,从出现病变的F5细胞中提取核酸,用PCR分段扩增出PRRSV-1 GD2022株10个基因组片段,分别连接到pCE2 TA/Blunt-Zero载体进行测序,拼接后获得PRRSV-1 GD2022株全基因组长15058个核苷酸(不包含polyA尾)。同源性分析显示,该分离株全基因组序列与PRRSV-1参考毒株(LV株)和PRRSV-2参考毒株(VR2333株)核苷酸序列同源性分别为87%和59.7%。遗传进化树分析显示,全基因序列和ORF5基因与国内外PRRSV-1毒株为同一进化分支,且与疫苗毒分支较远,推断分离株为1株PRRSV-1,属于基因亚型1。氨基酸序列比对分析显示,ORF3和ORF4重叠区域缺失3个核苷酸,导致GP3蛋白和GP4蛋白分别在第245和第65氨基酸位点缺失了1个氨基酸,且与LV株比对,GD2022毒株GP5的氨基酸序列在中和抗原表位第33氨基酸位点(D→A)出现点突变,在高变区第56氨基酸位点(D→A)和第63氨基酸位点(G→D)出现两处突变。重组分析显示,GD2022毒株未发生重组事件。成功分离鉴定1株PRRSV-1毒株,为国内PRRSV-1生物学特性研究提供了材料,也为了解广东省内PRRSV-1流行情况及变异特点提供参考依据。 展开更多

关键词 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 全基因组测序 遗传进化分析

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三株鸡传染性支气管炎病毒优势流行毒株全基因组分析及其致病性

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作者 熊挺 何献铭 +6 位作者 赵希雅 庄婷婷 黄美珍 梁世金 余传照 梁雪静 陈瑞爱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2109-2122,共14页

为调查研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及优势毒株致病特性,本研究对实验室分离的IBV毒株进行了遗传演化研究和致病性研究,旨在了解我国当下IBV流行毒株基因型、生物学特性以及为新疫苗的研制提供借鉴参考。首先对56株IBV分离毒株S... 为调查研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及优势毒株致病特性,本研究对实验室分离的IBV毒株进行了遗传演化研究和致病性研究,旨在了解我国当下IBV流行毒株基因型、生物学特性以及为新疫苗的研制提供借鉴参考。首先对56株IBV分离毒株S1全长核苷酸序列进行遗传演化分析,从中挑选了MH20、KC和JS96 3株优势基因型毒株进行全基因组测序分析,然后选取毒力较强的JS96毒株进行了SPF鸡致病性试验。结果表明:遗传演化分析结果显示GI-19是我国主要流行毒株,占比约53.57%,同时变异毒不断涌现,GVI(新基因型)明显的流行增多。3株优势基因型分离毒株的全长基因组与QX-like毒株相似性最高,达到97%以上,但与国内外疫苗株、经典毒株的相似性低,仅为77%左右。抗原表位分析同样表明了分离株与疫苗毒株、经典毒株的B细胞抗原表位数量和序列都存在差异。3株分离毒株均可导致SPF鸡胚矮化和致死,其中JS96对1日龄SPF鸡的致病率高于15日龄SPF鸡,1日龄SPF鸡100%死亡率,15日龄SPF鸡出现生长显著迟缓和个别鸡症状明显,发病鸡剖检均可见“花斑肾”。本研究表明,QX-like基因型IBV毒株是现下IBV的主要流行毒株,对低日龄鸡致病性强,易发生基因重组,与疫苗毒株、经典毒株S蛋白相似性低,适配性较差,急需选择合适疫苗及研发新型疫苗,才能控制当下IBV疫病流行,减少养禽业的损失。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 基因测序 演化与相似性分析 致病性

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我国猪圆环病毒3型分子流行病学研究概况 被引量：1

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作者 温肖会 高小鹏 +6 位作者 朱春根 贾春玲 吕殿红 周秀蓉 翟颀 徐志宏 罗胜军 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期99-103,共5页

2016年,一种新的圆环病毒在美国被发现,该病毒被命名为猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3),PCV3感染可造成临床猪只呼吸、消化、生殖等多系统炎症。目前,PCV3的致病机制尚不清楚,但人们对PCV3分子流行病学的研究却在不断深入。... 2016年,一种新的圆环病毒在美国被发现,该病毒被命名为猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3),PCV3感染可造成临床猪只呼吸、消化、生殖等多系统炎症。目前,PCV3的致病机制尚不清楚,但人们对PCV3分子流行病学的研究却在不断深入。为了解我国PCV3分子流行病学情况,作者通过对GenBank中我国上传的426条PCV3全基因序列进行整理,借助分子生物学软件对PCV3各基因型统计分析,并统计了我国PCV3分子流行病学相关文献,回顾了我国近年来PCV3流行及其分型研究进展。通过对我国PCV3分子流行病学进行综述,旨在为进一步做好PCV3的防控提供科学依据。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 基因分型 分子流行病学

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非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及单克隆抗体制备

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作者 陈桂娥 容芳 +7 位作者 冯夏宁 孙荣航 马绍钊 郝文茜 叶子安 刘郁夫 李作生 陈瑞爱 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4646-4654,共9页

