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利用白消安致BALB/c小鼠生殖毒性建立NOA疾病模型 被引量：2
1
作者 李慧赟 王慧芳 +3 位作者 孟晓丽 赵均 宋春英 郭兴萍 《中国生育健康杂志》 2021年第3期247-251,F0004,共6页
目的利用白消安对BALB/c雄性小鼠生殖毒性,建立不同损伤程度的NOA(non-obstructive azoospermia,NOA)动物模型。方法本研究取6~8周龄性成熟的BALB/c雄性小鼠共45只,随机分为3组:0 mg/kg组、30 mg/kg组、40 mg/kg组,每组15只。每2周观察... 目的利用白消安对BALB/c雄性小鼠生殖毒性,建立不同损伤程度的NOA(non-obstructive azoospermia,NOA)动物模型。方法本研究取6~8周龄性成熟的BALB/c雄性小鼠共45只,随机分为3组:0 mg/kg组、30 mg/kg组、40 mg/kg组,每组15只。每2周观察并记录小鼠体重,睾丸和附睾湿重,睾丸体积,及生精细胞损伤程度。通过HE染色,判断生精细胞受损情况;通过免疫组化技术检测受损生精细胞停滞的减数分裂阶段,该法主要借助生精细胞减数分裂过程中的三个标记蛋白:STRA8(Stimulated by Retinoic Acid 8,STRA8)减数分裂启动标记蛋白,SCP3(Synaptonemal Complex Protein 3,SCP3)减数分裂中标记蛋白,TNP1(Transition Protein 1,TNP1)减数分裂后标记蛋白。结果注射白消安后小鼠存活良好,注射白消安2周时,生精细胞开始损伤,30 mg/kg组轻于40 mg/kg组;4周时,40 mg/kg组呈唯支持细胞样变化;6-10周时,生精功能开始恢复,30 mg/kg组恢复明显快于40 mg/kg组;40 mg/kg组STRA8、SCP3、TNP1表达在注射4周最低,第8周开始恢复到正常水平。结论白消安40 mg/kg组单次注射4周时,可建立为唯支持细胞型NOA生精障碍模型;单词注射4-8周期间,可建立损伤程度不同的NOA生精障碍模型,为睾丸组织体外培养提供稳定的研究组织。 展开更多
关键词 白消安 BALB/C小鼠 NOA 动物模型
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白纹伊蚊T7噬茵体展示cDNA文库的构建
2
作者 冀霞 赵瑞君 +1 位作者 刘美德 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2012年第2期78-83,共6页
为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和H... 为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11I黏性末端；接着用MiniColumn纯化收集300bp以上的双链cDNA片段连接于T7 Select 10—3b载体；经体外包装后，以BLT5403为受体菌构建1v7噬菌体展示cDNA文库。所建文库的库容量经测定为1．7×10’pfu／mL，扩增后文库滴度为2．5×10^（15）pfu／mL。对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定，重组率为95％以上；阳性克隆片段长度分布在200～2000bp，其中有90％的插入片段大于300bp。本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库，满足cDNA文库的基本要求，可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 蚊媒病毒 T7噬菌体 cDNA展示文库
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登革2型病毒E蛋白基因的酵母表达
3
作者 刘美德 冀霞 +4 位作者 余张 杨正国 罗森 赵瑞君 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2017年第4期217-222,共6页
为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组... 为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达。首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子。然后,重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子;经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子。最后,经甲醇诱导基因表达,Western-blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间。本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达,并且确定其表达最佳发酵时间为96 h;为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 登革2型病毒 E蛋白 分泌表达 毕赤酵母
