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刚地弓形虫热休克蛋白70编码基因的克隆表达及生物信息学分析 被引量：4
1
作者 殷丽天 武云香 +3 位作者 王海龙 孟晓丽 刘红丽 殷国荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第12期1291-1294,共4页
目的克隆并表达刚地弓形虫热休克蛋白70（TgHsp70）编码基因,并对重组TgHsp70（rTgHsp70）的抗原表位进行生物信息学分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA,RT-PCR扩增TgHsp70编码基因,插入原核表达质粒pET30a（＋）中,转化... 目的克隆并表达刚地弓形虫热休克蛋白70（TgHsp70）编码基因,并对重组TgHsp70（rTgHsp70）的抗原表位进行生物信息学分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA,RT-PCR扩增TgHsp70编码基因,插入原核表达质粒pET30a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blot进行检测,并采用相关生物信息学软件对重组蛋白结构和表位特征进行分析。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出495bp的TgHsp70部分编码基因,重组表达质粒pET30a（＋）/TgHsp70经PCR和双酶切鉴定构建正确;目的基因在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达,rTgHsp70相对分子质量约18000,其能被兔抗弓形虫血清识别;rTgHsp70存在多个功能位点及潜在的抗原决定簇。结论已在原核表达系统中高效表达了RH株TgHsp70,该重组蛋白有多个抗原表位,具有抗原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 弓形虫 热休克蛋白质类 原核细胞 基因表达 抗原性 生物信息学
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