【目的】表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白,并制备其单克隆抗体。【方法】构建原核表达载体pET-28b-p72,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行诱导表达和蛋白纯化;用纯化后的p72蛋白免疫BALB/c小鼠,将... 【目的】表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白,并制备其单克隆抗体。【方法】构建原核表达载体pET-28b-p72,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行诱导表达和蛋白纯化;用纯化后的p72蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合并制备单克隆抗体,通过间接ELISA法和亚克隆筛选出分泌抗体的阳性杂交瘤细胞;通过小鼠抗体类型检测试剂盒检测抗体类型;通过体内诱生法制备抗ASFV p72蛋白的单克隆抗体腹水,使用饱和硫酸铵沉淀法进行抗体纯化,通过间接ELISA法、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting检测单克隆抗体效价和特异性。【结果】ASFV p72重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,将纯化的p72蛋白制备单克隆抗体,获得4株分泌IgG1抗体的单克隆细胞株,分别命名为6F8、7C3、8H7和9G2。间接ELISA结果显示,6F8与8H7细胞株分泌的抗体效价均为1∶6400,7C3与9G2细胞株的抗体效价均为1∶12800,且4株细胞株分泌的抗体与p72蛋白反应结果均呈阳性,与猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)反应均呈阴性。4株单克隆细胞株分泌的抗体均能与p72真核蛋白发生特异性反应。【结论】本研究成功制备了4株能稳定分泌与ASFV p72蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究ASFV p72蛋白的功能以及非洲猪瘟的防控和诊断建立了基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 原核表达 单克隆抗体

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黑曲霉固态发酵凉茶渣产酶工艺研究 被引量：5

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作者 袁明贵 向蓉 +5 位作者 马广宇 彭新宇 田雅 周廷斤 徐志宏 祁振宽 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第6期112-118,共7页

为探索利用黑曲霉固态发酵凉茶渣进行资源化利用的可行性,以内切葡聚糖酶、木聚糖酶和果胶酶的活力为指标,对氮源、碳源、含水量、发酵时间、浸泡液pH值和温度共6个单因素进行考察;根据单因素试验结果,添加4%硫酸铵作为氮源,2%葡萄糖为... 为探索利用黑曲霉固态发酵凉茶渣进行资源化利用的可行性,以内切葡聚糖酶、木聚糖酶和果胶酶的活力为指标,对氮源、碳源、含水量、发酵时间、浸泡液pH值和温度共6个单因素进行考察;根据单因素试验结果,添加4%硫酸铵作为氮源,2%葡萄糖为碳源,通过正交试验,以3种酶活力的总和为指标,优化制备工艺,发现含水量为70%,浸泡液pH值为9.00,温度为31℃,发酵168 h,是3种酶的最佳生产工艺。最佳工艺条件下发酵产物的内切葡聚糖酶活力为(5.72±0.23)U/g,木聚糖酶活力为(42.43±2.50)U/g,果胶酶活力为(29.81±0.69)U/g,3种酶活力总和为(77.96±1.08)U/g。 展开更多

关键词 固态发酵 凉茶渣 黑曲霉 正交试验 内切葡聚糖酶 木聚糖酶 果胶酶

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非洲猪瘟病毒B602L蛋白的真核表达及多克隆抗体的制备

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作者 刘郁夫 林晓慧 +3 位作者 郝文茜 冯夏宁 欧阳征亮 陈瑞爱 《中国兽药杂志》 2023年第10期1-8,共8页

为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆... 为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆虫细胞Sf9,拯救重组B602L基因的杆状病毒。经间接免疫荧光和western blots鉴定结果显示,B602L重组蛋白与His标签抗体、非洲猪瘟标准阳性血清均能发生特异性反应,并且B602L重组蛋白可以细胞分泌上清的形式进行表达。通过His镍株亲和纯化的方式纯化重组蛋白,B602L蛋白大小约70 ku,与预期相符。将B602L重组蛋白与弗氏佐剂配比免疫BALB/c小鼠,制备小鼠多克隆抗体,经间接ELISA检测,该抗体效价可达1∶512000,并且与B602L重组蛋白具有良好的反应性。本研究可为进一步研究非洲猪瘟B602L蛋白的结构与功能、研制非洲猪瘟诊断制品提供生物材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 B602L 真核表达 多克隆抗体

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肉品与屠宰场环境细菌相关性的研究 被引量：1

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作者 刘梦竹 邓森荣 +3 位作者 康桦华 魏琦麟 涂杜 徐志宏 《食品安全导刊》 2023年第10期53-55,共3页

屠宰场生产环境中存在着大量的细菌,即使环境达到食品安全卫生标准,屠宰后的猪肉中仍不可避免地被环境微生物所污染。通过大量采集屠宰场环境样品和屠宰场生猪肉产品样品,分离、培养与鉴定环境样品和猪肉样品中的微生物,对比分析两种样... 屠宰场生产环境中存在着大量的细菌,即使环境达到食品安全卫生标准,屠宰后的猪肉中仍不可避免地被环境微生物所污染。通过大量采集屠宰场环境样品和屠宰场生猪肉产品样品,分离、培养与鉴定环境样品和猪肉样品中的微生物,对比分析两种样品中的微生物培养及鉴定结果可知,屠宰场猪肉产品上的微生物与屠宰场环境中的微生物之间存在相关性。 展开更多

关键词 猪肉 屠宰场 致病菌 腐败菌 相关性

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