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幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎Hp密度及cagA基因对胃黏膜诱导型NOS表达的影响 被引量：3
4
作者 原素梅 郝素珍 +2 位作者 姚红 崔雪萍 刘俊 《山西医科大学学报》 CAS 2005年第1期25-27,共3页
目的　探讨Helicobacterpylori(Hp)相关性胃炎中Hp密度、cagA基因对胃黏膜iNOS表达的影响。 方法　免疫组化技术对iNOS进行定位、定量测定 ,用双因素设计分析。结果　iNOS的表达主要见于浸润在固有层的炎性细胞的胞浆中。Hp密度对iNOS... 目的　探讨Helicobacterpylori(Hp)相关性胃炎中Hp密度、cagA基因对胃黏膜iNOS表达的影响。 方法　免疫组化技术对iNOS进行定位、定量测定 ,用双因素设计分析。结果　iNOS的表达主要见于浸润在固有层的炎性细胞的胞浆中。Hp密度对iNOS表达有影响 (P <0 .0 0 0 1) ,cagA+ 和cagA-组iNOS表达有差别 (P =0 .0 0 0 4 ) ,且二者对iNOS的表达有交互作用 (P =0 .0 0 4 6 )。在cagA+ 层内 ,各密度组间iNOS的表达有差别 (P <0 .0 0 0 1) ,随着密度的增高 ,iNOS表达水平增高 :3级较 2级组iNOS表达水平明显增高 [(16 1.35± 6 5 .13)vs(119.5 3± 2 8.12 ) ,P =0 .0 0 13],2级较 1级组iNOS表达水平高 ,且有统计学意义 [(119.5 3± 2 8.12 )vs (78.4 0± 2 7.18) ,P =0 .0 2 36 ];而在cagA-层内 ,随着密度的增高 ,各密度组间iNOS的表达水平有增高趋势 ,无统计学差异 [(6 0 .70± 13.0 7)vs(75 .75± 5 .32 )vs (76 .5 0± 19.17) ,P =0 .2 10 8]。在同一密度层内 ,cagA+ 与cagA-组iNOS表达有差异 :1级层内二者差别无显著性 [(78.4 0± 2 7.18)vs (6 0 .70± 13.0 7) ,P =0 .894 8],2级层内cagA+ 组较cagA-组iNOS表达增高 [(119.5 3± 2 8.12 )vs (75 .75± 5 .32 ) ,P =0 .0 0 0 1],3级层内cagA+ 展开更多
关键词 INOS表达 胃黏膜 增高 CAGA基因 胃炎 胞浆 幽门螺杆菌(Hp) 水平 密度 级别
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旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究 被引量：3
5
作者 马鸣旺 张志兰 +1 位作者 申丽洁 董明治 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期916-918,共3页
目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及... 目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa^10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。 展开更多
关键词 旋毛虫成虫 虫体可溶性抗原 表面抗原 排泄分泌抗原
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过表达RFX1对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响 被引量：1
6
作者 程凯 张亚萍 +1 位作者 曹丽 张晓延 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1021-1025,共5页
目的:探讨过表达调节因子X1基因(regulatory factor X1,RFX1)对神经胶质瘤细胞株F98细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:用慢病毒转染法将RFX1转染到F98细胞,构建过表达RFX1的F98细胞株(F98-RFX1组),同时设立空质粒对照组(F98-... 目的:探讨过表达调节因子X1基因(regulatory factor X1,RFX1)对神经胶质瘤细胞株F98细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:用慢病毒转染法将RFX1转染到F98细胞,构建过表达RFX1的F98细胞株(F98-RFX1组),同时设立空质粒对照组(F98-Vector组)和正常培养组(F98组)。用计数法观察过表达RFX1对各组F98细胞增殖的影响,用AnnexinV/PI染色法流式细胞术检测过表达RFX1对F98细胞凋亡的影响,用Transwell小室法检测过表达RFX1对F98细胞侵袭能力的影响。结果:成功建立过表达RFX1胶质瘤F98细胞株。过表达RFX1组胶质瘤F98细胞的增殖能力显著低于F98组[48 h:(12.08±2.17)×10~4/ml vs(23.67±4.51)×10~4/ml,P<0.05]和F98-Vector组[96 h:(8.17±0.31)×10~4/ml vs(18.58±1.18)×10~4/ml;P<0.05];过表达RFX1组细胞的凋亡水平明显上升[(21.89±2.33)%vs(3.38±1.39)%、(10.42±1.83)%,P<0.05];过表达RFX1组细胞侵袭能力显著下降[(33.3±7.99)vs(56.5±13.9)、(60.6±11.8)个,P<0.01]。结论:RFX1可以调控增殖和侵袭相关基因的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力、促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 恶性胶质瘤 F98细胞 调节因子X1(RFX1) 增殖 侵袭 凋亡
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医学实验技术专业医学微生物学教学改革探索 被引量：2
7
作者 郝燕 郑计梅 +1 位作者 原素梅 高艳萍 《中国继续医学教育》 2021年第26期1-4,共4页
课程建设影响着人才培养的方向,针对我院新开设的医学实验技术专业培养目标,医学微生物学课程进行了系列改革,主要包括两大方面,教学内容与考核方式的改革。教学内容的改革分为两部分,理论与实验教学内容的改革,理论主要涉及绪论课时增... 课程建设影响着人才培养的方向,针对我院新开设的医学实验技术专业培养目标,医学微生物学课程进行了系列改革,主要包括两大方面,教学内容与考核方式的改革。教学内容的改革分为两部分,理论与实验教学内容的改革,理论主要涉及绪论课时增加,教学内容模块化,教学手段多样化;实验教学内容的改革,包括实验内容综合性、设计性、连续性与模块化。考核方式改革多样化则由过程性评价与终结性评价相结合,分别占总成绩的30%和70%,极大地提高了学生及格率。因此,围绕专业发展目标,优化教学内容,多种教学方法手段使用,可以提高学生学习兴趣,提高教学质量。 展开更多
关键词 医学实验技术 医学微生物学 教学改革 课程思政 模块化教学 对分易 教育
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多交叉置换扩增结合纳米生物传感器检测伊氏李斯特菌的方法建立
8
作者 李慧 王毅 +1 位作者 王艳 叶长芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期605-612,共8页
目的应用多交叉置换扩增技术结合纳米生物传感器(multiple cross displacement amplification coupled with gold nanoparticle-based lateral flow biosensor,MCDA-LFB)建立一种快速、特异和灵敏的伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii,L.iv... 目的应用多交叉置换扩增技术结合纳米生物传感器(multiple cross displacement amplification coupled with gold nanoparticle-based lateral flow biosensor,MCDA-LFB)建立一种快速、特异和灵敏的伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii,L.ivanovii)检测方法,并对该方法进行评价。方法以L.ivanovii种特异性基因smcl为靶标设计引物,对引物进行最佳反应温度、灵敏度和特异性测试,并用模拟样本和实际样本进行评估。结果L.ivanovii-MCDA-LFB的最佳反应温度为64℃。在L.ivanovii和non-L.ivanovii菌种鉴定中,该方法特异性为100%。此外,L.ivanovii-MCDA-LFB在纯培养物和模拟污染粪便样本的灵敏度分别为10 fg/反应和6.8×10^(2) CFU/g。在195份野鼠粪便样本增菌培养物检测中,L.ivanovii-MCDA-LFB检测结果和传统培养法(ISO 11290-1)结果相同,且只需二次增菌液水煮模板即可检出。结论L.ivanovii-MCDA-LFB方法作为一种快速、灵敏和特异的诊断方法可应用于食品、医疗和科研领域。 展开更多
关键词 伊氏李斯特菌 多交叉置换扩增 纳米生物传感器 smcl基因 最低检测限
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不同微课制作方法在医学微生物学教学中的应用 被引量：2
9
作者 李慧 高艳萍 郝燕 《基础医学教育》 2023年第3期231-234,共4页
医学微生物学是医学院校的一门专业基础课程。针对医学微生物学内容枯燥,知识抽象、零碎,记忆点较多等现状,课题组尝试引入与多媒体技术结合并富有短小精悍特点的微课应用于医学微生物学教学中。文章将微课与医学微生物学课程相结合,介... 医学微生物学是医学院校的一门专业基础课程。针对医学微生物学内容枯燥,知识抽象、零碎,记忆点较多等现状,课题组尝试引入与多媒体技术结合并富有短小精悍特点的微课应用于医学微生物学教学中。文章将微课与医学微生物学课程相结合,介绍了微课常见的一些简单制作方法,提出应根据教学内容选用不同方法来制作微课,以此提高教学效果。 展开更多
关键词 医学微生物学 微课 教学改革
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